引用本文
丁志祥, 蒋银芬, 周伊兰, 金文涛, 钱高潮. Sysmex UF-1000i尿有形成分分析仪对尿液真菌筛查的临床应用评价. 2013, 28(4): 290-292
DING Zhixiang, JIANG Yinfen, ZHOU Yilan, JIN Wentao, QIAN Gaochao. Evaluation on the clinical application of Sysmex UF-1000i urine formed element analyzer for screening funguria. Labratory Medicine, 2013, 28(4): 290-292  
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Sysmex UF-1000i尿有形成分分析仪对尿液真菌筛查的临床应用评价
丁志祥, 蒋银芬, 周伊兰, 金文涛, 钱高潮
南京中医药大学附属常州市中医医院检验科,江苏 常州 213003

通讯作者：钱高潮,联系电话：0519-89896746。

作者简介：丁志祥,男,1980年生,硕士,主管技师,主要从事临床检验相关研究。

摘要

目的评价Sysmex UF-1000i尿有形成分分析仪（简称UF-1000i）在真菌尿筛查中的临床应用价值。方法 分别测定UF-1000i检测白念珠菌的精密度、线性范围和携带污染率。选择UF-1000i提示类酵母细胞（YLC）阳性样本200例,阴性样本400例,同时做显微镜检查。结果 UF-1000i检测白念珠菌的精密度为3．83％~4．71％,线性范围为10．0~5 873．1个／μL,线性相关系数（r）为0．999,携带污染率为0．12％。以显微镜检查为金标准,受试者工作特征（ROC）曲线结果显示UF-1000i检测真菌YLC的最佳临界值为18．05个／μL,其检测真菌的敏感性、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为97．0％、85．6％、87．5％、57．4％和99．3％。结论 UF-1000i可快速提供真菌孢子定量检测结果,辅助诊断尿路真菌感染。

关键词: 真菌尿; Sysmex UF-1000i尿有形成分分析仪; 显微镜检查
中图分类号:R446．11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640（2013）04-290-03
Evaluation on the clinical application of Sysmex UF-1000i urine formed element analyzer for screening funguria
DING Zhixiang, JIANG Yinfen, ZHOU Yilan, JIN Wentao, QIAN Gaochao
Department of Clinical Laboratory,Changzhou Traditional Chinese Medicine Hospital,Nanjing Traditional Chinese Medicine University,Jiangsu Changzhou 213003,China
Abstract

Objective To evaluate the clinical application significance of Sysmex UF-1000i urine formed element analyzer （UF-1000i analyzer） for screening funguria． Methods The precision,linear range and carryover rate ofCandida albicans were detected by UF-1000i analyzer． A total of 200 urine samples which UF-1000i analyzer showed like yeast cell（YLC） positive and 400 YLC negative urine samples were detected by manual microscopy． Results For UF-1000i analyzer detectingCandida albicans,the precision was 3．83％- 4．71％,the linear range was 10．0-5 873．1 cells／μL,the correlation coefficient was 0．999, and the carryover rate was 0．12％． Manual microscopy was as the gold standard,and the result of receiver operating characteristic （ROC） curve showed the best cut-off value for UF-1000i analyzer detecting YLC was 18．05 cells／μL． The sensitivity,specificity,accuracy,positive predictive value and negative predictive value of UF-1000i analyzer in the diagnosis of funguria were 97．0％,85．6％,87．5％,57．4％ and 99．3％,respectively． Conclusions UF-1000i analyzer can provide quantitative results of fungal spores． It aids to diagnose urinary tract fungal infection．

Keyword: Funguria; Sysmex UF-1000i urine formed element analyzer; Microscopy
引言

随着抗菌药物、皮质激素、免疫抑制剂及导尿管大量使用,尿路真菌检出在临床住院患者中也越来越常见[ 1]。其患者大多无临床症状,且之前可能使用过大量抗菌药物,往往尿干化学[白细胞酯酶、亚硝酸盐、蛋白质、隐血]和有形成分自动分析系统多项指标[白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、上皮细胞、管型、细菌]多在正常范围内,易导致漏检。Sysmex UF-1000i尿有形成分分析仪（简称UF-1000i）应用半导体激光流式细胞／核酸荧光染料技术,对各种有形成分的细胞膜、细胞核、细胞质进行特异性核酸荧光染色,且具有独立的双检测通道（沉渣通道和细菌通道）,可快速提供包括类酵母细胞（YLC）在内的多个有形成分定量报告[ 2]。本研究对其定量参数YLC的精密度、线性范围和携带污染率进行了评价。同时,我们选择了200例UF-1000i提示YLC阳性尿液样本和400例YLC阴性样本,以显微镜检查为金标准,对UF-1000i检测真菌的符合率进行评价。

材料和方法
一、样本来源

2011年10至11月南京中医药大学附属常州市中医医院住院、门诊及健康体检者的尿液样本。

二、仪器与试剂

Sysmex医用电子有限公司生产的UF-1000i及配套原装试剂;奥林巴斯BX-50相差显微镜;低速离心机。

三、方法

1． 精密度 应用临床样本分离纯化出白念珠菌配制高值和低值2个浓度尿液样本,充分混匀后连续做20次测定,计算变异系数（ CV）。

2． 线性范围 制备含白念珠菌（5 000个／μL左右）尿液样本,以鞘液做原倍、5、50、500和1 000倍稀释。每个稀释度检测3次,以均值作为检测值,对检测值与期望值进行线性回归和相关分析。

3． 携带污染 分别取高值和低值尿液样本,先连续测定高值样本3次（结果为H1、H2、H3）,随后测定低值样本3次（结果为L1、L2、L3）,携带污染率（％） = （L1–L3）／（H3–L3）×100％。

4． 与显微镜检查比较 选择UF-1000i提示YLC阳性（YLC>0）样本200例,阴性（YLC=0）样本400例,432× g离心5 min,倾去上层液,留取0．2 mL尿液沉渣,混匀后进行显微镜检查。显微镜检查阳性判断标准：镜下见真菌孢子或菌丝判为阳性。

四、统计学方法

采用SPSS 17．0软件进行统计学分析。绘制受试者工作特征（ROC）曲线,选择最佳临界值,评价UF-1000i检测真菌的敏感性、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值。以UF-1000i检测方法为试验法,显微镜检查为金标准,采用McNemar χ2检验和 Kappa一致性检验,比较2种方法检测真菌的差异与一致性, P<0．05为差异有统计学意义。

结果
一、精密度

UF-1000i检测白念珠菌YLC均值分别为164．84个／μL和25．26个／μL时, CV值分别为3．83％和4．71％。

二、线性范围

初始尿液样本中YLC为5 873．1个／μL,当稀释1 000倍时,UF-1000i在3次检测结果中有2次未能检出,于是排除此稀释度。经Person相关分析,相关系数（ r）为0 ．999（ P=0 ．000）;经线性回归分析,决定系数（ r2）为0．999,线性方程为 Y=0 ．998 X–59 ．74（ P=0．000）;UF-1000i检测白念珠菌的线性范围为10．0~5 873．1个／μL。

三、携带污染率

高值尿液样本连续3次检测YLC值分别为3 743．2、3 768．6和3 764．2个／μL,低值尿液样本连续3次检测YLC值分别为25．8、22．6和21．3个／μL。UF-1000i检测白念珠菌的携带污染率为0．12％。

四、UF-1000i与显微镜检测真菌比较

400例UF-1000i提示YLC阴性（YLC=0）样本中,有2例检出真菌菌丝,因此UF-1000i检测真菌的阴性预测值为99．5％（398／400）。200例UF-1000i提示YLC阳性（YLC>0）样本中,当YLC浓度分别在≤50．0、50．1~100．0和≥100．1个／μL时,UF-1000i检测真菌真阳性率分别为33．6％（37／110）、58．3％（21／36）和74．1％（40／54）。UF-1000i检测真菌的ROC曲线见 图1,曲线下面积为0．941±0．012,95％可信区间为0．918~0．964,选择约登指数最大点,YLC临界值为18．05个／μL。以YLC≥18．1个／μL判为UF-1000i阳性,以显微镜检查为金标准,UF-1000i检测真菌的敏感性为97．0％、特异性为85．6％、准确性为87．5％、阳性预测值为57．4％、阴性预测值为99．3％。经McNemar χ2检验发现,2种检测方法差异有统计学意义（ P=0．000）。经一致性检验, Kappa=0 ．647（ P=0．000）,2种检测方法存在较高一致性,见 表1。

图1 UF-1000i检测尿液中真菌的ROC曲线

表1 UF-1000i与显微镜检测真菌结果比较
讨论

真菌尿在住院患者中并不少见,多数患者可无临床症状,其尿中检出真菌可能为样本污染或仅为膀胱、尿路导管生长的定植菌,一般不需要治疗。若出现临床症状,则需要及时规范的抗真菌治疗[ 3]。真菌尿最常见危险因素包括留置导尿管、长期大量使用广谱抗菌药物以及长期使用皮质激素和免疫抑制剂等[ 4, 5]。通过对尿液中的真菌进行快速定量检测不仅可以辅助诊断尿路真菌感染,另外对临床不规范用药（如长期大剂量联合使用抗菌药物）也具有一定提示作用。

虽然UF-1000i YLC指标仅为提示作用,以防止真菌对尿中其他细胞检测产生干扰,但本研究结果显示,UF-1000i检测真菌的精密度、线性范围以及携带污染率均尚可。200例UF-1000i提示YLC阳性（YLC >0）样本中,通过显微镜检查最终确诊98例,真阳性率为49．0％（98／200）。随着YLC浓度的升高,UF-1000i检测真菌的阳性预测值也增加,当YLC≥100．1个／μL时,UF-1000i检测真菌阳性预测值达到74．1％（40／54）。ROC曲线分析,最佳临界值为18．05个／μL时,UF-1000i检测真菌的敏感性为97．0％,特异性为85．6％。本研究结果显示UF-1000i检测真菌的假阳性率较高,与显微镜检查比较,差异有统计学意义,但经 Kappa一致性检验,两法一致性尚可（ Kappa=0．647）,可能是由于研究样本中阴性样本较多的缘故。

多项研究报道显示,当尿液中存在草酸钙结晶、真菌及大量细菌时,能明显影响RBC检测结果,导致RBC检测结果假性增高[ 6, 7, 8]。我们在实验中发现,影响YLC的因素也较多。当尿液中存在大量RBC、草酸钙结晶及细菌时,会影响YLC检测。虽然真菌孢子有核,但染料对其膜的通透性低,染色后部分真菌孢子荧光强度相对较弱,且因RBC、草酸钙结晶和真菌孢子大小相似,因此RBC和草酸钙结晶在散点图上可与YLC的分布区域存在部分交叉,从而导致YLC检测结果假性增高。当尿液中细菌成堆出现,菌团大小与真菌孢子类似,也可导致YLC检测结果假性增高[ 9]。另外,我们发现UF-1000i只能识别真菌孢子而无法准确识别真菌菌丝,甚至会将菌丝误认为是管型。

综上所述,UF-1000i可对尿液中真菌孢子进行定量分析,辅助诊断尿路真菌感染,对临床不合理用药也有一定提示作用。虽然其检测真菌假阳性率较高,但97．0％的敏感性和99．3％的阴性预测值提示UF-1000i可作为真菌尿的快速筛查工具。另外,本研究在选择尿液样本时存在一定偏倚,实际工作中YLC阴性样本远多于阳性样本,因此UF-1000i在真菌尿筛查中的临床价值应该更高。

The authors have declared that no competing interests exist.

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