引用本文
武强. 健康成人血清邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶参考范围的建立. 2013, 28(2): 114-116
WU Qiang. Establishment of the reference range of serum superoxide dismutase measured by pyrogallol autoxidation method in healthy adults. Labratory Medicine, 2013, 28(2): 114-116  
Permissions
Copyright©2013, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部版权所有
健康成人血清邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶参考范围的建立
武强
复旦大学附属上海市第五人民医院检验科,上海 200240

作者简介：武强,男,1981年生,学士,主管技师,主要从事临床生化免疫检验工作。

摘要
目的

建立健康成人血清邻苯三酚法超氧化物歧化酶(SOD)参考范围。

方法

采用邻苯三酚法测定1 640名健康成年人血清中SOD浓度,并按年龄、性别进行分组统计。

结果

健康成人血清SOD水平呈正态分布,与年龄呈负相关(r=-0.541,P<0.01)。男、女组间差异有统计学意义(P<0.01)。SOD参考范围:男性≤40岁为147.6~218.4 U/mL,41~60岁为131.4~207.8 U/mL,>60岁为98.1~190.9 U/mL;女性≤40岁为142.0~205.2 U/mL,41~60岁为126.4~194.4 U/mL,>60岁为95.5~187.5 U/mL。

结论

SOD参考范围在不同人群中是不一致的,实验室应根据各自的检测系统和检测方法制定合理的参考范围。

关键词: 超氧化物歧化酶; 邻苯三酚; 参考范围
中图分类号:Q554 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)02-0114-03
Establishment of the reference range of serum superoxide dismutase measured by pyrogallol autoxidation method in healthy adults
WU Qiang
Department of Clinical Laboratory, Shanghai Fifth People's Hospital, Fudan University, Shanghai 200240, China
Abstract
Objective

To establish the reference range of serum superoxide dismutase (SOD) measured by pyrogallol autoxidation method in healthy adults.

Methods

A total of 1 640 clinical serum samples from healthy adults were detected for SOD by pyrogallol autoxidation method,and the results were analyzed statistically according to sex and age.

Results

The distribution of serum SOD was normal in healthy adults,and the levels were negatively correlated with ages(r=-0.541,P<0.01).There was a statistical significance in the levels of SOD between males and females(P<0.01).The reference ranges in males were as follows: 147.6-218.4 U/mL in ≤40-year-old group,131.4-207.8 U/mL in 40 to 60-year-old group and 98.1-190.9 U/mL in >60-year-old group. The reference ranges in females were as follows: 142.0-205.2 U/mL in ≤40-year-old group,126.4-194.4U/mL in 40 to 60-year-old group and 95.5-187.5 U/mL in >60-year-old group.

Conclusions

The reference ranges of serum SOD are inconsistent in different healthy people. It is essential to establish the rational reference range by respective detection system and detection method in different clinical laboratories.

Keyword: Superoxide dismutase; Pyrogallol; Reference range
引言

超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物体内能清除超氧阴离子自由基的一类金属酶,在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用,与很多疾病的发生、发展密不可分。SOD的测定方法有直接法和间接法。目前大多数实验室采用间接法进行活性检测。邻苯三酚法是间接法中的一种,是根据邻苯三酚自氧化可产生强荧光的醌,SOD 通过清除该反应过程中产生的超氧阴离子自由基( )使醌减少而建立起来的动力学方法,适用于各种自动化分析仪。目前国内对于该方法测定SOD的参考范围少有报道。本研究旨在建立本地区血清邻苯三酚法SOD参考范围。

材料和方法
一、材料

1.仪器

ROCHE Modular 4P全自动生化分析仪。

2.试剂

血清SOD试剂盒(批号110104-01)及配套校准品(批号:20110114)、质控血清(批号:高值20110104、低值20110104)由福建福缘生物科技有限公司提供。

二、方法

1.对象

2011年4月至7月在复旦大学附属上海市第五人民医院健康体检者(包括招工体检、学生体检、征兵体检、职工体检、退休人员体检等,不包括正常妊娠妇女),从中筛选出体检结论正常者1 640人(排除心脑血管疾病、高血压、糖尿病、肝病、肾病、自身免疫及其他影响血清SOD水平的疾患),其中男878名、女762名,年龄17~87岁。根据年龄分为5组:≤30岁组(男157名、女204名);31~岁组(男152名、女150名);41~岁组(男179名、女177名);51~岁组(男239名、女131名);>60岁组(男151名、女100名)。

2. 样本收集、检测

清晨空腹坐位采取静脉血4 mL,1 h内分离血清,4 h内完成测定。

3. 测定方法

邻苯三酚法。在碱性工作液中,邻苯三酚会产生自氧化显色反应,在其自氧化过程中不断释放出 。当SOD活性降低时,释放 发生歧化反应被抑制, 浓度升高,从而抑制邻苯三酚的自氧化,其显色反应强度减弱,即样本中邻苯三酚自氧化的显色反应强度与SOD的活性呈正相关关系。按试剂盒说明书设置仪器的测定参数。

4.SOD单位定义

在25 ℃恒温条件下,每毫升反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。

5. 试剂盒性能

(1)精密度评价:参考美国临床实验室标准化研究协会(CLSI)EP5-A2文件,选择低值和高值2个水平的质控品2份,一份平行测定20次,计算批内变异系数( CV);一份连续检测20 d,计算批间 CV;(2)正确度评价:选取2个水平质控品(高值200 U/mL;低值150 U/mL)进行测定,每个水平重复测定5次取均值,计算测定结果与靶值的偏倚;(3)线性范围评价:参考CLSI EP6-A2文件,选取高(H)、低(L)2个水平样本,将H和L样本按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H比例得到系列评价样本,每个样本重复测定4次,将理论值与实测值用直线回归进行统计。

三、统计学方法

运用SPSS11.5统计软件对数据进行分析,计量资料采用 ±s来表示。 P<0.05表示差异有统计学意义,对所有数据进行正态性检验,SOD与年龄的相关性分析采用pearson直线相关分析,男、女组不同年龄段之间采用方差分析,并进一步采用SNK检验进行多组间均数的比较,同组男、女均数比较用 t检验法,总体参考范围由 ±2 s计算出。

一、试剂盒性能评价结果

1.精密度

高值和低值的批内 CV和批间 CV分别为0.94%、1.45%和1.13%、1.69%。

2.正确度

高、低值2个水平质控品测定结果与靶值偏倚分别为1.80%、2.27%。

3.线性范围

实测值与理论值回归方程为 Y=0 .996 7 X+1.949 2, r=0.999 9,实测线性范围30~570 U/mL。试剂盒测定范围15~400 U/mL。

二、血清SOD浓度与受检者性别的关系

所有受检者血清SOD浓度的分布经正态性检验呈正态分布,男、女性组血清SOD浓度分别为(170.0±23.4)U/mL和(164.0±20.4)U/mL,二者比较差异有统计学意义( P<0.01),结果见 表1。

表1 1 640名健康成人血清SOD浓度分析( ±s, U/mL)
三、血清SOD浓度与年龄之间的关系

血清SOD浓度与年龄呈负相关( r=-0.541, P<0.01),见 图1。在男、女2组SOD浓度均随年龄的增长而降低。与≤30岁组比较,除31~岁组外,其余3组差异均有统计学意义( P均<0.01)。>60岁组与41~岁及51~岁组比较差异有统计学意义( P<0.01),且>60岁组浓度变化最大,见 表1。

图1 健康成人血清SOD浓度与年龄的相关性注: Y =-0 .773 1 X+202.45, r=-0.541, P<0.01

四、健康成人SOD参考范围

根据以上分析将受检者分为6组。男性:≤40岁组为147.6~218.4 U/mL,41~60岁组为131.4~207.8 U/mL,>60岁组为98.1~190.9 U/mL;女性:≤40岁组为142.0~205.2 U/mL,41~60岁组为126.4~194.4 U/mL,>60岁组为95.5~187.5 U/mL。

讨论

SOD是广泛存在于生物体内能清除超氧阴离子自由基的一类金属酶,按所含金属种类不同,人类SOD可分为3类:铜锌SOD、锰SOD和胞外SOD[ 1]。本研究所测定的血清SOD主要是分泌到胞外的SOD浓度[ 2]。SOD具有特殊的生理活性,是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内水平的高低可以间接反映体内氧自由基水平。现已证实,人体利用的氧气中有1%~5%被转化为氧自由基[ 3],由氧自由基引发的疾病多达60多种。SOD是机体重要的氧自由基清除剂[ 4],可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害,并及时修复受损细胞。因此,在生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要,对辐射有防护作用,能减少糖尿病慢性并发症及肺部疾病,其抗炎活性可减少缺血再灌注损伤,预防心血管疾病,还具有抗肿瘤、抗衰老等作用。

血清SOD浓度在不同性别之间有明显差异,这有可能与个体的体型有关,与国外报道有所不同,可能与种族不同有关[ 5]。血清SOD与年龄呈负相关。在不同的年龄段其浓度有所变化,随着年龄的增加( r=-0 .541, P<0.01),SOD呈逐渐下降趋势。因此,使机体细胞更易受到氧化剂的攻击,而引起老化和疾病[ 6],特别是一些与年龄相关的疾病。

本研究对象总体血清SOD浓度呈正态分布,参考范围男性:≤40岁为147.6~218.4 U/mL、41~60岁为131.4~207.8 U/mL、>60岁为98.1~190.9 U/mL;女性:≤40岁为142.0~205.2 U/mL、41~60岁为126.4~194.4 U/mL、>60岁为95.5~187.5 U/mL。因此,根据实验室所采用的检测系统和所采用的方法建立本实验室参考范围是非常必要的。邻苯三酚法具有性能稳定、精密度高、试剂简单等优点,在临床中应用越来越广泛。SOD测定虽然是一种非特异的辅助诊断指标,但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对策以及对于同一病患者病程转归的判断,实时动态监测具有重要参考价值。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Nozik-Grayck E, Suliman HB, Piantadosi CA. Extracellular superoxide dismutase[J]. Int J Biochem Cell Biol, 2005, 37(12): 2466-2471. [本文引用:1]
[2] 陈立力. 细胞外超氧化物歧化酶的研究进展[J]. 实用医学杂志, 2008, 24(2): 163-165. [本文引用:1]
[3] Iranzo O. Manganese complexes displaying superoxide dismutase activity: a balance between different factors[J]. Bioorg Chem, 2011, 39(2): 73-87. [本文引用:1] [JCR: 1.732]
[4] 张一鸣, 王金秀, 周惠娜, 等. 血清丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮检测对新生儿缺氧缺血性脑病的应用价值[J]. 检验医学, 2008, 23(6): 666-668. [本文引用:1]
[5] Nojima M, Sakauchi F, Mori M, et al. Relationship of serum superoxide dismutase activity and lifestyle in healthy Japanese adults[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2009, 10(Suppl): 37-40. [本文引用:1]
[6] 杨东升. 超氧化物歧化酶的研究与应用[J]. 化学与生物工程, 2004, 21(3): 7-9. [本文引用:1]