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简敏华, 张健, 陈慧英, 蒋玲丽, 陆银华, 肖艳群, 邵维杰, 徐翀. 乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析. 28(11): 1040-1043[JIAN Minhua, ZHANG Jian, CHEN Huiying, JIANG Lingli, LU Yinhua, XIAO Yanqun, SHAO Weijie, XU Chong. Comparative analysis on the performance of GICA for the determination of HBV serological markers. 上海检验医学, 28(11): 1040-1043]  
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乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析
简敏华, 张健, 陈慧英, 蒋玲丽, 陆银华, 肖艳群, 邵维杰, 徐翀
上海市临床检验中心,上海 200126

简敏华,女,1959年生,主管技师,主要从事免疫学检验及质量控制研究。

张健,联系电话:021-68316300-2309。

基金:上海市卫生局科研计划课题资助项目(2010053);
摘要
目的

评估乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)胶体金免疫层析法(GICA)的分析性能。

方法

收集雅培i1000免疫检测系统检测的HBV-M阳性标本653例、阴性标本103例和HBV-M标准品,以化学发光免疫测定法(CLIA)检测结果为标准,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂和5种GICA试剂检测,统计分析检测结果。

结果

检测HBV-M敏感性:ELISA和GICA检测HBV-M的最低检测限分别为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)0.5 IU/mL和4~8 IU/mL、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)10 mIU/mL和15~30 mIU/mL、乙型肝炎e抗原(HBeAg)1 NCU/mL和2~4 NCU/mL、乙型肝炎e抗体(抗HBe)2 NCU/mL和64~256 NCU/mL、乙型肝炎核心抗体(抗HBc)2 IU/mL和32~256 IU/mL。检测标本HBV-M的符合率:ELISA分别为87.4%、99.0%、87.7%、96.6%、100.0%,GICA分别为69.6%~71.7%、69.0%~72.0%、70.5%~73.9%、42.2%~49.1%、50.0%~60.0%。检测HBV-M特异性:除GICA检测抗HBs的特异性略差外,其余各HBV-M的检测特异性均是可接受。

结论

GICA检测HBV-M低浓度的标本,漏检率很高,只能用于GICA检测线性范围里HBsAg的筛查,不能作为临床诊断乙型肝炎和疗效考核的依据。

关键词: 乙型肝炎病毒血清标志物; 胶体金免疫层析法; 化学发光免疫测定法; 酶联免疫吸附试验
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)11-1040-04
Comparative analysis on the performance of GICA for the determination of HBV serological markers
JIAN Minhua, ZHANG Jian, CHEN Huiying, JIANG Lingli, LU Yinhua, XIAO Yanqun, SHAO Weijie, XU Chong
Shanghai Center for Clinical Laboratory, Shanghai 200126, China
Fund:
Abstract
Objective

To evaluate the performance of colloidal gold immunochromatography assay (GICA) for the determination of the serological markers of hepatitis B virus (HBV-M).

Methods

Abbott i1000 immunoassay system detected 653 cases of HBV-M positive samples, and the results of 103 cases of HBV-M negative samples and HBV-M standard materials by chemiluminescence immunoassay (CLIA) were as the standard. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reagent and 5 GICA reagents were used for the detection, and the results were analyzed statistically.

Results

The sensitivity for the determination of HBV-M was analyzed. ELISA and GICA detection limits for HBV-M showed that hepatitis B surface antigen (HBsAg) 0.5 IU/mL and 4-8 IU/mL, anti-hepatitis B surface antigen antibody (anti-HBs) 10 mIU/mL and 15-30 mIU/mL, hepatitis B e antigen (HBeAg) 1 NCU/mL and 2-4 NCU/mL, anti-hepatitis B e antigen antibody (anti-HBe) 2 NCU/mL and 64-256 IU/mL, anti-hepatitis B core antigen antibody (anti-HBc) 2 IU/mL and 32-256 NCU/mL. The coincidence rates of HBV-M were 87.4%, 99.0%, 87.7%, 96.6% and 100.0% by ELISA and were 69.6%-71.7%, 69.0%-72.0%, 70.5%-73.9%, 42.2%-49.1% and 50.0%-60.0% by GICA. Except the specificity for the determination of anti-HBs by GICA was slightly bad, the specificities of other HBV-M were acceptable.

Conclusions

GICA for the determination of HBV-M with low concentration has high missing rate.GICA can only be used for the screening HBsAg with linear range, and its results cannot be used for the clinical diagnosis and efficacy assessment of hepatitis B.

Keyword: Hepatitis B virus serological marker; Colloidal gold immunochromatography assay; Chemiluminescence immunoassay; Enzyme-linked immunosorbent assay
引言

目前,临床检验方法和技术在不断更新和提高,自动化程度越来越高,但对仪器的要求和检测成本也随之提高。定性检测方法快速、简便,是临床实验室用于各种疾病筛查、诊断的重要方法。在决定采用一种检测方法之前,实验室人员必须了解检测方法的性能、可检测范围和适用范围,并能提供足够的数据表明该方法能通过内部和外部质量控制,保证该实验室出具的报告是准确可靠的。

近几年来,我们在对上海各临床实验室乙型肝炎病毒血清标志物(mark of hepatitis B virus, HBV-M)室内质控、室间质评和飞行调查中发现部分临床实验室用胶体金免疫层析法(colloidal gold immunochromatography assay, GICA)检测HBV-M,结果符合率低,特别是检测乙型肝炎表面抗原(hepatits B surface antigen, HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(hepatits B e antigen, HBeAg)低浓度的标本,阳性漏检率很高。为此,我们采用临床实验室常用品牌的GICA试剂,以化学发光免疫测定法(chemiluminescence immunoassay, CLIA)检测结果为标准,分别用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和GICA检测,对结果进行系统分析评估,旨在为临床实验室选择合适的检测方法提供参考。

材料和方法
一、材料

1. 研究对象

收集采用CLIA检测HBsAg阳性的标本191例、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)阳性标本100例、HBeAg阳性标本146例、乙型肝炎e抗体(抗HBe)阳性标本116、乙型肝炎核心抗体(抗HBc)阳性标本100例、HBV-M阴性标本103例。共计756例,其中男 516例,女240例,年龄21~84岁。

2. 仪器和试剂

雅倍公司 i1000免疫检测系统和配套的HBV-M检测试剂、上海科华生物技术有限公司的ELISA立刻读HBV-M检测试剂,芬兰公司的 MK3酶标仪和MK2洗板机,艾博生物医药(杭州)有限公司、蓝十字生物药业(北京)有限公司、英科新创(厦门)科技有限公司、厦门市波生生物技术有限公司、广州万孚生物技术股份有限公司5家GICA检测HBV-M诊断试剂。国家二级定值HBV-M标准品,购自卫生部临床检验中心。HBV-M分析灵敏度系列血清购自康彻思坦生物有限公司。

二、方法

1. 方法的敏感性检测

以CLIA检测HBV-M定值标准品结果为标准,分别用ELISA和GICA方法检测,以定性结果进行比对,检测2种方法和试剂敏感性。

2. 标本符合率检测

收集HBV-M不同模式的标本,以CLIA检测结果为标准,分别用ELISA和GICA检测,统计2种方法和试剂检测标本的符合率。

3. 方法的特异性检测

收集CLIA检测HBV-M结果为阴性的标本103例,分别用ELISA和GICA检测,检测2种方法和试剂特异性。

4. GICA检测

低浓度的标本每份标本检测3次,由3位有经验的检测者同时判定结果,实验操作均严格按仪器和试剂操作规程进行。

结果
一、方法的敏感性检测

用ELISA和GICA分别检测HBV-M定值标准品,5种不同厂家的GICA试剂随机以GICA 1~5表示,结果见表1:

表1 不同的方法和试剂检测HBV-M定值标准品的结果

续表 1

二、标本的符合率检测

收集CLIA检测为阳性的标本:HBsAg 191例、抗HBs 100例、HBeAg 146例、抗HBe 116例、抗 HBc 100例。分别用ELISA和GICA检测,统计他们与CLIA的符合率,结果见表2:

表2 ELISA和GICA检测标本HBV-M的符合率[%(例)]

三、方法的特异性检测

收集CLIA检测HBV-M结果为阴性的标本103例,分别用ELISA和GICA检测,比较其方法的特异性,结果见表3:

表3 ELISA和GICA检测103例阴性标本HBV-M特异性(%)

讨论

自1995年起国家对ELISA检测HBsAg试剂实行批批检后,对各项指标已有明确标准[1]。检测HBsAg的敏感性≥0.5 ng/mL,(1 IU/mL≈0.5 ng/mL)、抗HBs的检测敏感性≥10 mIU/mL,特异性要求均为100%。CLIA判断标准分别为:HBsAg≥0.05 IU/mL、抗HBs≥10 mIU/mL、HBeAg≥1.0 S/CO、抗HBe≤1.0 S/CO、抗HBc≥1.0 S/CO。

表1、2试验结果显示,虽然ELISA检测HBV-M试剂均已符合国家标准,但是HBsAg和HBeAg敏感性和低浓度标本的检测符合率低于CLIA。这是由于检测试剂制备的原理和方法不同所致。ELISA的抗原、抗体可结合量比CLIA少,检测线性范围较窄,敏感性就低。在HBV感染人群中有一部分患者血清中的HBsAg低水平存在,容易造成漏检,应引起高度重视。ELISA检测抗HBsAg 、抗HBs、HBeAg、抗HBe 、抗HBc符合率分别为87.4%、99.0%、87.7%、96.6%、100.0%。抗HBc于CLIA一致,可能由于抗HBc在体内持续时间长,效价高所致[2]。5种不同厂家的GICA检测试剂的敏感性均没能符合国家标准,这是由于检测试剂制备的原理和方法不同,造成GICA可检测线性范围更窄所致。所以GICA敏感性明显低于CLIA和ELISA,这与文献报道[3,4]一致。只有在HBsAg>20 IU/mL、抗HBs>40 mIU/mL检测范围以上,5种不同厂家的GICA检测试剂均在线性范围内,检测结果的正确性是可靠的。

表3的结果显示,ELISA和GICA的HBV-M试剂的特异性,除抗HBs的特异性略差外,其余各标志物的特异性都可接受。5种不同厂家的GICA HBV-M试剂的特异性差异不大。

GICA具有简便、快速、特异性高、试剂稳定、随到随测、不需任何仪器设备等优点而得到广泛应用,但检测敏感性明显低于CLIA、ELISA。尽管目前检测方法和技术在不断更新和提高,但各种检查方法还是受到检测的线性范围限制,对于低水平HBsAg标本,用GICA检测会漏检HBsAg<20 IU/mL的标本,给临床输血及手术安全带来隐患,更有可能影响到这部分乙型肝炎患者的及时诊断和治疗。通过对HBV-M的GICA检测性能的比对分析,旨在为临床实验室选择合适的检测方法提供参考。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部. 中国生物制品规程(二部)[M]. 北京: 化学工业出版社, 2000: 574. [本文引用:1]
[2] 赵秀英, 陈俊梅, 辛永梅, 等. 不同方法检测乙型肝炎病毒血清标志物的差异[J]. 肝脏, 2008, 13(4): 303-305. [本文引用:1]
[3] 邵骏, 苏良香, 张建平. 胶体金免疫层析法检测HBsAg的效果评价[J]. 检验医学与临床, 2007, 4(8): 757-758. [本文引用:1]
[4] 王蕾, 刘华, 王雯静, 等. 低水平乙型肝炎表面抗原的检测及其临床价值评估[J]. 微生物与感染, 2009, 4(1): 9-12. [本文引用:1]