1. 标本来源 高胆红素血症组:46例为绍兴市第六人民医院门诊和住院患者, 经生化检查总胆红素浓度> 150 μ mol/L。男25例, 年龄25~58岁, 中位年龄为40岁; 女21例, 年龄32~56岁, 中位年龄为36岁。对照组:胆红素正常的门诊患者24例, 男14例, 女10例, 年龄25~38岁, 中位年龄为32岁。

2. 仪器 Coulter GEN· S 全自动血液分析仪; 0412-1型离心机为上海医用机械厂生产; OLYMPUS光学显微镜。

3. 试剂 仪器采用原装进口配套试剂及质控物; 手工法白细胞分类用瑞氏染液按《全国临床检验操作规程》第3版操作。

4. 方法 46例高胆红素血症患者均在早餐前抽静脉血1.8 mL于乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K₂)真空抗凝管中, 混匀, 然后进行血细胞分析, 重复2次计数分类取均值并制备血涂片行瑞氏染色。最后对标本进行洗涤处理, 以1 000× g离心10 min。定量吸去血浆, 加入等量分析仪专用稀释液, 洗涤2次后, 轻轻混匀进行血细胞分类计数。与此同时, 用OLYMPUS光学显微镜计数分类方法作为标准方法。所有结果均在2 h内完成^[1]。

5. 统计学方法 采用SPSS 12.0软件进行统计, 所有数据以 x̅± s表示, 采用配对t检验处理, P< 0.05为差异有统计学意义。

1. 高胆红素血症对白细胞计数的影响 46例总胆红素浓度> 150 μ mol/L患者, 胆红素水平为178.0~551.6 μ mol/L, 平均水平为(318.20± 101.18) μ mol/L, 46 例中有33例仪器法检测白细胞计数高于手工法(P< 0.01), 此33 例患者的胆红素为(512.2 ± 104.35) μ mol/L。结果见表1 。

表1

表1

表1 对照组、高胆红素血症组2种方法胆红素检测结果及白细胞计数 ( x̅± s) 组别 例数 胆红素(μ mol/L) 白细胞计数( × 109/L) 手工法 仪器法 对照组 24 8.27± 3.05 6.53± 3.55 6.72± 2.95 高胆红素血症组 46 318.20± 101.18 6.58± 4.01 12.08± 8.01* 注:与同组手工法结果比较, * P< 0.01

表1 对照组、高胆红素血症组2种方法胆红素检测结果及白细胞计数

2. 高胆红素血症对白细胞分类影响及处理 33 例仪器法检测白细胞计数高于手工法的样本中, 有17例仪器法不能做白细胞分类, 白细胞分类以单核细胞增高为主(占20.0%~40.0%), 而手工镜检以正常或中性分叶核粒细胞偏高, 单核细胞正常。17例不分类的样本经处理后可分类, 散点图异常的也恢复了正常, 即五区间分界清晰, 处理后的样本白细胞分类与显微镜目测结果一致。离心洗涤前白细胞分类的不正常分类图形, 与洗涤后白细胞分类图形比较有显著改变。见图1、2。

图1

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	图1 高胆红素血症样本洗涤前白细胞分类图

图2

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	图2 高胆红素血症样本洗涤后白细胞分类图

关于血液分析仪白细胞分类异常有相关报道^[2]。仪器未能测定白细胞的原理为:在血样中加入适量溶血素后, 红细胞被破坏溶解, 白细胞形成一种膜包核结构, 机器根据其体积大小来进行计数和分类。很显然这一测定原理有一定的局限性^[3] 。黄疸是临床上常见的干扰因素, 其干扰原理还不是很清楚, 可能与红细胞膜脂质异常, 膜表面脂蛋白增多, 胆红素对溶血素中某种作用成分相抵抗等因素有关^[4] 。这时的红细胞膜对溶血素有抵抗作用, 导致大量红细胞不能被溶解而落入淋巴细胞计数范围(35~90 fL), 仪器将其计为淋巴细胞, 从而导致白细胞总数和淋巴细胞分类假性增高, 离心洗涤后, 黄疸因素去除, 因此对仪器测定的干扰作用也相应消除。

高胆红素对激光源发出的单色光在扫描细胞时可使其折射增大, 而使仪器不能正确识别各种白细胞, 不能正常分类, 散点图也发生改变, 见图1。对黄疸样本进行离心洗涤后再检测, 结果有很大改观, 并与显微镜目测一致, 见图2。高胆红素浓度的样本吸样测定后, 虽然经过机器内稀释液的稀释, 仍然可以保留一定浓度的胆红素。这部分胆红素极有可能与稳定剂起作用, 从而不能使白细胞处于原态下进行测定, 影响分类质量。故对黄疸样本进行测定出现分类异常(仪器), 离心洗涤是一种非常理想的消除影响的方法。