引用本文
余红, 朱卫, 崔洋洋, 阙金亚. ELISA检测梅毒抗体复检范围设计探讨. 2013, 28(4): 312-314
YU Hong, ZHU Wei, CUI Yangyang, QUE Jinya. The investigation on the retesting range of TPAb sample detected by ELISA. Labratory Medicine, 2013, 28(4): 312-314  
Permissions
Copyright©2013, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
ELISA检测梅毒抗体复检范围设计探讨
余红, 朱卫, 崔洋洋, 阙金亚
阜宁县人民医院,江苏 阜宁 224400

作者简介：余红,女,1971年生,学士,副主任技师,主要从事免疫学检验工作。

摘要

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测梅毒抗体（TPAb）复检范围的设计。方法 收集ELISA初检梅毒吸光度（A）>0．08的标本1 257例,用相同厂家、相同批号的试剂进行复检,同时做双孔。复检A值仍>0．14者用明胶颗粒凝集试验（TPPA）进行确认。对结果进行统计分析,设计一个合适的标本复查范围。结果 根据ELISA初检梅毒标本A值结果,将标本分为7组：0．08~0．14、0．15~0．30、0．31~0．60、0．61~0．90、0．91~1．20、1．21~2．00、 >2．00。ELISA复检符合率分别为16．6％（37／223）、21．6％（56／259）、32．0％（66／206）、50．5％（100／198）、78．0％（99／127）、94．8％（147／155）、100．0％（89／89）。TPPA与ELISA复检符合率分别为0．0％（0／37）,3．6％（2／56）、22．7％（15／66）、38．0％（38／100）、80．8％（80／99）、93．2％（137／147）、96．6％（86／89）。结论 在规范操作的前提下,ELISA检测TPAb的复检范围设定A值在0．14~1．20范围内,这样既能保证检验结果的准确性,又能避免人力和试剂的浪费。

关键词: 复检范围; 梅毒抗体; 酶联免疫吸附试验; 明胶颗粒凝集试验
中图分类号:R446．61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640（2013）04-312-03
The investigation on the retesting range of TPAb sample detected by ELISA
YU Hong, ZHU Wei, CUI Yangyang, QUE Jinya
Funing People#cod#x02032;s Hospital,Jiangsu Funing 224400, China
Abstract

Objective To investigate the retesting range of anti-treponema pallidum antibody （TPAb） sample detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）． Methods A total of 1 257 samples were collected in the first TPAb testing with absorbance （A） value > 0．08 by ELISA． They were retested duplicately by the same reagent kit of same lot number． The samples retested withA vaule > 0．14 were comfirmed by treponema pallidum particale agglutination （TPPA） test．The appropriate retesting range was analyzed statistically． Results The samples were classified into 7 groups according to the firstA value by ELISA： 0．08-0．14,0．15-0．30,0．31-0．60,0．61-0．90,0．91-1．20,1．21-2．00 and >2．00． The retesting coincidence rates by ELISA were 16．6％（37／223）,21．6％（56／259）,32．0％（66／206）,50．5％（100／198）,78．0％（99／127）,94．8％（147／155） and 100．0％（89／89）． The coincidence rates by TPPA and retesting by ELISA were 0．0％（0／37）,3．6％（2／56）,22．7％（15／66）,38．0％（38／100）,80．8％（80／99）,93．2％（137／147） and 96．6％（86／89）． Conclusions TheA value of the retesting range by ELISA is considered appropriate from 0．14-1．20 under a standardized laboratory condition．The appropriate retesting range can assure the accuracy of the testing results and can avoid the waste of manpower and reagents．

Keyword: Retesting range; Anti-treponema pallidum antibody; Enzyme-linked immunosorbent assay; Treponema pallidum particale agglutination test
引言

梅毒是由梅毒螺旋体（TP）感染引起的一种慢性全身性疾病,主要通过性传播,也可通过黏膜或破损的皮肤进入人体而形成感染。近年来我国梅毒的发病率呈上升趋势,而梅毒的诊断主要依赖血清学试验,特别是隐形梅毒。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TP抗体（TPAb）,操作方便,价格低廉,结果客观易读,适合大批量标本检测,目前在国内有较多医疗单位使用。但我们在实际工作中发现,此种方法也有诸多因素影响检测结果[ 1]。为防止误诊和出现不必要的医疗纠纷,以往我们采用的方法是只要吸光度（ A）>0．08的标本都要进行复检和做确认试验,这样造成人力和和试剂的极大浪费。故我们根据近一年多来的标本复检结果统计,设计了一个复检范围,既能确保检测结果的准确性,又能避免人力和试剂的浪费。

材料和方法
一、材料

1． 标本来源 2010年1月至2012年2月输血或手术的住院患者15 574例,其中男6 643例,女8 931例。门诊患者2 351例,其中男1 293例,女1 058例。ELISA初检 A>0．08的有1 257例,其中男475例,女782例。

2． 试剂与仪器 ELISA试剂购自英科新创（厦门）公司,明胶颗粒凝集试验（gelatin partical agglutination test,TPPA）试剂购自日本富士株式会社,酶标仪为日本产BIO-RAD Model 680,洗板仪为美国产宝特MultiWashⅡ。

二、方法

严格按操作规程操作,严重溶血或脂血的标本重新抽静脉血,所有的复检标本均重新离心,分离血清或血浆。用同批号相同试剂进行复检,复检标本均做双孔。所用复查标本都进行TPPA以复核确认。（试剂盒说明：临界值=阴性对照 A均值×2．8）。

结果

1、初检 A>0．08的1 257例标本用ELISA复检和TPPA复核确认,结果见表1。

表1 初筛的1 257例标本用ELISA复检和TPPA确认符合率

二、初检 A值在0．08~0．90范围的标本经ELISA复检符合率为29．2％（259／886）,经TPPA确认符合率为6．2％（55／886）。初检 A值在0．08~0．14范围内,无1例TPPA确认阳性。

三、初检 A>0．91的标本经ELISA复检符合率为90．2％（335／371）,经TPPA确认符合率为84．3％（313／371）。

四、初检 A>0．08的1 257例标本用ELISA复检总符合率为47．2％（594／1 257）,经TPPA确认总符合率为29．3％（368／1 257）,ELISA复检阳性标本与TPPA符合率为70．0％（368／594）。凡TPPA确认阳性的标本ELISA复检均为阳性,无1例漏检。

讨论

近一年多的数据统计显示,ELISA初检 A<0．30的482例标本,经ELISA复检只有19．3％（93／482）的符合率,再经TPPA确认只有2例阳性。自2011年1月, ELISA检测TPAb试剂盒均采用两步法,那么就不考虑试剂存在钩状效应,但也不能完全排除低浓度抗体的存在。对于ELISA初检和复检中出现的较多可疑和假阳性标本,可能是操作不当和标本自身原因造成的,如洗涤不彻底、标本分离不完全、标本严重溶血、高胆红素、孔与孔之间的污染等[ 1]。这些标本的 A值往往较低,一般不超过0．90。这类标本可通过重新分离血清或血浆、重新抽血和复检来排除。对于ELISA复检仍阳性,但TPPA结果为阴性的标本,一部分原因是由ELISA自身的局限性造成的,ELISA试剂盒主要选自TP外膜的脂蛋白（相对分子质量为47 000、17 000、15 000、42 000）为分子抗原,用基因重组表达和氨基固相法得到多肽抗原,为使小分子多肽有较好的吸附性,再用人血清白蛋白与之连接,这就增加了意外假阳性抗原位点的可能性[ 3, 4]。另有文献认为,基因重组的TP抗原仅具有一级结构,不具有与天然抗原相同的构象,那么其特异性就不会优于天然TP抗原[ 5];另一部分原因可能由于某些疾病产生的某些干扰物质影响ELISA的准确性,如获得性免疫缺陷综合征、丙型肝炎、麻风、肝硬化、淋巴瘤、生殖器疱疹、Lyme病等[ 6]。

TPPA使用TP毒株制成抗原来致敏明胶颗粒,检测标本中特异性TPAb,其特异性好,优于ELISA,已是目前公认的梅毒确认试验[ 7, 8, 9]。但其敏感性不如ELISA,ELISA中酶具有很好的放大效应。而且TPPA试剂较贵,检测时需将标本做系列稀释,不利于大批量的标本检测。

如果对于初检所有的可疑和阳性标本都复检并经TPPA确认,势必会增加成倍的工作量和试剂的浪费。本研究结果显示, A<0．14的223例标本中无1例TPPA阳性,不需ELISA复检,更不需TPPA确认。 A值在0．15~1．20范围的标本,先经ELISA复检,仍阳性的再用TPPA确认。 A>1．20的标本不需ELISA复检,直接用TPPA进行确认。我们所统计的样本不算是大样本,不能保证无漏诊发生。我们在以后的工作中会进一步探索和总结,尽可能得到准确的结果。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 季育华, 陶义训. 影响酶联免疫吸附试验结果的操作因素[J]. 检验医学, 2006, 21(z1): 47-49. [本文引用:2]
[2] 申静, 元晋江. 常用的梅毒抗体的检测方法[J]. 中华中西医学杂志, 2005, 3(12): 72-73. [本文引用:1]
[3] 边洁. 第三届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C]. 厦门: 中国人民解放军医学科学技术委员会医学检验专业委员会, 2005. [本文引用:1]
[4] 邰平, 王进. ELISA检测梅毒抗体假阳性原因分析及其对策[J]. 江苏预防医学, 2010, 21(2): 56-57. [本文引用:1]
[5] Lafond RE, Lukehart SA. Biological basis for syphilis[J]. Clin Microbiol Rev, 2006, 19(1): 29-49. [本文引用:1] [JCR: 17.313]
[6] 蔺承艳, 袁昌猛. ELISA梅毒检测法中假阳性的观察及结果分析[J]. 中国实验诊断学, 2009, 13(10): 1449. [本文引用:1]
[7] 李文新, 单明华. 酶联免疫吸附试验与其他梅毒血清检测方法的比较[J]. 检验医学, 2006, 21(3): 218. [本文引用:1]
[8] Chen ZQ, Zhang GC, Gong XD, et al. Syphilis in China: results of a national surveillance programme[J]. Lancert, 2007, 369(9556): 132-138. [本文引用:1]
[9] Borelli S, Monn A, Meyer J, et al. Evaluation of a partical gel immunoassay as a screening test for syphilis[J]. Infection, 2009, 37(1): 26-28. [本文引用:1] [JCR: 2.44]