引用本文
胡尧, 刘维薇, 黄志基. 中和确认试验在电化学发光免疫法检测乙型肝炎表面抗原弱反应性中的价值探讨. 2013, 28(3): 218-220
HU Yao, LIU Weiwei, HUANG Zhiji. Significance investigation of neutralization confirmatory test for the weak reactive result of HBsAg determination by electrochemiluminescence immunoassay. Labratory Medicine, 2013, 28(3): 218-220  
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中和确认试验在电化学发光免疫法检测乙型肝炎表面抗原弱反应性中的价值探讨
胡尧, 刘维薇, 黄志基
复旦大学附属华山医院检验科,上海 200040

通讯作者:黄志基,联系电话:021-52888738。

作者简介:胡 尧,男,1982年生,学士,技师,主要从事临床免疫学检验工作。

基金:国家临床重点专科项目资助;
摘要
目的

对电化学发光免疫法(ECLIA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)弱反应性的标本进行中和确认试验,并对确认结果进行分析。

方法

筛选ECLIA检测HBsAg弱反应性(COI值在1.00~50.00之间)的100例标本进行中和确认试验,并对确认结果进行分析。

结果

100例HBsAg弱反应性标本经确认试验确认阳性87例(87.0%),阴性10例(10.0%),不确定3例(3.0%)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,当ECLIA检测HBsAg的COI值为1.97时,特异性可达100.0%,敏感性为83.9%。

结论

中和确认试验可作为HBsAg弱反应性标本进一步确认的手段;ECLIA对弱反应性HBsAg检测敏感性高,特异性好;当ECLIA检测HBsAg的COI值>2.00时,一般可以排除假阳性的可能,无需进一步做确认试验。

关键词: 中和确认试验; 乙型肝炎表面抗原; 弱反应性; 电化学发光免疫法
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)03-218-03
Significance investigation of neutralization confirmatory test for the weak reactive result of HBsAg determination by electrochemiluminescence immunoassay
HU Yao, LIU Weiwei, HUANG Zhiji
Deparment of Clinical Laboratory,Huashan Hospital,Fudan University,Shanghai 200040,China
Abstract
Objective

To use neutralization confirmatory test to confirm and analyze the results of weak reactive hepatitis B surface antigen (HBsAg) determination by electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA).

Methods

A total of 100 weak reactive HBsAg positive samples (1.00< COI <50.00) were detected by ECLIA,and confirmed by neutralization confirmatory test. The results were analyzed.

Results

Among the 100 weak reacitve HBsAg positive samples,87 samples (87.0%) were confirmed,10 samples (10%) were negative,and 3 samples (3.0%) were uncertain.According to the receiver operating characteristic (ROC) curve,when the COI was 1.97,the specificity was 100.0%,and the sensitivity was 83.9%.

Conclusions

The neutralization confirmatory test can be used as the further means to confirm the samples with weak reactive HBsAg. ECLIA shows high sensitivity and specificity on weak reactive HBsAg positive samples.When COI>2.00,generally it is unnecessary to do the neutralization confirmatory test and could exclude the possibility of false-positivity.

Keyword: Neutralization confirmatory test; Hepatitis B surface antigen; Weak reaction; Electrochemiluminescence immunoassay
引言

乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)是乙型肝炎诊断及治疗评估的重要血清学标志物。在我国的乙型肝炎病毒(HBV)感染人群中,有一部分血清HBsAg呈低水平状态存在,用传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,这部分患者往往会被漏检。随着微粒子酶免疫荧光法(micropartical enzyme immunofluorescence assay,MEIA)和电化学发光免疫法(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA )代替ELISA,HBsAg检测的敏感性和特异性得到显著提高,特别是对携带弱反应性HBsAg人群的检出率明显提高。但在检测敏感性提高的同时,这些弱反应性HBsAg检出存在着假阳性,需要对部分HBsAg弱反应性结果进行确认。为此,我们对采用ECLIA检测弱反应性HBsAg的血清标本进行确认,并对确认结果进行分析和讨论。

材料和方法
一、研究对象

2010年6月至2011年2月采用罗氏MODULAR ANALYTICS E-170全自动电化学发光免疫分析仪检测华山医院门诊及住院患者HBV血清标志物,其中弱反应性HBsAg(1.0<COI<50.0)100例,男63例,女37例,年龄21~89岁。

二、仪器和试剂

1.仪器 MODULAR ANALYTICS E-170全自动电化学发光免疫分析仪,瑞士罗氏公司。

2.试剂 HBV血清标志物检测试剂盒包括HBsAg及其抗体(抗HBs)、HBV e 抗原(HBeAg)及其抗体(抗HBe)、HBV核心抗体(抗HBc),HBsAg确认试验试剂盒以及HBsAg校准品[溯源至世界卫生组织(WHO)HBsAg国际标准品,亚型adw 2.00/558],瑞士罗氏公司。室内质控,Hepatitis and Retrovirus,美国伯乐公司。

三、方法

1.HBV血清标志物、定标品、室内质控品的检测 采用ECLIA,按照罗氏E-170全自动电化学发光免疫分析仪的操作规程进行,所测结果均由仪器自动完成。HBsAg>1.0COI时判为阳性,所有结果均经过复检。

2.HBsAg中和确认试验 操作严格按照罗氏E-170仪器的操作规程进行。所有标本均经13 000× g离心10 min。在标本中加入特异性针对HBsAg的人型中和抗体(确认试剂),如果血清中存在HBsAg,则会被特异性的抗体中和。同时测定同一标本加入中和抗体(确认试剂)与未加入中和抗体(对照试剂)的COI值,分别用COI(确认)和COI(对照)表示,计算X=COI(确认)/COI(对照)×100。结果判断见 表1。

表1 确认试验判断标准（例）
四、统计学方法

计量资料以 x- ±s表示,使用SPSS 11.5统计软件进行受试者工作特征(ROC)曲线分析。

结果
一、100份弱反应性HBsAg标本的确认试验

10例阴性结果和3例不确定标本的COI值在1.01~1.97之间,结果见 表2。

表2 100份HBsAg标本确认试验结果[例(%)]
二、弱反应性HBsAg确认结果的ROC曲线分析

采用SPSS 11.5软件对弱反应性HBsAg确认试验结果进行ROC曲线分析,曲线下面积为0.945±0.021 5,当ECLIA检测HBsAg的COI值为1.97时,特异性可达100.0%,敏感性为83.9%。见 图1。

图1 弱反应性HBsAg确认结果的ROC曲线

三、不同乙型肝炎血清学标志物模式标本低水平HBsAg确认结果

HBsAg阳性设定为1,抗HBs阳性设定为2,HBeAg阳性设定为3,抗HBe阳性设定为4,抗HBc阳性设定为5,结果见 表3。

表3 不同乙型肝炎血清学标志物模式标本HBsAg确认结果
讨论

血清HBsAg 的弱反应性存在可能与HBV感染患者年龄增长,HBV的整合、清除、变异,血清学转换,出现抗HBs以及含HBV 循环免疫复合物的形成等有关,并与来自宿主方面的诸多因素有关[ 1, 2]。因此准确检测并报告低水平的HBsAg具有重要的流行病学和临床意义[ 3]。

然而HBsAg检测结果呈弱反应性可能是假阳性结果[ 4]。引起HBsAg假阳性有多种原因,目前认为主要分3类:第1类是由于标本分析前和分析中处理不当,主要是随机误差引起的,如血液标本的凝集不完全等所致[ 5],可通过同一标本复检排除。我们收集的100例标本,均经高速离心复检,剔除可能存在的第1类假阳性的标本。第2类是同一标本复检不能排除,必须进行特异抗体中和试验才能排除,可能存在某些非特异性干扰物质[ 6]。国内文献对ELISA[ 7]、MEIA[ 8, 9]等方法检测低水平HBsAg的确认试验报道较多,但对ECLIA方法相对报道较少。我们对100例HBsAg检测结果COI值在1.00~50.0的血清标本进行确认试验,确认结果阳性率为87.0%,阴性率为10.0%,还有3例为不确定结果;10例阴性结果和3例不确定标本的COI值在1.01~1.97之间;而当COI值>1.97时,确认结果的符合率达到100.0%(79/79),因此ECLIA对弱反应性HBsAg检测不仅敏感性高,而且具有较高的特异性。ROC曲线分析结果显示,当ECLIA检测HBsAg的COI为1.97时,特异性可达100.0%,敏感性为83.9%。我们认为采用ECLIA系统检测HBsAg出现弱反应性结果时,当COI值>2.00,基本可以排除假阳性的可能,无需再做确认试验;而当1.00<COI<2.00时,建议对这部分被检者进行复检和随访,如有可能最好进一步做确认试验进行确认。由于本研究标本数量有限,尚需大量试验证实。第3类是中和确认试验也不能排除,本次研究有3例确认结果为不确定。究其原因各类文献都有报道,如HBV疫苗接种后,但此类干扰持续时间较短[ 10]。因此,对患者进行短期随访,对于HBsAg的确认具有重要价值。

本研究还发现,弱反应性HBsAg标本中约有80%的患者处于乙型肝炎“小三阳”状态。主要原因是,病程在转换过程中HBsAg含量较低;约有7%的患者存在抗HBs同时阳性,可能存在HBsAg/抗HBs的血清学转换。乙型肝炎血清标志物仅HBsAg阳性4例,经确认试验为阴性,可能存在干扰物质。3例不确定的标本,HBV血清标志物抗HBe、抗HBc呈阳性,需要进一步随访。

美国病理学家协会(College of American Pathologists,CAP)在其能力验证(proficiency testing,PT)中要求对弱反应性HBsAg结果进行确认。中和确认试验对于ECLIA检测的弱反应性HBsAg结果的确认是一种特异性和敏感性较高的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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