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高勇, 韩明锋, 李秀勇, 陈晓枫, 唐振华. 阜阳市2011年手足口病实验室检测结果分析. 2013, 28(9): 796-800[GAO Yong, HAN Mingfeng, LI Xiuyong, CHEN Xiaofeng, TANG Zhenhua. Analysis on the laboratory determination results of hand-foot-mouth disease in Fuyang in 2011. 上海检验医学, 2013, 28(9): 796-800]  
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阜阳市2011年手足口病实验室检测结果分析
高勇1, 韩明锋2, 李秀勇3, 陈晓枫4, 唐振华1
1.阜阳市第二人民医院检验科,安徽 阜阳 236015
2.阜阳市第二人民医院呼吸科,安徽 阜阳 236015
3.阜阳市第二人民医院肾病科,安徽 阜阳 236015
4.阜阳市第二人民医院应急1科,安徽 阜阳 236015
摘要
目的

对手足口病患儿的实验室检测结果进行分析,了解阜阳市手足口病患儿肠道病毒的感染状况及实验室常规检验项目的检测结果,为临床诊断治疗及预防控制提供参考。

方法

收集497例(重症型102例、普通型395例)手足口病住院患儿的咽试子和疱疹液样本,应用实时荧光聚合酶链反应 (RT-PCR)法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)以及柯萨奇病毒A组16型(CA16) 特异性RNA。同时检测白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB) 、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)及血糖(Glu)并进行分析。

结果

497例手足口病患儿中EV、EV71、CA16感染的阳性例数(阳性率)分别为339例(68.21%)、286例(57.55%)、22例(4.43%)。102例重症手足口病患儿中EV71阳性率最高[95例(93.14%)];男、女性患儿间EV、EV71、CA16阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。3岁以下患儿为高风险年龄组,497例手足口病患儿中有398例(80.08%)≤3岁。102例重症型患儿有96例(94.12%)≤3岁;其中EV71阳性率最高,为94.79%(91/96)。重症手足口病患儿中WBC增高80例(78.43%)、CRP增高81例(79.41%)、Glu增高52例(50.98%)、AST增高64例(62.75%);普通型患儿WBC增高70例(17.72%)、CRP增高87例(22.03%)、Glu增高26例(6.58%)、AST增高78例(19.75%);重症型阳性率明显高于普通型(P<0.01)。CK-MB、LDH水平在手足口病普通型及重症型患儿中均增高,且阳性率明显高于其他常规检验项目。

结论

手足口病患儿感染的肠道病毒主要为EV71病毒,而且是引起重症型病例的主要病原体,3岁以下婴幼儿应加强监测。对重症型病例应做到早期识别,减少重症和死亡的发生。

关键词: 手足口病; 逆转录聚合酶链反应; 肠道病毒; 柯萨奇病毒
中图分类号:R725.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)09-0796-05
Analysis on the laboratory determination results of hand-foot-mouth disease in Fuyang in 2011
GAO Yong1, HAN Mingfeng2, LI Xiuyong3, CHEN Xiaofeng4, TANG Zhenhua1
1. Department of Clinical Laboratory, the Second People's Hospital of Fuyang, Anhui Fuyang 236015, China
2.Department of Respiration, the Second People's Hospital of Fuyang, Anhui Fuyang 236015, China
3. Department of Nephrology, the Second People's Hospital of Fuyang, Anhui Fuyang 236015, China
4.Department of Emergency I, the Second People's Hospital of Fuyang, Anhui Fuyang 236015, China
Abstract
Objective

To analyze the laboratory determination results of hand-foot-mouth disease to reveal the enterovirus infection and the results of routine determination items in children with hand-foot-mouth disease at Fuyang, and to provide the reference for diagnosis, treatment, prevention and control.

Methods

Both throat swab and vesicle fluid were collected from 497 children with hand-foot-mouth disease (severe case: 102 cases and common case: 395 cases). Specific RNA of enterovirus primer (EV), enterovirus 71 (EV71) and coxsackievirus A16(CA16)were detected by real-time fluorescence polymerase chain reaction (RT-PCR). Simultaneously, white blood cell (WBC),C reactive protein(CRP),creatine kinase MB isoenzyme(CK-MB), aspartate aminotransferase (AST),lactic dehydrogenase (LDH) and glucose (Glu) were determined, and the results were analyzed.

Results

Among the 497 children, 339 cases were positive for EV, 286 cases were positive for EV71, and only 22 cases were positive for CA16.The positive rates were 68.21%, 57.55% and 4.43%, respectively. In the 102 hand-foot-mouth disease severe cases,EV71 positive rate was the highest(95 cases, 93.14%). There was no statistical significance in EV, EV71 and CA16 positive rates between boys and girls (P> 0.05).The age distribution was mainly in the group under 3-year-old (398 cases, 80.08%). In the group under 3-year-old, there were 96 severe cases (94.12%), and the EV71 positive rate was the highest (94.79%, 91/96). The increasing cases of WBC was 80 cases (78.43%),CRP 81 cases (79.41%),Glu 52 cases (50.98%) and AST 64 cases (62.75%) in the severe cases of hand-foot-mouth disease. In the common cases, the increasing cases of WBC was 70 cases (17.72%),CRP 87 cases (22.03%),Glu 26 cases (6.58%) and AST 78 cases (19.75%). The positive rates in the severe cases were higher than those in the common cases (P<0.01). The levels of CK-MB and LDH increased in the common and severe cases of hand-foot-mouth disease,and the positive rates of CK-MB and LDH were obviously higher than the other routine determination items.

Conclusions

The hand-foot-mouth disease appeared in Fuyang in 2011 is mainly related to the EV71 infection, and EV71 is the main pathogen causing the severe cases of hand-foot-mouth disease. The monitoring should be strengthened especially in the group under 3-year-old. The severe cases should be early recognized in order to reduce the occurrence of the severe cases and the death.

Keyword: Hand-foot-mouth disease; Reverse transcription polymerase chain reaction; Enterovirus; Coxsackievirus
引言

手足口病是由多种肠道病毒引起的常见急性传染病,以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状。少数患者可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、神经源性肺水肿和心肌炎循环障碍等,个别重症患儿病情进展快,可导致死亡[ 1]。近几年我国多数地方相继报道了手足口病的流行,尤其2008年3月手足口病疫情在阜阳市爆发[ 2],并出现部分重症及死亡病例。近一两年阜阳市手足口病发病率仍然很高。为进一步探讨该病在阜阳市的发病规律及流行趋势,以更有效地预防和控制该病的爆发流行及重症死亡病例的出现,为临床提供更有力的实验室依据,我们对手足口病患儿的实验室检测结果进行了分析。

材料和方法
一、研究对象及指标

1. 对象

随机收集2011年3月至12月阜阳市第二人民医院感染科、ICU和应急1科收治的手足口病患儿497例,其中男326例,女171例,年龄2个月~12岁,其中普通型患儿395例、重症型患儿102例;≤3岁398例、4~6岁87例、>6岁12例。所有患儿均符合卫生部下发的《手足口病诊疗指南(2010年版)》诊断标准。普通型手足口病诊断依据:手、足、口、臀部皮疹,伴或不伴发热;重症型手足口病(包括危重型病例)诊断依据:在普通型病例基础上出现①神经系统表现、②呼吸系统表现、③休克等循环功能不全表现、④外周血白细胞计数明显增高、⑤高血糖等情况之一者。

2. 观察指标

肠道病毒RNA指标包括肠道病毒(EV)通用型RNA、肠道病毒71型(EV71)RNA以及柯萨奇病毒A组16型(CA16)RNA;实验室常规检验项目包括白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)、C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)及血糖(Glu)。

二、方法

1. 肠道病毒RNA检测

病毒RNA的提取及扩增均采用广州中山达安生物有限公司提供的EV、EV71、CA16核酸检测试剂盒。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测,仪器为ABI7500定量聚合酶链反应(PCR)扩增仪(美国ABI公司),按照试剂说明书严格进行操作。首先进行样本的EV、EV71、CA16 RNA提取。将已提取好的RNA分别加入上述3种检测试剂的反应液中,将反应管放入PCR扩增仪中进行扩增。反应结束后,根据分析图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值,点击Analysis获得分析结果。在阳性和阴性质控品同时满足质量控制的条件下,检测样本呈典型S型扩增曲线且Ct值≤34.9(EV)、≤35.1(EV71型)、≤34.8(CA16型),则判定样本为病毒阳性。

2. 实验室常规检测项目

血常规(WBC、Neu)检测采用Sysmax E2100五分类血液分析仪。CRP、CK-MB、AST、LDH及Glu均采用申能德赛公司试剂;仪器为HITACHI 7600-020全自动生化分析仪。均由专人操作,并严格按照试剂说明书进行检测。

三、统计学方法

所有数据均采用EXCEL 2003和SPSS13.0软件进行处理。计量资料中正态分布数据以 ±s表示,组间均数差异使用 t检验;偏态分布数据采用中位数(范围)表示,组间中位数(范围)比较采用Wilcoxon 秩和检验。计量资料两组率的比较采用χ2检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、肠道病毒RNA检测结果

1.497例手足口病患儿中EV、EV71、CA16阳性病例分别为339例、286例、22例,阳性率分别为68.21%、57.55%、4.43%。102例重症型手足口病患儿中EV71阳性95例,阳性率为93.14%;CA16阳性仅1例,阳性率为0.98%。102例重症型患儿中死亡11例,其EV71 RNA均为阳性、CA16 RNA均为阴性。

2. 497例手足口病患儿中有398例(80.08%)≤3岁,EV、EV71、CA16阳性率分别为69.85%(278/398)、59.8%(238/398)、5.03%(20/398)。EV、EV71、CA16阳性患儿年龄分布见图1:

图1 EV、EV71和CA16阳性患儿年龄分布

3. 497例手足口病患儿中男性326例、女性171例,男∶女=1.91∶1,男性比例略高于女性。男性患儿中EV、EV71、CA16阳性率分别为68.10%、59.51%、3.99%,其中重症型患儿为68例,占20.86%。女性患儿中EV、EV71、CA16阳性率分别为68.42%、53.80%、5.26%,其中重症型患儿为34例,占19.89%。男、女患儿间EV、EV71、CA16阳性率比较差异均无统计学意义(χ2值分别为0.005、1.496、0.431, P均>0.05)。见表2:

表2 不同性别手足口病患儿EV、EV71、CA16阳性分析[例(%)]
二、实验室常规检验项目检测结果

1. 血常规检测中WBC增高150例(30.18%),一般呈中度升高[(11.0~14.4)×109/L],Neu(%)升高者206例,其余患儿WBC正常或个别偏低。重症型患儿中WBC及Neu(%)增高病例的阳性率分别为78.43%、86.27%,远高于普通型(17.72%、29.87%)( P<0.01);其检测值也明显高于普通型( P<0.01)。见表3、4。

2. CRP增高168例(33.8%),重症型患儿中CRP增高病例的阳性率(79.41%)远高于普通型(22.03%)( P<0.01),其检测值也明显高于普通型患儿( P<0.01)。见表3、4。

3.绝大多数手足口病患儿尤其是普通型AST水平增高不明显,阳性率较低(19.7%);而CK-MB、LDH水平在普通型及重症型患儿中均有较大程度的增高,阳性率分别为80.25%、81.01%和98.04%、97.06%,明显高于其他常规检测项目。重症型患儿3种心肌酶的水平及阳性率均明显高于普通型( P<0.01)。见表3、4。

4. Glu增高患儿占15.69%,其中重症型患儿Glu增高的阳性率(50.98%)明显高于普通型(6.58%, P<0.01);其检测值也明显高于普通型( P<0.01)。一般手足口病患儿Glu水平介于5.3~14.2 mmol/L之间,部分普通型手足口病患者出现Glu降低,为2.1~3.4 mmol/L。见表3、4:

表3 497例手足口病患儿实验室常规检验项目检测结果分析
表4 497例手足口病患儿实验室常规检验项目的检出例数及阳性率[例(%)]
讨论

手足口病是一种严重威胁儿童健康的常见传染病,阜阳市2008年3月手足口疫情暴发,并出现了部分死亡病例,至2011年手足口病仍在流行和持续。阜阳市第二人民医院为阜阳市定点收治手足口疾病的医院。为了解阜阳市手足口病近期的流行特征及主要病原体,本研究对我院2011年3月~12月部分手足口病患者的实验室检测结果进行综合分析,为今后完善和调整手足口病防治资料提供参考。手足口病为常见急性传染病,可由多种肠道病毒感染引起,主要病原体是EV71和CA16。497例手足口病患儿中EV71、CA16阳性率分别为57.55%、4.43%。其中102例重症型手足口病患儿中EV71阳性有95例,阳性率为93.14%;而CA16阳性仅1例,阳性率为0.98%。重症病例中死亡病例11例,EV71阳性率为100%。这说明我市近一年多手足口病感染的主要病原体为EV71病毒;且引起手足口病重症病例的主要病原体也是EV71病毒,这与卜戈等[ 2]、韩建康等[ 3]及张群等[ 4]的报道基本一致。同时手足口病患儿中CA16的阳性率仅为4.43%,而伏瑾等[ 5]报道引起手足口病的CA16、EV71的阳性率之比为2.37∶1。这说明引起手足口病感染的主要病原体存在一定的地区和时间差异。 手足口病患儿有明显的年龄分布特点,在手足口病患儿中3岁以内婴幼儿发病率最高(80.08%),且最容易发展为重症型手足口病。这可能与婴幼儿自身免疫机能未发育完善免疫力低下有关。497例手足口病患者中男女比例为1.91∶1,男性患儿发病率稍高于女性,男、女患儿EV、EV71、CA16的阳性率差异无统计学意义。

由于手足口病为病毒感染所致,因此大多数病例WBC计数正常。本研究WBC增高的阳性率为30.18%,而在重症手足口病患儿中WBC增高的阳性率为78.43%。这可能是由于机体处于应激状态,周围WBC释放增多,Neu也同步增高;另外可能因为重症病例较多合并细菌感染,因此CRP也有不同程度增高。从本研究手足口病患儿心肌酶检测结果来看,CK-MB、LDH在普通型及重症型手足口病患者中均有不同程度的增高,提示手足口病患儿可能存在一定的心肌损伤,但LDH在体内分布较广,特异性差,其活力增高可有非心脏因素影响;CK-MB的临床特异性和灵敏度不尽如人意。因此要确认手足口病患儿是否存在心肌损伤还需结合心电图、心肌肌钙蛋白及临床指征进一步分析[ 6]。本研究重症型手足口病患儿3种心肌酶增高幅度远高于普通型患儿。因此可将心肌酶作为手足口病合并心肌损伤的临床指标之一,同时也可以作为观察病情变化及判断预后的指标之一。

血糖在手足口病普通型患儿中基本正常,增高者仅26例,占6.58%。而在102例重症型手足口病患儿中有52例(50.98%)增高。部分普通型手足口病患儿可出现Glu降低(2.1~3.4 mol/L)。血糖增高常提示病情加重,手足口病合并血糖增高的机制可能多与脑干损害和患者危重情况下应激增强有关。在应激情况下,患者交感神经高度兴奋,儿茶酚胺分泌增多,使得血糖在短期内明显增高,出现应激性高血糖[ 7]。而且有研究表明,大多危重患儿血糖升高程度与病情轻重及预后有很高的相关性。病情越危急,应激越强,其血糖升高越明显,预后越差,因而血糖的变化可作为常规判断病情和预后的辅助指标。血糖偏低可能是由于患儿口腔内疱疹或溃疡,加上精神差,呕吐、食欲不振等影响进食所致。另外医生在处理高血糖时,注意血糖可能快速下降,应防止出现低血糖而损伤脑细胞。

综上所述,阜阳市2011年手足口病患儿主要由EV71病毒感染所致,CA16感染者所占比例较少,且在手足口病患儿中以3岁以内男性婴幼儿发病率较高。同时重症病例出现WBC、CRP及血糖增高,合并心肌损伤者占相当比例。因此应加强健康教育的力度,掌握预防措施密切观察儿童,出现症状及时就诊治疗,减少重症及死亡病例的发生。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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[5] 伏瑾, 张艳玲, 孙春荣, 等. 实时RT-PCR检测159例手足口病患儿样本中肠道病毒的结果分析[J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 2009, 23(6): 488-490. [本文引用:1]
[6] 陈莎, 王旭东, 黄永国, 等. 高敏心肌肌钙蛋白T、心肌酶与心电图在儿童手足口病感染中的应用[J]. 检验医学, 2012, 27(2): 126-128. [本文引用:1]
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