引用本文
傅立强, 桑列勇, 蒋国瑾. ELISA试剂检测抗HCV反应性结果分析. 2012, 27(7): 588-591
FU Liqiang, SANG Lieyong, JIANG Guojin.. Result analysis on anti-HCV reaction determination by ELISA reagents. Labratory Medicine, 2012, 27(7): 588-591  
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ELISA试剂检测抗HCV反应性结果分析
傅立强, 桑列勇, 蒋国瑾
绍兴市中心血站,浙江 绍兴 312000

作者简介:傅立强,男,1975年生,学士,主管技师,主要从事血液学检验工作。

摘要
目的

探讨丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)进口酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂在血液筛查中的效果及与国产试剂、重组免疫印迹试验(RIBA)确证检测的相关性。

方法

用RIBA确证试剂及国内销量前2名的国产抗HCV ELISA试剂对56例进口抗HCV ELISA试剂检测呈反应性的标本进行检测分析。

结果

56例标本经RIBA确证结果为阳性12例,不确定18例,阴性26例。3种试剂均为反应性的9例标本中,确证阳性7例,不确定1例,阴性1例。

结论

目前市售的丙型肝炎ELISA试剂均存在较大的生物学假阳性,不同试剂间检测结果仍存在一定差异。为确保输血安全,建议有条件的采供血机构实验室抗HCV检测时以国产和进口试剂联合检测为佳。

关键词: 丙型肝炎病毒抗体; 酶联免疫吸附试验; 重组免疫印迹试验
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)07-0588-04
Result analysis on anti-HCV reaction determination by ELISA reagents
FU Liqiang, SANG Lieyong, JIANG Guojin.
The Blood Center of Shaoxing,Zhejiang Shaoxing 312000, China
Abstract
Objective

To evaluate the efficiency of imported anti-hepatitis C virus (HCV) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reagent in blood screening test and analyze the correlations among imported ELISA reagent,domestic ELISA reagent and recombinant immunoblot assay(RIBA).

Methods

A total of 56 anti-HCV positive specimens tested by imported ELISA reagent were retested by 2 domestic ELISA reagents, and the confirmatory test RIBA was also carried out.

Results

Among 56 positive specimens with imported anti-HCV ELISA reagent,the confirmatory test RIBA showed that the 12 specimens were confirmed to be positive ,18 specimens were indeterminate and 26 specimens were negative. Of the 9 specimens which were positive with 3 ELISA reagents,7 specimens were confirmed to be positive,1 specimen was indeterminate and 1 specimen was negative.

Conclusions

The false positivity with anti-HCV ELISA reagent is obvious, and there would be some different results with different anti-HCV ELISA reagents. For ensuring the blood safety,the imported ELISA reagent and the domestic ELISA reagent should be used simultaneously in anti-HCV screening test.

Keyword: Anti-hepatitis C virus antibody; Enzyme-linked immunosorbent assay; Recombinant immunoblot assay

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后肝炎和散发性非甲非乙型肝炎的主要病原, 而HCV抗体(抗HCV)可作为HCV感染的标志物。目前, 世界各国的采供血机构均采用抗HCV酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂对献血者进行筛查, 以防止输血后HCV的传播。1998年我国卫生部规定血液筛查应分别使用2种不同厂家抗HCV ELISA试剂进行2次检测[1]。为了提高血液检测敏感性, 增强抗HCV检测的互补性, 现国内不少采供血机构都引入了进口试剂作为抗HCV 2次检测中的1次。为了探讨抗HCV进口ELISA试剂在血液筛查中的效果, 本研究对56例抗HCV进口ELISA试剂检测呈反应性献血者标本, 用2种不同厂家国产试剂进行检测, 并用重组免疫印迹试验(RIBA)进行抗体确证[2]。

材料和方法
一、标本来源

从2010年1至6月的22 568名无偿献血者血液标本中, 收集进口抗HCV诊断试剂检测为阳性的血清标本56份, 收集后立即于-20 ℃以下保存备用。

二、试剂与仪器

进口筛查试剂为美国食品和药品管理局(FDA)批准的某第3代ELISA测定抗HCV试剂(简称试剂A, 批号为EXE178等)。2家国产筛查试剂为国内销量前2名的试剂, 分别简称为试剂B(批号为2010015802等)、试剂C(批号为C20100405等), 筛查检测使用的仪器为Xantus全自动加样仪和BEPⅢ 全自动ELISA分析仪。确证试剂为Chrion RIBA HCV 3.0 SIA(简称RIBA, 批号为YA1209)。所有试剂均在有效期内使用, 仪器设备定期进行维护、校验。

三、方法

所有标本均按说明书进行3种试剂的单孔检测, 由Itswell软件进行判断。如单孔检测呈阴性反应, 即判断为阴性。如单孔检测呈初次反应性, 需用原有试剂对相应标本进行双孔复试, 双孔均呈无反应性则判为阴性; 双孔均呈反应性, 或双孔中有1孔呈反应性, 则判为阳性。RIBA确证试验按照试剂说明书操作和判读, 其条带强度的判读和结果的解释见表1和表2。

表1 RIBA抗HCV反应条带强度的判读标准
表2 RIBA抗HCV反应结果的判读标准
结 果
一、 RIBA确证结果及条带分布

56例试剂A检测抗HCV呈反应性标本经RIBA检测, 确证阳性12例, 不确定18例, 阴性26例, 结果见表3。确证结果为阳性及不确定的条带分布多集中于c33c和c22p, 具体分布见表4。

表3 56例试剂A反应性标本做RIBA检测情况
表4 确证结果为阳性及不确定标本的条带分布
二、 2种国产试剂与RIBA确证结果、进口试剂检测结果的符合性

56例抗HCV进口试剂检测呈反应性标本经2家国产试剂检测, 均有反应性标本共9例, 具体结果见表5; RIBA确证结果与2家国产试剂检测结果符合情况见表6。

表5 56例标本2家国产试剂检测结果的符合情况
表6 RIBA确证结果与2家国产试剂检测结果符合情况
三、反应性标本强度(S/CO值)与确证结果间的关系

9例3种试剂均有反应性标本的S/CO值与确证结果的关系见表7。

表7 9例3种试剂均呈反应性标本的S/CO值与确证结果的关系
讨 论

HCV感染在实验室的诊断指标主要为检测抗体、抗原和RNA。目前采供血系统血液筛查大多采用ELISA检测血清或血浆中抗HCV。虽然抗HCV ELISA试剂从1990年诞生以来, 现已发展到第3代, 敏感性和特异性都有很大的提高, 但是由于抗HCV ELISA试剂在HCV抗原结合、来源、用量及包被工艺方面的差异, 不同试剂间检测效果仍存在一定差异。

本研究中的56例标本经RIBA确证后发现, 无论是进口试剂还是国产试剂均存在较大的生物学假阳性。这与ELISA在方法学上的缺陷有关, 抗HCV检测出现假阳性主要原因有:(1)高球蛋白血症[3]; (2)类风湿因子(RF)的干扰, 如血清或血浆标本中存在RF, 则其可与固相上的IgG和酶标记的IgG结合, 从而出现假阳性反应; (3)标本中超氧化物歧化酶的干扰; (4)用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯[4]; (5)试剂的保存、运输等环节影响。故当ELISA间接法测抗HCV出现反应性结果时, 要考虑到假阳性存在的可能性, 应进行相应的确证试验后再报告结果。国外有研究者用受试者工作特征(ROC)曲线分析法对72 695名献血者抗HCV免疫检测的S/CO值与是否需要进一步确证进行了相关性分析, 认为二者间有很强的相关性, 用S/CO值的高低来决定是否需要做确证试验是非常值得的[5]。目前, 美国已经采用了疾病预防控制中心(CDC)的新导则, 现在仅对筛查试验S/CO值≥ 3.8的标本做荧光定量聚合酶链反应(PCR)以确诊。

从表5中可知, 国产试剂与进口试剂间、不同国产试剂间检测结果的差异比较大, 这主要在于不同的试剂盒, 包被抗原的来源及包被量有所差异、抗原配伍不合适或相互干扰, 使试剂盒对标本内出现的针对不同片段的抗HCV反应不同, 从而出现不同的试剂盒对同一份抗体的测定结果可能完全不同, 尤其是针对单个片段抗体阳性的标本。有研究者对日本9种抗HCV免疫筛查试剂的临床应用与特点进行分析评价后发现, 7种试剂间抗原的相似性和相符性之间没有相关性, 每种试剂均有自己的特性, 如果仅用1种试剂去判断HCV感染应当十分谨慎[6]。

从表3、表7中可看出, 12例RIBA确证为阳性的标本, 其检出数随ELISA检测S/CO值的增大而增多, 且呈正相关, 这与文献[5, 7]报道的完全吻合。在3种试剂均为反应性的9例标本中, 有7例确证为阳性, 占77.8%, 可见3种试剂结果均为反应性结果对确证结果有较高的预测值, 说明近年来国产抗HCV检测试剂的质量有了一定的提升, 这与文献[8]报道的相拟。但2家国产试剂对12例确证阳性标本的检测结果均未能与确证试验结果全部吻合, 这说明进口试剂在某些单片段阳性标本的检测上还是有一定优势的, 这与文献[6, 9]报道相符。

综上所述, 目前市售的丙型肝炎ELISA检测试剂均存在较大的生物学假阳性, 不同试剂间的检测结果仍存在一定差异, 作为采供血机构, 为确保输血安全, 提高血液检测能力, 应增强2次检测间的互补性, 建议有条件的实验室以采用国产与进口试剂联合检测为佳。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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