引用本文
朱宇清, 侯玉敏. ELISA检测乙型肝炎表面抗原的范围和确认试验探讨. 28(11): 1038-1039[ZHU Yuqing, HOU Yumin. Investigation on the range and confirmation test of hepatitis B surface antigen determination by ELISA. 上海检验医学, 28(11): 1038-1039]  
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ELISA检测乙型肝炎表面抗原的范围和确认试验探讨
朱宇清1, 侯玉敏2
1.上海市临床检验中心,上海 200126
2.上海市徐汇区枫林街道社区卫生服务中心检验科,上海 200030

朱宇清,女,1967年生,硕士,副主任技师,主要从事免疫学检验及质量控制研究。

基金:上海市卫生局科研计划项目(2008198);
摘要
目的

探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)测定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性样本临界结果的复检范围和确认试验的弱阳性样本检测范围。

方法

血清样本用国产ELISA试剂测定HBsAg,阴性样本进行复检,复检结果阳性进行确认试验。确认试验应用雅培公司的AxSYM全自动酶免疫荧光分析系统和配套试剂。

结果

HBsAg阴性样本547例,其中510例吸光度(A)值≥0.073 5,复检结果阳性5例,确认试验结果亦为阳性;37例A值<0.073 5,复检结果均为阴性。HBsAg阳性样本332例,其中160例A值≥1.0,确认试验均为阳性;172例A值<1.0的样本中有7例确认试验结果为阴性。

结论

应用国产ELISA试剂进行HBsAg的确认试验,应先确定阴性样本的复检范围和需做确认试验的弱阳性样本范围。

关键词: 酶联免疫吸附试验; 乙型肝炎表面抗原; 复检范围; 确认试验
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2013)11-1038-02
Investigation on the range and confirmation test of hepatitis B surface antigen determination by ELISA
ZHU Yuqing1, HOU Yumin2
1.ShanghaiCenterforClinicalLaboratory,Shanghai 200126,China
2.DepartmentofClinicalLaboratory,ShanghaiFenglinHospital,Shanghai 200030,China
Fund:
Abstract
Objective

To investigate the retesting range of borderline results for hepatitis B surface antigen (HBsAg) negative samples determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the result range of weakly positive samples for confirmation test.

Methods

Serum HBsAg was detected by ELISA reagents made in China. Negative samples were retested. Positive samples were carried on confirmation test using Abbott AxSYM system and reagents.

Results

There were 547 cases of HBsAg negative samples, including 510 cases of absorbance (A)≥0.073 5. After retesting, 5 cases were positive, and the results of confirmation test were positive. In 37 cases ofA<0.073 5, all retested negative. A total of 332 positive samples were carried on confirmation test, and 160 cases ofA≥1.0 were all positive. In 172 cases ofA<1.0, 7 samples were negative.

Conclusions

For HBsAg confirmation test using ELISA reagents made in China, it is useful to definite the retesting range of negative samples, and is necessary for weakly positive samples to identify confirmation test range.

Keyword: Enzyme-linked immunosorbent assay; Hepatitis B surface antigen; Retesting range; Confirmation test
引言

乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)是乙型肝炎诊断的重要标志物。HBsAg免疫测定由于血清样本中可能存在内源性和外源性干扰因素,导致出现假阳性结果[ 1]。因此国外的HBsAg测定试剂均附有中和试剂,用于对阳性样本进行确认试验。国外HBsAg测定结果阴性的样本不需确认,阳性样本的确认范围可限于弱阳性。国内实验室测定HBsAg绝大部分应用国产ELISA试剂,由于精密度不高[ 2] ,有建议对接近Cut-off值的临界样本进行复检[ 3] ,以排除假阳性和假阴性。国产ELISA HBsAg中和确认试剂[ 4]已取得生产许可,不久将被广泛应用。我们对目前国产HBsAg ELISA试剂测定的样本结果阴性的进行复检、阳性的进行确认,以探讨需做确认试验的范围。

材料和方法
一、材料

1. 样本来源

由上海市徐汇区枫林街道社区卫生服务中心提供HBsAg阳性样本94例、HBsAg阴性样本547例;由上海市松江区中心医院提供233例HBsAg阳性样本。HBsAg阳性样本共计327例。

2. 仪器和试剂

HBsAg ELISA试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司。Bio-Rad 1575型洗板机,三科318-MC型酶标仪。HBsAg确认试验应用雅培公司的微粒子酶免疫法检测试剂,检测仪器为AxSYM全自动酶免疫荧光分析系统。

3. 质控品

ELISA检测HBsAg室内质控品浓度为2 ng/mL,由上海市临床检验中心提供;微粒子酶免疫法和确认试验的室内质控品为检测试剂配套的质控品。

二、方法

1. 样本采集与处理

新鲜采集无促凝剂和抗凝剂的全血样本,待血液开始凝固有血清析出时,离心分离血清,当天或隔天完成检测。

2. HBsAg ELISA检测

血清样本按试剂盒说明书进行测定。样本吸光度( A)值≥Cut-off值(0.105)判为HBsAg阳性;样本 A值<0.105判为HBsAg阴性。HBsAg阴性样本采用同样方法进行复检。

3. HBsAg中和确认试验

对HBsAg阳性样本进行确认试验。操作严格按照雅培AxSYM全自动酶免疫荧光分析系统的操作规程,所有样本均经17 000× g离心10 min,取上清液检测。在样本中加入特异性针对HBsAg的人型中和抗体(试剂A),如果血清中存在HBsAg,则会被特异性的抗体中和。中和后的HBsAg不能结合包被于微粒子的乙型肝炎表面抗体。同时测定同一样本加入中和抗体(试剂A)与未加入中和抗体(试剂B)的S/N值,分别用S/N(A)和S/N(B)表示,计算中和率。中和率公式与结果如下:中和率=[S/N(B)-S/N(A)]/[S/N(B)-S/N(index)]×100。每个样本都做原倍与1∶500稀释,样本稀释液使用确认试验专用稀释液。当S/N(B)≥1.5,判为反应性;反之无反应性。中和率>50%为阳性,反之为阴性。

结果
一、547例HBsAg阴性样本复检结果

复检结果阳性的样本出现在 A值较高的区域, A值<0.073 5的复检均为阴性;复检阳性的5个样本确认试验结果均为阳性。见表1:

表1 HBsAg阴性样本复检结果[例(%)]
二、对332例HBsAg阳性样本(包括327例HBsAg阳性样本及5例复检阳性样本)中和确认试验结果

确认结果阴性的均出现在 A值 <1 .0的弱阳性范围, A值≥1.0的均被确认为阳性。见表2:

表2 HBsAg阳性样本确认试验结果
讨论

用国外试剂测定HBsAg时,测定结果 A值 A值≥Cut-off值,报告“reactive”(反应性),应做双份复检。双份复检结果如为非反应性,报告阴性,如为反应性,进行确认试验。实践中发现HBsAg强阳性的样本确认试验中多能得到确认,不被确认的假阳性样本多出现在弱阳性样本中。因此如确定了这一弱阳性的界限,可以减少需要确认的样本数目。有研究报告,用国外酶免疫测定试剂测定和确认HBsAg时,符合需要确认的弱阳性样本范围为 A值<1.0[ 5]。

长期以来无国产的HBsAg确认试剂出售,进口确认试剂价格昂贵,因此在HBsAg测定中很少应用确认试验。由于国产ELISA试剂的精密度不高,曾有建议对可能出现假阳性或假阴性的 A值在0.070~0.300的临界样本进行复检[ 3]。国产ELISA HBsAg确认试剂[ 4]即将问世,在应用中确定必要的需确认的样本范围是重要的。为此我们进行了初步的试验。作为常规试验,阴性样本中的复检范围和确认试验中应检测的弱阳性范围应通过严谨的多中心研究来确定[ 1]。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 李金明. 感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(7): 577-580. [本文引用:2]
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[3] 陈慧英, 肖艳群, 张健, 等. 酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨[J]. 检验医学, 2010, 25(6): 447-450. [本文引用:2]
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