德国西门子公司的ADVIA Centaur CP全自动化学发光分析仪检测B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP)的原理是基于直接化学发光技术的全自动双抗夹心免疫法。乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝血浆是该仪器检测试剂推荐用于检测BNP的样本类型。但在临床工作中,我们发现外单位送检到本实验室的血液样本中经常使用枸橼酸钠抗凝或血清样本,而且在某些特殊情况下,如严重失血患者,可采集的样本量过少,此时了解能否用其他血液样本,如柠檬酸钠抗凝血浆或血清样本代替EDTA抗凝血浆样本进行BNP检测就显得比较重要。因此,我们探讨了柠檬酸钠抗凝血浆或血清样本对同一份血液样本BNP测定结果的影响,为做好本实验室分析前质控及临床应用提供指导。

1.对象 随机选取天津市胸科医院门诊及住院患者共60 例(包括冠心病50例、慢性阻塞性肺疾病3例、肺源性心脏病3例、肺阴影待查3例、肺纤维化1例),其中男35例,女25例,年龄35~87岁。

2.仪器与试剂 ADVIA Centaur CP全自动化学发光免疫分析仪(德国西门子公司)及配套试剂(批号157)、校准品(批号C3840LA、C3840HA)、质控物(批号816261423)。严格按照说明书进行操作。

3.方法 采集受试者静脉血约6 mL,分别注入含EDTA-K₂抗凝剂(EDTA抗凝组)、3.2%柠檬酸钠抗凝剂(柠檬酸钠抗凝组)及含惰性分离胶和促凝剂(血清组)的真空采血管(北京积水创格公司产品)中,每管约2 mL。抗凝样本混匀后900× g离心10 min分离血浆,无抗凝剂的样本待约30 min血液凝固、血凝块回缩后,同样离心条件分离血清。立即上机测定BNP水平。测定样本前先测定质控物,结果在控,确保仪器性能稳定可靠。所有数据均重复平行测定2次取平均值。

4.统计学方法 应用SPSS 11.5及 MedCalc 11.4.2.0 统计软件进行数据处理。正态性检验采用 K-S检验,偏态分布资料以中位数(四分位间距)表示。数据比较采用K-相关样本秩和检验(Friedman法)及两相关样本秩和检验(Wilcoxon法)。偏倚分析采用Bland-Altman方法,以2 种血液样本测定BNP结果的均值作为X轴,(差值/均值)%作为Y轴;回归分析采用Passing-Bablok回归,回归线性检测用Cusum法;采用Spearman相关分析法分析2组数据间的相关性。 P<0.05表示差异有统计学意义。

1.数据分布 经 K-S检验,BNP数据均呈偏态分布( P<0.05)。EDTA抗凝组、柠檬酸钠抗凝组与血清组的BNP测定结果区间分别为13.00~3 966.00、6.00~2 661.00、3.00~1 904.00 pg/mL。

2.不同血液样本对BNP测定结果的影响 Friedman检验及Wilcoxon检验的统计结果显示不同血液样本组间BNP水平差异有统计学意义( χ²=120.000, P<0.05);EDTA抗凝组、柠檬酸钠抗凝组和血清组BNP水平分别为199.50(65.00~565.50)、117.50(43.50~323.75)、62.00(24.50~131.00) pg/mL,3组之间两两比较差异均有统计学意义( Z值分别为-6.736、-6.736、-6.736, P均<0.05)。Bland-Altman偏倚图显示EDTA抗凝组与柠檬酸钠抗凝组、EDTA抗凝组与血清组BNP测定结果比对的平均偏倚分别为51.0%、111.3%。

3.不同血液样本组BNP结果的回归分析 Passing-Bablok回归分析显示,不同样本组BNP结果的回归方程分别为 Y_柠檬酸钠=0.571 4 X_EDTA+3.642 9, Y_血清=0.214 7 X_EDTA+5.269 9,回归线性Cusum检验证实偏倚无统计学意义( P>0.05)。

4.不同血液样本组BNP结果的相关性比较 Spearman相关分析显示,EDTA抗凝组与柠檬酸钠抗凝组、EDTA抗凝组与血清组BNP结果之间呈良好的正相关关系[相关系数( r)分别为0.987、0.954, P均<0.05]。

BNP是主要由心室肌细胞合成和分泌的神经肽类激素,具有利钠、利尿、扩血管、拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统的作用,作为心功能标志物,在各种心血管疾病的诊断、治疗及预后等方面有重要指导意义^{[ 1, 2, 3, 4]},受到临床的广泛关注。

EDTA抗凝血浆是ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪配套试剂推荐用于BNP检测最适宜的样本。本研究观察了临床常用的其他血液样本对在ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪上测定BNP的影响。研究结果显示不同的血液样本对BNP检测结果有一定的影响。相对于EDTA抗凝组而言,柠檬酸钠抗凝组、血清组的BNP测定结果偏低,这可能与血清样本中的异嗜性抗体与试剂免疫球蛋白发生反应从而干扰体外诊断免疫测定有关^{[ 5]},而柠檬酸钠抗凝剂影响BNP检测结果的原因还有待于进一步研究。因此,在临床工作中进行BNP测定时,建议使用仪器检测试剂推荐的抗凝剂,以避免样本中测得BNP值偏低而干扰疾病的诊疗。由于3组样本BNP结果之间呈良好的正相关关系,在某些特殊情况下,如严重失血患者,样本量过少时,为减少取血量或取血次数,可以通过患者的柠檬酸钠抗凝血浆或血清的BNP水平变化趋势反映出EDTA抗凝血浆BNP水平的变化,也可以根据回归方程估计出EDTA抗凝血浆BNP水平,从而为临床医师提供准确的BNP水平监测信息。

近几年,国内外也有就不同血液样本对BNP测定结果影响的报道。有文献报道,Abbott I2000SR仪器检测血清BNP水平低于EDTA抗凝血浆BNP水平,且约低25%,与本研究结果一致^{[ 6]};还有研究发现,Bayer Centaur检测仪器用枸橼酸盐作为抗凝剂的血浆或血清样本测得BNP水平分别比EDTA抗凝血浆低60%、48%^{[ 7]}。至于不同样本类型对检测结果造成差异的原因还有待于进一步探讨。因此, 临床实验室应该考虑到分析前因素之一的不同血液样本类型对测定结果的影响。在BNP样本采集、检测时应注意使用仪器检测试剂所推荐的样本类型,以保证检测结果的准确性和可比性,为做好分析前质控奠定扎实的基础,为临床提供循证医学可靠的诊断依据。

总之,在本研究实验条件下,不同的血液样本类型对BNP检测结果有一定的影响,应尽量采用仪器检测试剂推荐的样本类型,以保证临床检验结果的准确性和可比性,满足临床诊疗需要。在某些特殊情况下,虽不能用柠檬酸钠抗凝血浆或血清样本BNP测定结果直接代替EDTA抗凝血浆样本,但可以通过患者的柠檬酸钠抗凝血浆或血清的BNP水平变化趋势反映出EDTA抗凝血浆BNP水平的变化,也可以根据回归方程估计出EDTA抗凝血浆BNP水平,从而为临床应用提供一定的指导。