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彭萍. 超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌检测及耐药性分析. 2012, 27(9): 790-792
  
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超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌检测及耐药性分析
彭萍
成都市龙泉区第一人民医院检验科,四川 成都 610000

作者简介:彭 萍,女,1959年生,副主任技师,主要从事临床微生物学检验工作。

摘要
关键词: 超广谱β-内酰胺酶; 大肠埃希菌; 耐药性
中图分类号:Q556 文献标志码:B 文章编号:1673-8640(2012)09-0790-03

超广谱β -内酰胺酶(ESBLs)是一种由细菌质粒介导, 广谱β -内酰胺酶突变而来, 可水解灭活头孢菌类、青霉素及单环类抗生素等β -内酰胺抗生素类的丝氨酸蛋白酶衍生物, 对β -内酰胺酶抑制剂、碳青霉烯类、头霉烯类药物敏感的一类酶[1]。大肠埃希菌是产ESBLs主要的一种病原菌, 同时也是医院内感染的主要病原菌之一。近年来, 由于第3代头孢为抗菌药物的广泛使用, 产ESBLs菌株逐年增多[2]。为指导临床用药, 我对临床感染病例中分离出的268株大肠埃希菌做了ESBLs检测, 并对20种抗生素的耐药性进行统计分析。

一、材料和方法

1. 菌株来源 来自2008年1月至2010年12月成都市龙泉区第一人民医院住院和门诊患者送检的各类临床样本, 包括血液、伤口分泌物、尿、痰液、引流物、胆汁及其他样本, 共分离出268株大肠埃希菌。

2. 质控菌株 采用卫生部临床检验中心标准菌株。肺炎克雷伯菌ATCC700603(ESBLs产生株), 大肠埃希菌ATCC25922(ESBLs阴性株), 均为本实验室保存。

3. 鉴定及药敏实验 API20E鉴定卡条为法国梅里埃公司产品; MH培养基及药敏纸片包括亚胺培南、氨曲南、头孢西丁、头孢曲松、阿米卡星、替卡西林/棒酸、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢唑啉、头孢他啶、环丙沙星、加替沙星、哌拉西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、妥布霉素、氨苄西林、头孢噻肟/棒酸、头孢他啶/棒酸, 均为温州康泰生物科技公司产品。

4. ESBLs检测 采用K-B纸片法确认试验。将待测菌制备成一定浊度的菌悬液, 然后均匀涂布在MH平板上, 贴头孢噻肟/棒酸与头孢噻肟, 头孢他啶/棒酸与头孢他啶2组纸片, 置37 ℃孵箱24 h后测量药敏纸片的抑菌环, 2组药敏纸片中如加棒酸比不加棒酸抑菌环直径≥ 5 mm, 则判定为ESBLs阳性, < 5 mm则为ESBLs阴性。

二、结果

1. 268株大肠埃希菌中有86株(32.09%)产ESBLs。临床各科室大肠埃希菌ESBLs阳性菌株分布情况见表1。

表1 各科室大肠埃希菌ESBLs阳性菌株分布情况

2. ESBLs阳性大肠埃希菌耐药率高, 而且多重耐药特别严重, 除对亚胺培南敏感外, 其余抗菌药物全部有不同程度的耐药性。ESBLs阴性菌株耐药率较低, 但也出现多重耐药性, 见表2。

表2 产ESBLs与不产ESBLs大肠埃希菌对20种抗菌药物的耐药性比较
三、讨论

ESBLs由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌产生, 由质粒介导, 可在细菌间传播。近年来, 产ESBLs细菌的检出率逐年上升, 并成为医院感染的重要病原菌[3], 正受到临床的高度重视。2008年1月至2010年12月3年时间我院共培养出大肠埃希菌268株, 其中ESBLs阳性86株, 检出率为33.09%。从细菌的感染来源分析, ESBLs阳性大肠埃希菌感染科室分布较广, 以呼吸科和肿瘤科为主。呼吸科和肿瘤科的患者多患有慢性疾病, 住院时间长, 且多使用介入性诊疗手段。由此可以推测, 抗菌药物的长期使用和各种介入性检查治疗是导致产ESBLs大肠埃希菌感染和传播的重要因素。

ESBLs是由广谱β -内酰胺酶基因TEM、SHV经过1个或几个氨基酸置换后产生的突变衍生物。因其作用底物大, 耐药性增强, 使细菌对青霉素和一、二、三代头孢类抗菌药物及单环耐药, 但对头霉素、碳青酶烯及酶抑制剂敏感。表2显示除亚胺培南外, ESBLs阳性大肠埃希菌对其他19种抗菌药物的耐药性均远高于ESBLs阴性大肠埃希菌, 尤其对头孢唑啉、头孢他啶、环丙沙星、加替沙星、哌拉西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、妥布霉素、氨苄西林的耐药率均高于50.00%, 并且对头孢他啶、环丙沙星、加替沙星、哌拉西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、妥布霉素、氨苄西林等多种抗菌药物的多重耐药比例也明显高于ESBLs阴性大肠埃希菌, 与相关研究结果[4, 5]相似。充分说明了携带ESBLs质粒的菌株常伴有多重耐药机制, 对非β -内酰胺酶类抗菌药物有较高的耐药性。亚胺培南对产ESBLs大肠埃希菌的耐药率最低, 可作为治疗其感染的首选药物; 头孢西丁的耐药率为12.79%, 可作为次选药物; 氨曲南和头孢曲松的耐药率分别为12.79%和13.95%, 虽然耐药率较低, 但ESBLs可水解灭活青霉素及头孢类、单环类等β -内酰胺抗菌药物。即使体外试验敏感而临床治疗也无效, 均按耐药处理。含酶抑制剂氨苄西林/舒巴坦的耐药率高达86.05%, 妥布霉素耐药率也达96.51%, 氨苄西林耐药率也达近100%。由此可见产ESBLs菌株的多重耐药性对临床有效用药造成了严重影响。因此, 应加强对临床上分离出的革兰阴性杆菌ESBLs的检测, 合理指导临床用药。

总之, 大肠埃希菌ESBLs的检出率较高, 产ESBLs菌株比不产ESBLs菌株的耐药性严重, 且ESBLs可在细菌间传播。因此, 及时准确地检出ESBLs对临床合理使用抗菌药物及减少ESBLs在细菌间传播具有十分重要的意义。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 卓超, 苏丹虹, 李红玉, 等. 广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究[J]. 中华检验医学杂志, 2009, 32(10): 1114-1119. [本文引用:1]
[2] 曹松山, 裴保方, 陈海燕, 等. 产超广谱β-内酰胺酶细菌感染及耐药分析[J]. 中国医药指南, 2010, 8(32): 105-106. [本文引用:1]
[3] 陈慧红, 何小帆, 沈波, 等. 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的耐药分布及基因型研究[J]. 中华检验医学杂志, 2009, 32(11): 1236-1238. [本文引用:1]
[4] 黄卫春, 张蓓, 徐翀, 等. 3 812株临床常见细菌耐药性分析[J]. 检验医学, 2010, 25(5): 387-390. [本文引用:1]
[5] 刘彬, 胡昭宇, 武静, 等. 大肠埃希菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶检测[J]. 中国医学检验杂志, 2010, 11(5): 246-247. [本文引用:1]