血清免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)主要是用于过敏性疾病的诊断。目前临床常用的检测方法主要有颗粒增强免疫透射比浊法(particle enhanced immunoturbidimetric assay, PETIA)和免疫散射比浊法(particle enhanced immunonephelometry assay, PENIA)。这2种方法是目前公认的最为理想的方法。过去人们大多认为用散射比浊法检测特定蛋白的分析灵敏度较高,而传统免疫透射比浊法的分析灵敏度较低^{[ 1]}。因此,我们分析了这2种方法检测IgE的灵敏度。

1. 仪器

西门子ADVIA 2400全自动生化分析仪(简称ADVIA2400)和西门子BN ProSpec特定蛋白仪(简称BN-P)。

2. 试剂

PETIA试剂盒(批号16432/80705)由德国德赛诊断公司生产,校准品批号为60076079;PENIA试剂盒(批号169651C)由美国西门子医学诊断公司生产,校准品批号为083693;特定蛋白质控品来自上海市临床检验中心,质控品批号分别为低值285LPC、高值286LPC。

3. 检测方法原理

(1)PETIA:使用抗人IgE抗体包被的乳胶颗粒和样本中的IgE进行抗原抗体反应,反应完成后,用透射比浊固定时间法检测吸光度的变化反映IgE的浓度;(2)PENIA:在与含有人IgE的标本相混合时,包被着人IgE的特异的单克隆抗体的聚苯乙烯颗粒会发生聚集,这些聚集体会使穿过标本的光束发生散射,散射光的强度与标本中相关蛋白的浓度呈正比,与已知的标准浓度对比就可得出结果。

4. 参数设定

分别在ADVIA2400和BN-P上按照试剂说明书进行参数设定和操作,组成各自的检测系统。

5. 标本来源

收集上海市嘉定中心医院门诊及住院血清标本共50例,男22例,女28例,排除明显溶血和脂浊的标本。

6. 灵敏度试验

用生理盐水对已定值的混合血清做系列稀释。稀释比例为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶20、1∶32。充分混匀每份血清,分装置-20 ℃保存。血清IgE值分别为 128、64、32、16、8、6、4 IU/mL。按照文献[2-3] 方法,在连续10 d内,每天用校准品校准ADVIA 2400 和BN-P检测系统,检测质控品,确认结果在控后再分别检测系列稀释标本,记录检测数值。

PETIA和PENIA检测IgE天间变异系数(coe-fficient of variation, CV)在20%处对应的值为2种方法的分析灵敏度,结果分别为8和6 IU/mL,2种方法检测结果非常接近。见图:

图1

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	图1 PETIA和PENIA的分析灵敏度

注:(a)PETIA;(b)PENIA

近年来随着临床检验实验室检测项目和标本量的不断增加,用于临床检验仪器和方法也越来越多。目前PETIA在全自动生化分析检测系统的应用已经相当完善。有研究表明,PETIA检测特定蛋白与PENIA相比较,PETIA具有优良的精密度,相似的检测范围,良好的相关性,系统误差小,2种方法间测定结果存在一定偏倚,但符合临床检测需求^{[ 4, 5, 6]}。可见2种方法完全可以满足临床血清IgE检测的要求。

过去人们普遍认为免疫透射比浊法的灵敏度较低,主要是免疫复合物颗粒太小阻挡不了光线的通过,或者是免疫复合物太少,从而使灵敏度不够理想^{[ 7]}。但是随着乳胶颗粒增强免疫透射技术的大量应用,增加了免疫复合物颗粒的直径使其检测灵敏度得到提高。本研究结果显示,PETIA与PENIA的分析灵敏度分别为8和6 IU/mL。PETIA的灵敏度已经相当接近于PENIA,过去免疫透射比浊法低灵敏度的缺点已得到明显改善。

另外,PETIA检测IgE的成本较低、无需专用仪器、患者的收费低、检测速度快、报告时间短,而且可与生化标本合并,减少患者的采血量。

总之,PETIA与PENIA相比具有优良的分析性能,且实用性强,应在临床上得到广泛使用。