引用本文
杨震, 潘明, 赵海军. 轮状病毒腹泻患儿急性期异形淋巴细胞数量和T淋巴细胞亚群的变化. 2012, 27(7): 598-600
YANG Zhen, PAN Ming, ZHAO Haijun. Changes of the number of atypical lymphocyte and T-lymphocyte subsets in children with acute rotavirus diarrhea. Labratory Medicine, 2012, 27(7): 598-600  
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轮状病毒腹泻患儿急性期异形淋巴细胞数量和T淋巴细胞亚群的变化
杨震, 潘明, 赵海军
安庆市立医院,安徽 安庆 246003

作者简介:杨 震,男,1975年生,学士,主管技师,主要从事血液学检验工作。

摘要
目的

研究轮状病毒(RV)腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量和T淋巴细胞亚群的变化。

方法

采用外周血涂片瑞特染色,显微镜计数40例RV腹泻婴幼儿急性期外周血异形淋巴细胞和20名健康对照组婴幼儿的异形淋巴细胞;同时用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群。

结果

RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞计数为(16.18%±3.59%),较健康对照组明显升高( P<0.001);外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值分别为(50.93%±5.86%)、(22.02%±5.17%)、(27.07%±4.79%)及(0.84%±0.29%),较健康对照组明显下降( P<0.01)。

结论

RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量升高,淋巴细胞亚群异常;RV腹泻患儿急性期进行外周血异形淋巴细胞计数和T淋巴细胞亚群的测定可较好的反映患儿的机体免疫状态。

关键词: 异形淋巴细胞; T淋巴细胞亚群; 轮状病毒; 腹泻
中图分类号:R373.2 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)07-0598-03
Changes of the number of atypical lymphocyte and T-lymphocyte subsets in children with acute rotavirus diarrhea
YANG Zhen, PAN Ming, ZHAO Haijun
Anqing Municipal Hospital, Anqing Anhui 246003, China
Abstract
Objective

To investigate dynamic changes of the number of peripheral blood atypical lymphocyte and T-lymphocyte subsets in children with acute rotavirus (RV) diarrhea.

Methods

A total of 40 children with acute RV diarrhea and 20 healthy controls were enrolled in this study. The proportions of peripheral blood atypical lymphocytes in their peripheral blood smear with Wright stain were figured out by microscopy. Meanwhile, the T-lymphocyte subsets were examined by flow cytometry.

Results

The proportion of peripheral blood atypical lymphocytes was(16.18%±3.59%) in children with acute RV diarrhea and had an obviously increase compared with that in healthy controls( P<0.001). The percentages of CD3+, CD4+ and CD8+T cells in peripheral blood of children with acute RV diarrhea and CD4+/CD8+ ratio were (50.93%±5.86%),(22.02%±5.17%),(27.07%±4.79%) and (0.84%±0.29%) respectively. Compared with the healthy controls, the infected groups had a decreased percentage of T cells ( P<0.01).

Conclusions

There are the increasing of atypical lymphocyte number and atypical T-lymphocyte subsets in children with acute RV diarrhea. The determination of atypical lymphocyte number and T-lymphocyte subsets could satisfactorily reflect the immunological state in children with acute RV diarrhea.

Keyword: Atypical lymphocyte; T-lymphocyte subset; Rotavirus; Diarrhea

轮状病毒(rotavirus, RV)是婴幼儿急性胃肠炎的病原体之一, 某些地区腹泻患儿RV检出率达31.6%[1]。在实际工作中发现RV腹泻患儿往往伴有外周血异形淋巴细胞数量的改变及T淋巴细胞亚群的变化。为了解RV腹泻婴幼儿外周血异形淋巴细胞及淋巴细胞亚群的变化, 我们采用人工涂片染色显微镜计数和流式细胞仪对RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量计数和外周血T淋巴细胞亚群检测, 探讨RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量和外周血T淋巴细胞亚群的变化, 以了解患儿的机体免疫状态。

材料和方法
一、研究对象

40例RV腹泻患儿(患儿组)均为安庆市立医院2010年9月至2011年3月就诊的患儿, 其中男25例, 女15例, 年龄均≤ 24月, 平均年龄 (15.65± 4.49)月。所有患儿生长发育正常, 近期未患其他疾病, 患儿于急性期(发热、腹泻、呕吐后第1至第2天)就诊, 粪便A群RV抗原阳性, 诊断符合RV肠炎诊断标准[2]。对照组20名, 其中男10名, 女10名, 年龄均≤ 24月, 平均年龄(17.35± 3.69)月, 来自安庆市立医院健康体检婴幼儿。

二、标本收集

抽取患儿静脉血1 mL, 用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝, 进行流式细胞仪T淋巴细胞亚群检测。同时采取患儿末梢血检测异形淋巴细胞计数, 均匀涂片4张, 室温晾干。

三、检测方法

1.仪器与试剂 A群RV诊断试剂盒购自北京万泰药业有限公司。试剂盒采用免疫层析双抗体夹心法, A群RV单克隆抗体以胶体金标记, 严格按照使用说明书操作, 每批次均做阳性、阴性对照。瑞特染色液购自珠海BASO公司, 严格按照使用说明书操作。奥林巴斯CX21生物显微镜, 用于外周血异形淋巴细胞数量计数。水平式离心机, 上海安亭科学仪器厂, 飞鸽牌TDL-5型。流式细胞仪(美国BD公司, FACSCalibur), 试剂采用BD公司配套Musltiset试剂, CELLQuest软件进行分析。

2.外周血异形淋巴细胞数量计数 血片干燥后, 选择涂片良好的血片, 用瑞特染色液进行染色, 每张血片计数100个白细胞, 油镜(100× )在血片体尾交界处以城垛状移动分类2张血片后取平均值, 异形淋巴细胞计数以百分率(%)表示。

3.外周血T淋巴细胞亚群测定 取50μ L 含EDTA-K2抗凝标本, 加入BD公司CD3+-异硫氰酸荧光系(FITC)、CD4+-别藻蓝蛋白(APC)及CD8+-藻红蛋白(PE)鼠抗人荧光单克隆抗体各20μ L, 漩涡振荡5 s混匀, 室温避光孵育15 min, 加入溶血素500μ L, 漩涡振荡5 s混匀, 室温, 避光溶血15 min, 然后1 200× g离心10 min, 倒去上清液, 用PBS洗涤2次, 加入PBS 400 μ L漩涡振荡5 s混匀, 上机检测CD3+、CD4+、CD8+细胞的表达率, 结果以百分率(%)表示。操作严格按照实验及仪器SOP进行。

四、统计学方法

采用SPSS13.0软件进行统计分析。数据以 x-± s表示, 采用t检验分析, 以P< 0.05表示差异有统计学意义。

结 果

RV腹泻患儿急性期异形淋巴细胞比率明显高于健康对照组, 差异有统计学意义(P< 0.001); RV腹泻患儿急性期外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞百分率及CD4+/CD8+比值降低, 差异有统计学意义(P< 0.05), 见表1。

表1 RV腹泻患儿急性期与对照组婴幼儿异形淋巴细胞数量和淋巴细胞亚群结果比较 (x-± s, %)
讨 论

RV为双股RNA病毒, 属于呼肠孤病毒科, 分A到G群7个组。仅A群组、B群组引起人类严重发病, 其中A群组致婴幼儿腹泻, B群组与成年人腹泻有关。主要为粪-口传播, 潜伏期为1~2 d。RV引起的腹泻在发展中国家是引起婴幼儿死亡的主要原因之一。

Downey于1923年首次描述了异形淋巴细胞的形态并将其分为3种形态特征。现代医学研究表明外周血异形淋巴细胞是母细胞化的淋巴细胞, 即成熟淋巴向幼稚阶段转化, 在转化的过程中形态多变。多种病毒, 如EB 病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、柯萨奇病毒(CVB)、腺病毒(ADV)等感染均可引起细胞免疫应答, 导致外周血中出现大量反应性变异T 淋巴细胞和少量的B 细胞, 形成外周血异形淋巴细胞[3]。儿童感染RV后, 血浆中出现针对RV的特异性IgM、IgA、IgG抗体, 患儿体液免疫与非特异性免疫功能都受到影响[4]。本研究显示, RV腹泻患儿急性期异形淋巴细胞比例增高, 其异形淋巴细胞数量与RV感染后婴幼儿机体免疫状态及病情发展预后的关系有待进一步深入研究。

T细胞是参与机体细胞免疫反应并在免疫应答中起着主导作用的一组免疫细胞, 所有T细胞均有共同的标志性抗原, 不同功能的T细胞亚群又有各自的标志性抗原。CD3+T细胞代表总T淋巴细胞, CD3+T细胞数量下降, 说明机体参与细胞免疫反应的免疫活性细胞不足[5]。本实验表明, 婴幼儿感染RV后, 急性感染期CD3+、CD4+、CD8+、细胞数量下降, CD4+/CD8+比值下降, 机体出现免疫调节功能紊乱, 与其他研究相符 [6]。如果患儿同时出现水、电解质、酸碱平衡紊乱, 婴幼儿更容易受到感染, 引起心肌等胃肠道外损害, 重症者可感染中枢神经系统及呼吸系统, 必须引起重视 [7]。

RV具有较高的传染性, 目前对RV腹泻尚无特异性治疗方法, 对患儿的监测治疗要及时进行。外周血异形淋巴细胞计数对婴幼儿损伤极小, 容易被家属接受。实验方法简便易行, 不需要较高的医疗成本, 报告结果迅速, 值得临床推广。RV腹泻婴幼儿急性期进行外周血异形淋巴细胞计数, 配合T淋巴细胞亚群的测定可较好的反映婴幼儿的机体免疫状态。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 孙小红, 林祥宏, 徐元宏, 等. 310例婴幼儿腹泻轮状病毒检测及流行病学分析[J]. 安徽医药, 2010, 14(12): 1419-1420. [本文引用:1]
[2] 全国腹泻病防治学术研讨会组织委员会. 中国腹泻病诊断治疗方案[J]. 中国实用儿科杂志, 1998, 13(6): 61-64. [本文引用:1]
[3] 郑岚. 外周血异型淋巴细胞检测的临床意义[J]. 蚌埠医学院院报, 2010, 35(5): 516-517. [本文引用:1]
[4] 朱振华, 张黎明, 陈琪. 儿童轮状病毒腹泻特异性免疫应答研究[J]. 浙江医学, 2010, 32(6): 864-866. [本文引用:1]
[5] 何英, 张允奇, 吴润香, 等. 慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化与病毒复制的关系[J]. 检验医学, 2009, 24(11): 808-811. [本文引用:1]
[6] 魏扬. 外周血异型淋巴细胞增高患儿病原学和细胞免疫变化的探讨[J]. 中国实用儿科杂志, 2003, 18(6): 362-363. [本文引用:1]
[7] 陈斌, 李晓春. 112例小儿轮状病毒肠炎合并心肌损害临床分析[J]. 安徽医药, 2009, 13(9): 1097. [本文引用:1]