引用本文
夏永辉, 李筱梅, 李勇, 慕悦意, 张云霞. IPF相关参数参考范围调查及其在血小板减少性疾病诊断中的探讨. 2012, 27(9): 745-748
XIA Yonghui, LI Xiaomei, LI Yong, MU Yueyi, ZHANG Yunxia.. Research of IPF related parameters and their investigation in diagnosis of thrombocytopenic disease. Labratory Medicine, 2012, 27(9): 745-748  
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IPF相关参数参考范围调查及其在血小板减少性疾病诊断中的探讨
夏永辉, 李筱梅, 李勇, 慕悦意, 张云霞
中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院检验科,天津 300020

作者简介:夏永辉,男,1978年生,学士,主管技师,主要从事临床检验工作。

通讯作者:李筱梅,联系电话:022-23909064。

摘要
目的

建立天津地区健康成人未成熟血小板(IPF)相关参数的参考范围及探讨其在血小板减少性疾病鉴别诊断中的价值。

方法

采用XE-5000全自动血液分析仪检测天津地区2 600名健康成人外周血中未成熟血小板绝对数[IPF(#)]、未成熟血小板比例[IPF(%)]、高荧光未成熟血小板比例[H-IPF(%)]及血小板计数(PLT),同期测定23例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者、29例急性再生障碍性贫血(AA)患者、10例急性早幼粒细胞白血病(AML-M3)患者、24例AA经抗胸腺细胞球蛋白治疗后缓解(AA-CR)患者外周血的相同参数。比较各疾病组与健康对照组之间各参数的差异,分析各参数在各组疾病中的诊断价值。

结果

由健康人群得出95%参考范围分别为IPF(#):0.7~5.6×109/L;IPF(%):0.3%~2.8%;H-IPF(%):0.0%~0.8%;PLT:143~333×109/L;以上参数除PLT外,男、女之间差异有统计学意义( P<0.05)。ITP组和AML-M3组IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)及PLT 4项参数与健康对照组比较,差异均有统计学意义( P均<0.05);AA组IPF(#)、IPF(%)及PLT 3项参数与健康对照组比较,差异有统计学意义( P<0.05);AA-CR组IPF(#)及PLT 2项参数与健康对照组比较,差异有统计学意义( P<0.05)。IPF(%)对ITP的诊断敏感性为90.0%、特异性为95.7%、最大尤登指数为85.7%。IPF(#)对AA的敏感性为90.0%、特异性为100%、最大尤登指数为90%。H-IPF(%)在ITP组和AML-M3的诊断敏感性分别为98.3%、82.5%,特异性分别为69.7%、90.0%,最大尤登指数分别为77.9%、72.5%。

结论

建立了天津地区健康成人的IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)的参考范围,并提示不同的PLT相关新参数在不同的血小板减少性疾病中都有一定的临床应用价值。

关键词: 未成熟血小板; 血小板; 血小板减少性疾病; 全自动血液分析仪
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)09-0745-04
Research of IPF related parameters and their investigation in diagnosis of thrombocytopenic disease
XIA Yonghui, LI Xiaomei, LI Yong, MU Yueyi, ZHANG Yunxia.
Department of Clinical Laboratory, Institute of Hematology, Chinese Academy of Medical Science and peking Union Medical College, Tianjin 300020, China
Abstract
Objective

To establish the healthy subjects' immature platelet fraction (IPF) parameter reference range in Tianjin, and to investigate its significance in the diagnosis of thrombocytopenic disease.

Methods

By XE-5000 automatic hematology analyzer, 2 600 healthy subjects' peripheral blood absolute value of immature platelet fraction [IPF(#)],the percentage of immature platelet fraction [IPF(%)],the percentage of high fluorescence immature platelet fraction[H-IPF(%)] and platelet(PLT) in Tianjin were detected. These parameters in 23 patients with idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), 29 patients with acute aplastic anemia (AA), 10 patients with acute promyelocytic leukemia ( AML-M3 ) and 24 patients with AA treated with anti-thymocyte globulin remission after treatment ( AA-CR ) were detected. The differences between disease group with various diseases and the healthy control group were compared, and the parameter diagnosis significances in various diseases were analyzed.

Results

For healthy control group, the 95% reference ranges were IPF (#): 0.7-5.6×109/L,IPF (%): 0.3%-2.8%,H-IPF(%):0.0%-0.8% and PLT:143-333×109/L. The above parameters except PLT had statistical significance between males and females ( P<0.05 ). In ITP group and AML-M3 group, IPF(#), IPF(%), H-IPF(%) and PLT had statistical significance compared with healthy control group ( P<0.05 ). In AA group, IPF(#), IPF(%) and PLT had statistical significance compared with healthy control group( P<0.05 ). In AA-CR group, IPF(#) and PLT had statistical significance compared with healthy control group( P<0.05 ). The sensitivity of IPF(%) in ITP group was 90.0%, the specificity was 95.7% and the largest Youden index was 85.7%. The sensitivity of IPF (#) in AA group was 90.0%, the specificity was 100%, and the largest Youden index was 90%. The sensitivities of H-IPF (%) in ITP group and AML-M3 group were 98.3% and 82.5%, the specificities were 69.7% and 90.0%, and the largest Youden indices were 77.9% and 72.5%.

Conclusions

The reference ranges of IPF(#), IPF (%) and H-IPF (%) among healthy subjects in Tianjin are established, and the different PLT parameters in different thrombocytopenia disease have certain clinical significance.

Keyword: Immature platelet fraction; Platelet; Thrombocytopenic disease; Automatic hematology analyzer

血小板(PLT)计数是临床最常用的实验室检验指标, 其对血小板减少性疾病的诊断、疗效分析、疾病过程监测和预后判断有重要的意义。随着血液分析仪检测功能的不断增加, 与PLT相关的检测参数越来越多, 未成熟血小板(immature platelet fraction, IPF)即是其检查的一个参数。IPF与原先文献报道的流式细胞仪检测的网织血小板(reticulated platelet, RP)[1]是相同的概念, 都是反映血液中胞浆内含有较多量RNA的PLT的数量和比例。与流式细胞检测相比, 血液分析仪检测的特点是速度快, 而且与血常规同步完成, 因此其临床应用将更为普及。为此, 我们对刚引进的Sysmex XE-5000血液分析仪IPF检测参数进行了相关研究。

材料和方法
一、研究对象

1. 健康对照组 2009年4月1日至2009年6月19日对天津市2 600名健康成人的标本进行检查, 人群年龄18~60岁, 其中男1 300名, 中位数年龄 39岁, 女1 300名, 中位数年龄 39岁。体检正常(体检内容包括血常规、尿常规、阴道分泌物检查、宫颈刮片检查、肝肾功能、血糖、血脂、癌胚抗原、甲胎蛋白、X线胸片、B超、心电图等), 要求近1个月无服药史, 女性在非月经期内。

2. 疾病分组 特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者23例, 急性再生障碍性贫血(AA)患者29例, 急性早幼粒细胞性白血病(AML-M3)患者10例, AA经抗胸腺细胞球蛋白治疗后缓解(AA-CR)患者24例。这86例患者均为中国医学科学院血液学研究所血液病医院门诊及住院患者, 且ITP组、AA组、AML-M3组均为初诊尚未治疗的患者, 全部病例诊断符合《血液病诊断及疗效标准》[2]。

3. 仪器、试剂、分析参数 Sysmex XE-5000全自动血液分析仪(日本Sysmex公司), 试剂、质控品均为原装配套进口。分析参数为未成熟血小板绝对数[IPF(#)]、未成熟血小板比例[IPF(%)]、高荧光未成熟血小板比例[H-IPF(%)]和血小板计数(PLT)。

二、方法

1. 样本采集与检测 坐位采集静脉血, 收集在乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)的真空采血管内, 室温保存。所有标本均采用自动进行模式在Sysmex XE-5000血液分析仪上检测, 并在采集后6 h内检测结束。

2. 仪器校正与质控 实验前用卫生部临床检验中心定值的新鲜静脉血对血液分析仪进行校准。实验中按仪器操作程序进行检测调试, 配套E-ECHECK高、中、低值质控物进行测试, 所有分析用参数结果均在要求范围内。

三、统计学方法

1. 数据极值的处理 按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)C28-A2文件[3]的D/R规则判断极值是否为同质个体。D=全部数据最大(小)-临近最大(小)值, R=全部数据最大值-全部数据最小值。若D/R< 1/3则保留极值, 证明来源于同质个体, 若D/R> 1/3则去除极值, 以同样方法再对临近极值进行处理。

2. 数据统计方法 使用SPSS17.0统计软件进行正态分布分析。如正态分布, 则用 x̅± 1.96s得出95%参考范围, 2组间均数比较采用方差分析。如不呈正态分布则用百分位数法得出95%参考范围, 采用2个独立样本分布位置检验分析。P< 0.05表示差异有统计学意义[3]。用受试者工作特征(ROC)曲线统计各参数的曲线下面积(AUC)、敏感性、特异性、最大尤登指数(尤登指数=敏感性+特异性-1, 越接近1越理想, 是综合评价试验真实性的指标[4])。

结 果
一、IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)、PLT参考范围的建立

结果见表1。

表1 正常人群IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)、PLT 的95%参考范围
二、各疾病组与健康对照组IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)、PLT检测结果

见表2。

表2 各组IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)、PLT的中位数
三、 IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)在各组疾病中的应用评价

IPF(#)在4个疾病组的应用评价结果见表3, 其中AA组的敏感性为90.0%、特异性为100%, 最大尤登指数为90%。IPF(%)在4个疾病组的应用评价结果见表4, 其中ITP组的敏感性为90%、特异性为95.7%、最大尤登指数为85.7%。H-IPF(%)在4个疾病组的应用评价结果见表5, 在ITP组, 其敏感性高达98.3%、特异性为69.6%、最大尤登指数为77.9%; 在AML-M3组, 其敏感性为82.5%、特异性为90.0%、最大尤登指数为72.5%。

表3 参数IPF(#)在4个疾病组中的应用评价
表4 参数IPF(%)在4个疾病组中的应用评价
表5 参数H-IPF(%)在4个疾病组中的应用评价
讨 论

血小板减少性疾病是一组临床常见的疾病, 常涉及到血液病以及其他疾病相关的继发性PLT减少, 临床表现以出血为主, 与疾病的康复关系非常密切。因此对血小板减少性疾病的早期诊断、早期治疗尤为重要。目前诊断方法主要有骨髓穿刺涂片观察巨核细胞、血小板生成素检测、可溶性PLT糖盏蛋白免疫放射分析、外周血平均血小板体积(MPV)检测等[5, 6, 7]。采用骨髓检查, 其优点是准确, 可以得到很多骨髓造血信息; 缺点是操作不易、时间长、患者痛苦多、风险大。血小板生成素检测易操作, 但非侵袭性检测时间较长、较昂贵, 因此不可靠, 而且受外周PLT影响。而Sysmex XE-5000全自动血液分析仪应用特殊的软件在网织红细胞通道内幼稚PLT中的RNA 被核酸荧光染料染色, 并使用半导体和流式技术对细胞颗粒进行分析, 根据荧光强度和前向散射光强度将网织红细胞散点图上的散点区分成成熟PLT、幼稚PLT、红细胞碎片、红细胞、网织红细胞、幼稚网织红细胞。新生的幼稚PLT较大, RNA含量较成熟红细胞多, 因此荧光强度强于成熟红细胞, 通过公式IPF(%)=IPF(#)/PLT-O, 可测出IPF(%), 而H-IPF(%)为更幼稚的IPF。由此可见IPF相关参数的检测是非侵袭性的检测, 易操作、价格低廉、是早期诊断的很好的指标。

近年来我国地区性血液学参考范围调查也有一些报道[8, 9, 10, 11, 12], 而利用全自动血液分析仪对健康成人进行检测, 得出IPF(#)、IPF(%)、H-IPF(%)的参考范围在文献上还不常见。本研究应用Sysmex XE-5000全自动血液分析仪对天津地区2 600名健康成人进行血细胞分析, 得出95%参考范围IPF(#)为0.7~5.6× 109/L, IPF(%)为0.3%~2.8%, H-IPF(%)为0.0%~0.8%, PLT为143~333× 109/L。IPF(#)、IPF(%)及H-IPF(%) 3个参数男、女之间差异有统计学意义(P< 0.05)。这一范围希望对疾病的诊断有一定的参考作用。

IPF相关参数对于血小板减少性疾病具有较好的诊断价值。初诊为ITP的患者IPF(%)显著高于健康对照组, IPF绝对值计数却低于健康对照组。这种变化是由于ITP患者PLT破坏增加, 骨髓生成PLT加快, 外周血中新生成PLT增多, 使IPF(%)升高。但由于PLT寿命明显缩短, IPF绝对值计数降低。AA组患者IPF(%)略高于健康对照组, IPF绝对值计数却低于健康对照组, 提示体内存在PLT生成减少, 与ITP不同。此结果表明IPF(%)与其绝对计数可以鉴别生成障碍还是破坏过多引起的PLT减少。因此IPF可以用于ITP及AA的临床诊断与鉴别诊断。AA患者经抗胸腺细胞球蛋白治疗后随着外周血PLT恢复正常, 使IPF(%)及IPF绝对值计数与健康对照组之间差异无统计学意义(P> 0.05)。提示IPF(%)及IPF绝对值计数与PLT计数呈负相关。ITP是因免疫性PLT破坏增加所致的血小板减少性疾病, 因此外周血中的IPF(%)增加。经治疗后PLT的破坏与新生达到一种平衡, 外周血PLT随之上升, 使IPF(%)下降。因此IPF(%)是PLT治疗有效的预测指标, 有助于判断疗效和决定激素减量的时机。这些结果与文献[13]一致。初诊为AML-M3的患者IPF(%)及H-IPF(%)也明显高于健康对照组。这种变化是由于此类患者虽然骨髓内有白血病细胞的浸润, 但仍然未能完全遏制骨髓巨核细胞产生PLT释放到外周血中, 使IPF(%)及H-IPF(%)增高, 利用这一特点可以在同其他疾病鉴别时作为一个依据。本研究通过ROC曲线分析得出IPF(%)对ITP的诊断敏感性为90.0%、特异性为95.7%、最大尤登指数为85.7%; IPF(#)对AA的敏感性为90.0%、特异性为100%、最大尤登指数为90.0%; H-IPF(%)对ITP的诊断敏感性为98.3%、特异性为69.7%、最大尤登指数为77.9%, 对AML-M3的诊断敏感性为82.5%、特异性为90.0%、最大尤登指数为72.5%。由此可见IPF(#)对AA的诊断有一定的参考价值, ITP(%)对ITP的诊断有一定的参考价值, H-IPF(%)对ITP、AML-M3的诊断有一定的参考价值。

The authors have declared that no competing interests exist.

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