引用本文
王林, 张国平. 应用梯度板法检测无偿献血者ABO血型探讨. 27(2): 81-82
WANG Lin, ZHANG Guoping. Investigation on the application of trapezoid micro-plate method in determining ABO blood-group in blood donors. Labratory Medicine, 27(2): 81-82  
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应用梯度板法检测无偿献血者ABO血型探讨
王林, 张国平
焦作市中心血站,河南 焦作 454000

作者简介：王林,男,1960年生,学士,主管技师,主要从事血型血清学检验、血液免疫学检验工作。

摘要
目的

探讨梯度板法在无偿献血者ABO血型检测中的应用。

方法

选取已知血型的血液标本,通过正交试验、优化梯度板法检测ABO血型正、反定型实验参数,并常规应用于无偿献血者血液标本的检测。

结果

检测无偿献血者血液标本24 922例,ABO血型1次判读符合率99.6%。发现流动采血车采血前初定ABO血型错误5例,A2型2例,B3型1例,不规则抗体1例。

结论

梯度板法1次判读符合率高,对亚型及不规则抗体检出能力强。实现了血型实验的标准化、自动化、实验结果的数据化及网上自动发布,满足了血站简便、快速、准确的检测大批量无偿献血者血液标本的需求,值得推广应用。

关键词: 梯度板法; ABO血型
中图分类号:R457.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)02-81-02
Investigation on the application of trapezoid micro-plate method in determining ABO blood-group in blood donors
WANG Lin, ZHANG Guoping
Jiaozuo Blood Center, Henan Jiaozuo 454000,China
Abstract
Objective

To investigate the application value of trapezoid micro-plate method in determining ABO blood-group in blood donors.

Methods

The known blood-group samples were collected. The samples and their forward and reverse test parameters of ABO blood-group were detected by orthogonal design and trapezoid micro-plate method. These test methods were routinely used for blood sample testing among blood donors.

Results

A total of 24 922 blood donor samples were determined by trapezoid micro-plate method, which showed that the correct interpretation at one time was 99.6%. However, 5 cases of ABO blood-group detected in moving vehicle for donation were wrong, and 2 cases of A2 group,1 case of B3 group and 1 case of irregular antibody were also found.

Conclusions

The correct interpretation at one time of trapezoid micro-plate method to detect ABO blood-group is high, and the ability of trapezoid micro-plate method to detect ABO subgroup and irregular antibody is great. Trapezoid micro-plate method brings about the standardization,automation of ABO blood-group test and digitization of test results, and the test results are issued automatically on net. It is simple, rapid and accurate for trapezoid micro-plate method to detect a large number of blood donor samples,and it is worth that trapezoid micro-plate method is used to the determination of ABO blood-group extensively.

Keyword: Trapezoid micro-plate method; ABO blood-group
引言

试管法是经典的ABO血型实验方法[1], 由于其实验步骤繁琐、周期长、效率低、存在人为影响因素等原因, 不适合于采供血机构对大批量无偿献血者的检测。本站利用全自动加样仪及数字血型仪, 采用梯度板技术, 研究建立了梯度板法检测ABO血型正、反定型方法, 并对实验条件进行了优化选择, 取得了满意的应用效果。

材料和方法
一、研究对象

2010年1月至2010年10月焦作市中心血站无偿献血者血液标本24 922例。

二、试剂

抗-A、抗-B标准血清(长春生物制品研究所博德公司提供); ABO试剂红细胞(上海血液生物医药有限责任公司提供)。以上试剂均经中国药品生物制品检定所批检合格, 在有效期内使用。

三、主要仪器

Xantus双机械臂全自动加样仪(瑞士Xantus公司); Poseidon数字血型仪(深圳爱康医疗电子有限公司); 将数字血型仪装载于Xantus双机械臂全自动加样仪台面的右侧, 作为加样仪的1个模块, 整合为Xantus全自动血型仪; 120孔V型梯度板(日本Olympus公司); 96孔平底微板(丹麦Nunc公司); KA-2200细胞洗涤离心机(日本KUBOTA)。

四、应用软件

Xantus全自动血型仪采用Xantus软件控制加样及梯度板的抓取、移动; Poseidon血型判读软件 (深圳爱康医疗电子有限公司提供); 现代血站标准管理系统(河北唐山现代软件有限公司)。

五、实验参数的优化

选取已知血型的A型、B型、O型、AB型无偿献血者血液标本, 与抗-A、抗-B标准血清及ABO试剂红细胞, 经正交实验优化实验参数[2]。(1)正定型实验参数的优化 确定抗-A、抗-B标准血清稀释倍数:根据梯度板的结构特点及试验原理, 要保证抗原抗体的适当比例, 以利于形成的红细胞凝块黏挂于孔壁的阶梯上, 便于实验结果的判读, 同时又要避免形成的红细胞凝块过大而滑落于孔底, 干扰结果的观察。因此, 标准血清采用原液、1∶ 2、1∶ 5、1∶ 7、1∶ 10等5个稀释度进行条件优化; 红细胞浓度的选择:分别配制1.5%、3.0%、4.5%、6.0%红细胞生理盐水悬液; 静置时间:分别于静置40 min、50 min、60 min时, 进行结果判读; (2)反定型实验参数的优化 确定标本血清用量:分别取标本血清40 μ L、50 μ L、60 μ L进行条件优化; 红细胞用量的选择:分别取试剂红细胞 20 μ L、25 μ L、30 μ L进行实验; 静置时间:分别于静置 40 min、50 min、60 min时, 进行结果判读。

六、实验方法

经上述正交实验, 根据红细胞凝集强度、1次判读正确率、实验时间等情况, 得出如下实验条件, 并常规应用于无偿献血者血液标本的ABO血型检测。(1)正定型 抗-A、抗-B标准血清用生理盐水1∶ 7稀释(其效价为1∶ 16~1∶ 32), 制备标准血清工作液; 取压积红细胞18 μ L, 生理盐水400 μ L, 在预稀释板中充分混合, 制备红细胞悬液; 吸取红细胞悬液加注到梯度板中各2孔, 每孔50 μ L, 再分别加注抗-A、抗-B标准血清工作液各30 μ L, 振荡混匀, 静置50 min后, 数字血型仪判读结果; (2)反定型 吸取血清加注到梯度板中各2孔, 每孔50 μ L, 再分别加注ABO试剂红细胞各25 μ L; 振荡混匀, 静置50 min后, 数字血型仪判读结果; (3)结果判定 工作人员需目测梯度板上的实验结果, 并与Poseidon血型判读软件判读结果、标本试管上标记的血型三对照, 血型结果一致时, 方可确认血型结果。如有ABO正、反定型结果不符、结果可疑等, 使用试管法重新实验, 必要时, 应用抗人球蛋白法、酶法、吸收放散实验进行血型鉴定[3]。

七、质量控制

1. 试剂对照 每次实验前, 将制备的抗-A、抗-B标准血清工作液, 分别与A型、B型试剂红细胞反应, 以验证试剂质量。

2. 每年参加卫生部临床检验中心组织的血型检测室间质量评价活动。

结果

应用梯度板法, 检测无偿献血者的血液标本24 922 例, ABO血型1次判读符合率为99.6%(24 822/24 922)。正定型1次判读后需复核的标本125例, 反定型1次判读后需复核的标本147例。经试管法复核, 发现有5例流动采血车采血前初定ABO血型错误, 有4例正、反定型不符标本。正、反定型不符标本经血型室鉴定, 2例为A2型, 1例为B3型, 1例为血清中存在抗M不规则抗体。

讨论

梯度板为孔壁呈阶梯状的V型微孔板(10× 12孔), 阶梯级宽和级高约等于1个红细胞直径。存在相应抗原抗体时, 发生凝集反应, 红细胞形成凝块, 黏挂于阶梯上, 均匀分布于孔底; 无相应抗原抗体存在时, 无凝集反应发生, 红细胞呈游离状态, 因红细胞具有弹性和可塑性, 沿阶梯滚落于孔底中央, 形成实心圆点。经数字血型仪扫描读板、数码成像后, Poseidon血型判读软件处理图像数据, 判读血型结果。梯度板法检测24 922例标本, ABO血型一次判读符合率达99.6%, 并且对抗原性较弱的亚型、不规则抗体检出能力强, 提高了血型实验的准确性, 进一步保证了临床用血安全。

梯度板法检测无偿献血者ABO血型, 灵敏度高、凝集效果好、结果易于观察, 通过血型判读软件与标本条码进行关联、结果判读及数据保存、传输, 实现了血型实验的标准化、规范化、自动化、实验结果的数据化及网上自动发布, 满足了血站简便、快速、准确的检测大批量无偿献血者血液标本的需求, 值得推广应用。

另外, 标准血清在使用前经过了生理盐水的适当稀释, 因此, 每次实验前, 应对抗-A、抗-B标准血清工作液、ABO试剂红细胞进行试剂质控, 以便及时发现不符合质量标准试剂的非预期使用, 保证ABO血型结果的准确性[4]。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部. 中国输血技术操作规程(血站部分)[M]. 天津: 科学技术出版社, 1997: 60-62. [本文引用:1]
[2] 朱岚, 黄飚, 张珏, 等. 血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用[J]. 检验医学, 2009, 24(2): 124-126. [本文引用:1]
[3] 中华人民共和国卫生部医政司. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 253-258. [本文引用:1]
[4] 张国平, 王林, 韩惠云. ABO血型实验的室内质控方法探讨[J]. 中国现代医生, 2010, 48(11): 85. [本文引用:1]