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刘露. EDTA和肝素对α-岩藻糖苷酶测定的干扰评价. 28(12): 1165-1166[刘露. 上海检验医学, 28(12): 1165-1166]  
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EDTA和肝素对α-岩藻糖苷酶测定的干扰评价
刘露
惠州市中心人民医院,广东 惠州 516001

刘露,女,1963年生,学士,主任技师,主要从事临床生物化学检验工作。

摘要

关键词: α-岩藻糖苷酶; 肝素; 乙二胺四乙酸盐; 干扰试验
中图分类号:Q556 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)12-1165-02
Abstract
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引言

α-岩藻糖苷酶(α-fucosidase,AFU)是新的诊断原发性肝癌的标志物,临床上还可用于肝硬化、肾脏疾病、糖尿病等的诊断、疗效评价以及预后判断[ 1]。AFU主要采用连续监测法检测。在日常工作中,为缩短样本周转时间和防止仪器样品针被堵,不少医院使用乙二胺四乙酸(EDTA)盐或肝素抗凝管采集样本。我们选用了3个厂家试剂,对EDTA和肝素是否干扰AFU测定进行了评价,为其临床应用提供依据。

一、材料和方法
1.仪器和试剂

日本日立公司7180型全自动生化分析仪。A、B、C公司生产的AFU试剂(简称A、B、C试剂),批号分别为208101H、20121203、120903。

2.测定原理

2-氯-4-硝基苯-α--L-岩藻糖苷被样本中的AFU分解,游离出2-氯-4-硝基苯酚,在405 nm处检测吸光度变化率,据此可计算出AFU的活性。

3.干扰分析

分别用A、B、C试剂同时测定40例患者血清样本和EDTA-K2、肝素锂抗凝血浆的AFU,并依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP7-A2文件对有差异的结果进行“配对差异”试验和“剂量效应”试验[ 2],判断EDTA-K2或肝素锂是否干扰AFU测定。根据EP7-A2文件[ 2]选择参考区间上、下限,即10、40U/L 2个水平进行评估。干扰实验中EDTA-K2和肝素锂的浓度分别为11 mg/mL和87.5 U/mL。

4.统计学方法

所有数据均以 ±s表示。用Excel软件进行统计处理及作图分析。对2种样本的结果进行配对 t检验分析。 P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果
1.血清样本和EDTA-K2、肝素锂抗凝血浆样本AFU测定结果比较 A试剂检测

EDTA-K2、肝素锂抗凝血样本的结果与血清样本比较差异有统计学意义( P<0.05);B试剂检测肝素锂抗凝样本的结果与EDTA-K2抗凝和血清样本结果比较差异有统计学意义( P<0.05);C试剂检测3种样本结果差异均无统计学意义( P>0.05)。见表1:

表1 血清样本和EDTA-K2、肝素锂抗凝血浆样本AFU
2.干扰分析

“配对差异”试验结果显示EDTA-K2和肝素锂对A试剂AFU高、低值测定均有干扰,肝素锂对B试剂AFU高、低值测定有干扰。见表2、表3:

表2 EDTA-K2和肝素锂对不同厂家试剂测定低浓度AFU的干扰
表3 EDTA-K2和肝素锂对不同厂家试剂测定高浓度AFU的干扰

“剂量效应”试验结果显示肝素锂对A试剂测定高浓度AFU样本可产生非线性正干扰,对其测定低浓度样本可产生线性正干扰,见图1(a);EDTA-K2对A试剂测定高、低浓度AFU样本均可产生线性负干扰,见图1(b);肝素锂对B试剂测定高、低浓度AFU样本均可产生非线性正干扰,见图1(c):

图1 肝素锂及EDTA-K2对高、低浓度AFU干扰的剂量效应图

注:(a)肝素锂对A试剂的干扰;(b)EDTA-K2对A试剂的干扰;(c)肝素锂对B试剂的干扰

三、讨论

由于肝癌患者分离血清需要时间长,为了能快速回报结果,临床常采用抗凝血进行测定。但研究[ 3]显示AFU试剂测定肝素抗凝血浆与血清值有明显差异,可能与肝素为阴离子黏多糖,带有大量负电荷,呈强酸性,与所用试剂中的碱性缓冲液形成不溶于水的盐类化合物及反应液沉浊使试剂的吸光度升高有关。分析EDTA-K2抗凝血浆中AFU测定的反应曲线发现,原本为直线的反应曲线呈斜S型波浪。表明EDTA-K2作用于AFU的活性中心,改变了该酶活性中心的3级结构,使酶促反应的速度发生改变导致干扰[ 4]。故实验室只能采用血清标本检测,等待时间长,不能满足临床要求,因此已不少厂家推出了第2代可测抗凝样本的试剂。

本研究选用了3个厂家试剂,对EDTA和肝素对测定的干扰进行了评价,结果显示未声明可用于测定抗凝样本的A试剂检测EDTA-K2和肝素锂抗凝血样本的结果与血清样本结果有明显差异;B试剂检测肝素锂抗凝样本的结果明显高于EDTA-K2抗凝血样本和血清样本;声称添加了抗干扰剂的可用于测定抗凝样本的C试剂检测3种样本结果均无差异。进一步对结果进行干扰筛选分析结果也显示EDTA-K2和肝素锂对A试剂血清高、低值测定均有干扰,肝素锂对B试剂血清高、低值测定有干扰。因此,为保证临床AFU检测结果的准确性,需根据样本类型选择不同厂家试剂,亦可根据试剂特性选用无抗凝的干燥管或肝素锂、EDTA-K2抗凝管采集样本。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 常连刚, 王蕾. 尿α-L-岩藻糖苷酶对糖尿病早期肾损害的诊断价值[J]. 检验医学, 2012, 27(6): 495-499. [本文引用:1]
[2] ClinicalLaboratory Stand ards Institute. Interference testing in clinical chemistry[S]. EP7-A2, CLSI, 2002. [本文引用:2]
[3] 马卫红, 程钊, 李建军. 二代α- L - 岩藻糖苷酶试剂抗肝素干扰能力评价及临床应用[J] . 中国煤炭工业医学杂志, 2010, 13(4): 514-515. [本文引用:1]
[4] 高小文, 何宝明, 魏丽萍, 等. EDTA-K2抗凝剂对α- L -岩藻糖苷酶测定的干扰分析[J]. 国际检验医学杂志, 2009, 30(9): 900-901. [本文引用:1]