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成兴井, 陈慧红, 吴欣欣. E-test法检测82株念珠菌体外抗真菌药物活性. 2013, 28(10): 930-932[]  
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E-test法检测82株念珠菌体外抗真菌药物活性
成兴井1, 陈慧红1, 吴欣欣2
1. 浙江省台州市中心医院,浙江 台州 318000
2. 浙江省台州医院路桥院区,浙江 台州 318000

成兴井,男,1982年生,主管技师,主要从事临床检验工作。

陈慧红,联系电话:0576-88536113。

摘要
目的

探讨卡泊芬净、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B对临床常见念珠菌的体外抗菌活性。

方法

应用E-test法对82株念珠菌进行药物敏感性试验。

结果

82株念珠菌对卡泊芬净、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B的最低抑菌浓度(MIC)90值依次为0.5、1、8、48、0.094、0.19 μg/mL。11株光滑念珠菌对上述6种抗真菌药物的MIC50、MIC90值分别依次为0.032、0.19;1、16;>32、>32;48、128;0.032、0.032;0.19、0.25 μg/mL。

结论

卡泊芬净在体外较其他常用唑类抗真菌药物有更高的抗菌活性,尤其是对光滑念珠菌。

关键词: 念珠菌属; E-test法; 抗真菌药物
中图分类号:R446.5 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)10-930-03
Abstract
Keyword:
引言

近年来随着临床上广谱抗菌药物的大量使用以及侵入性治疗的开展,念珠菌感染呈增多趋势。虽然抗真菌药物与20世纪相比,已经让我们有更多选择,但是耐药念珠菌的出现让我们再次进入了困境。耐药念珠菌一旦产生,可导致治疗失败,后果极为严重。因此,临床对真菌药物敏感性的检测越来越重视。为了解常用抗真菌药物对念珠菌属的敏感性,指导临床合理使用抗真菌药物,现对台州市中心医院2010年9月至2011年12月临床标本中分离出的82株真菌进行菌种鉴定和药物敏感性分析。

材料和方法
一、菌株

所有菌株分离自台州市中心医院2010年9月至2011年12月临床送检的血液、脑脊液、胸水等无菌体液标本。其中白念珠菌44株、光滑念珠菌11株、热带念珠菌10株、近平滑念珠菌13株、季也蒙念珠菌4株,共82株。菌株采用法国生物梅里埃公司Vitek 60 YBC卡进行鉴定。

二、抗真菌药物

6种抗真菌药物的E-test 试纸条为瑞典 AB Biodisk 公司产品。浓度范围:卡泊芬净0.002~32 μg/mL、伏立康唑0.002~32 μg/mL、伊曲康唑0.002~32 μg/mL、氟康唑0.016~256 μg/mL、氟胞嘧啶0.002~32 μg/mL、两性霉素B 0.002~32 μg/mL。

三、培养基

药物敏感性试验采用含RPMI-1640(Sigma公司)、3-吗啉丙磺酸(Sigma公司)、2%葡萄糖的E-test专用培养基。

四、E-test法

纯化菌种,制备成浊度为0.5麦氏浊度的菌悬液,均匀涂布于药物敏感性专用培养基上,平板干燥15 min后将6种E-test试纸条贴于培养基上,放置于35 ℃培养48 h,在抑菌环与纸条上药物浓度刻度交界处读取最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations, MIC)值。结果按美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)M27-A抗真菌药物敏感性试验标准判定:氟康唑MIC≥8 μg/mL为敏感、8~64 μg/mL为剂量依赖敏感、≥64 μg/mL为耐药;氟胞嘧啶MIC≤4 μg/mL为敏感、8~16 μg/mL为中介、≥32 μg/mL为耐药;两性霉素B MIC≤2 μg/mL为敏感。

五、质量控制

每批试验同时用近平滑念珠菌(ATCC 22019)、克柔念珠菌(ATCC 6258)、白念珠菌(ATCC 90028)进行质量控制,结果均在可接受的范围内。6种抗真菌药物可接受的MIC范围见表1:

表1 6种抗真菌药物可接受的MIC范围(μg/mL)
结果
一、抗真菌药物对念珠菌的MIC

6种抗真菌药物对82株念珠菌的MIC50、MIC90检测的结果见表2:

表2 6种抗真菌药物对82株念珠菌的体外抗菌活性(μg/mL)

82株念珠菌对卡泊芬净、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B的MIC90值依次为0.5、1、8、48、0.094、0.19 μg/mL。11株光滑念珠菌对上述6种抗真菌药物的MIC50、MIC90值分别依次为0.032、0.19;1、16;>32、>32;48、128;0.032、0.032;0.19、0.25 μg/mL。

二、3种抗真菌药物对念珠菌的累积MIC分布

95.3%、93.8%、85.4%的念珠菌分别能被1 μg/mL的卡泊芬净、伏立康唑、伊曲康唑所抑制;以上3种抗真菌药物的MIC90分别为0.5、1、8 μg/mL。3种抗真菌药物对82株念珠菌的累积MIC分布(%),计算特定MIC值的敏感菌株数占总菌株的百分率见表2:

表2 3种抗真菌药物对82株念珠菌的累积MIC分布(%)
讨论

目前临床治疗白念珠菌感染首选氟康唑,他是一种新型三氮唑类高效广谱抗真菌药,具有水溶性大、半衰期长、蛋白结合率低、在组织和体液中分布广泛等特点,对酵母样真菌有很好的抗菌效应[ 1],但近年来也出现不少对氟康唑耐药的菌株,常见于天然耐药的克柔念珠菌和高耐药率的光滑念珠菌[ 2]。本研究显示了82株念珠菌对卡泊芬净、伏立康唑、伊曲康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑的MIC90值依次为0.5、1、8、0.094、0.19、48 μg/mL。其中氟康唑的耐药率最高,MIC90值为48 μg/mL,远高于其他抗真菌药物。体外药物敏感性试验结果也显示,念珠菌对抗真菌药物的敏感性间种差异较大。光滑念珠菌对这6种抗真菌药物的敏感性除卡泊芬净外,明显低于其他念珠菌。

两性霉素B对大多数真菌的治疗效果较好,但由于毒副作用严重,临床上应用受到限制[ 3]。氟胞嘧啶抗真菌谱较窄且单独使用时易诱导真菌对其产生耐药性,故严重的念珠菌感染应用氟胞嘧啶与两性霉素B联合使用[ 4]。

卡泊芬净具有广谱抗真菌活性,对酵母、丝状真菌、双相真菌均有效[ 5]。本研究结果表明,卡泊芬净对82株念珠菌的抗菌活性都比较强,其MIC90总几何均数为0.5 μg/mL,低于伏立康唑、伊曲康唑和氟康唑。对白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌为杀菌活性,MIC90为0.125、0.19、0.25 μg/mL。对近平滑念珠菌也有效,MIC90为1 μg/mL。此研究与国内李岷等[ 6]的研究相符。以1 μg/mL为标准卡泊芬净累积MIC分布为95.3%,均高于伏立康唑(93.8%)和伊曲康唑(85.4%)。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 骆俊, 李光辉. 念珠菌耐药机制研究现状及进展[J]. 中国感染与化疗杂志, 2011, 11(6): 471-473. [本文引用:1]
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