引用本文
范公忍, 李娟, 王帅, 胡学玲. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测对判断病毒复制的临床意义. 27(2): 145-147
FAN Gongren, LI Juan, WANG Shuai, HU Xueling. Clinical significance of hepatitis B virus large envelope protein detection for judging HBV replication. Labratory Medicine, 27(2): 145-147  
Permissions
Copyright©2012, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测对判断病毒复制的临床意义
范公忍, 李娟, 王帅, 胡学玲
北京军区总医院肝病研究所,北京 100700

作者简介：范公忍,男,1958年生,学士,副主任技师,主要从事肝病免疫学及分子生物学检验工作。

摘要
目的

探讨血清病毒外膜大蛋白(LHBs)与乙型肝炎病毒(HBV)感染和复制的相关性。

方法

检测282例乙型肝炎患者和30名健康对照者血清HBV DNA载量、LHBs和乙型肝炎e抗原(HBeAg)。以HBV DNA载量为标准,对LHBs和HBeAg进行对比分析。

结果

HBV DNA载量<103拷贝/mL的107例乙型肝炎患者中LHBs阳性9例(8.41%),HBeAg阳性8例(7.48%);LHBs、HBeAg与HBV DNA载量相同等级的线性相关系数分别为0.972 1和0.837 0( P<0.01、 P<0.05);LHBs与HBeAg诊断HBV感染的敏感性分别为92.57%、62.35%,特异性分别为82.52%、77.17%,阳性预测值分别为77.43%、64.08%,阴性预测值分别为59.18%、51.22%,准确率分别为97.05%、89.16%。

结论

LHBs能较好地反映HBV复制情况,对乙型肝炎患者进行LHBs、HBV DNA及HBeAg联合检测将有助于疾病的诊断、疗效观察及预后判断。

关键词: 外膜大蛋白; 乙型肝炎; 生物学标记
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)02-145-03
Clinical significance of hepatitis B virus large envelope protein detection for judging HBV replication
FAN Gongren, LI Juan, WANG Shuai, HU Xueling
Institute of Hepatology, Beijing Army General Hospital, Beijing 100700,China
Abstract
Objective

To investigate the correlation of serum hepatitis B virus (HBV) large envelope protein (LHBs) with HBV infection and replication.

Methods

Serum HBV DNA load, LHBs and hepatitis B e antigen (HBeAg) of 282 patients with hepatitis B and 30 healthy controls were detected. LHBs was compared with HBeAg basing on HBV DNA load.

Results

Among 107 patients whose serum HBV DNA loads were <103 copies/mL, 9(8.41%) patients were LHBs positive, and 8(7.48%) patients were HBeAg positive. The linear correlation coefficients of LHBs and HBeAg with the scale of HBV DNA load were 0.972 1 and 0.837 0 respectively( P<0.01, P<0.05). To diagnose HBV infection, the sensitivities, specificities, positive predictive values, negative predictive values and accuracies of LHBs were 92.57%, 82.52%, 77.43%, 59.18% and 97.05%, respectively, and the values of HBeAg were 62.35%, 77.17%, 64.08%, 51.22% and 89.16%, respectively.

Conclusions

LHBs is a good index to reflect the situation of HBV replication. The combined determination of LHBs, HBV DNA and HBeAg of hepatitis B patients contributes to the clinical diagnosis, therapeutic effect monitoring and prognosis evaluation.

Keyword: Large envelope protein; Hepatitis B; Biological marker
引言

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染在我国具有较高的发病率, 也是引起肝硬化病原发性肝癌的重要病因之一。长期以来, 在乙型肝炎的诊断中, 人们习惯用HBV DNA或乙型肝炎e抗原(HBeAg)是否阳性来判断乙型肝炎患者体内HBV复制及传染性的强弱。但随着HBeAg变异株的出现, HBV外膜大蛋白(HBV large envelope protein, LHBs)又成为HBV感染、复制和乙型肝炎患者诊断、治疗和预后评估的一个重要指标[1]。为了进一步探讨LHBs与乙型肝炎标志物(HBV-M)及HBV DNA的关系, 我们检测了282例HBV感染者的LHBs、HBV-M和HBV DNA水平。

材料和方法
一、材料

选择北京军区总医院2010年4至11月住院或门诊的乙型肝炎患者282例, 其中男197例、女85例, 年龄15~68岁。病例诊断均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学会、肝病学分会修定的“ 病毒性肝炎防治方案” 中病毒性肝炎诊断标准[2]。健康对照组30名, 为正常体检者, 其中男19名、女11名, 年龄21~53岁。待检血清分离后-20 ℃冰箱保存。

二、试剂与方法

HBV-M和LHBs均采用酶联免疫吸附试验(ELISA), HBV-M试剂盒购自万泰实业生物技术有限公司; LHBs试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供; 仪器为伯乐550型全自动酶联仪。HBV DNA定量采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR), 试剂由深圳匹基生物工程股份有限公司提供, 仪器为德国罗氏公司Light Cycler荧光定量PCR仪。所有操作步骤均严格按试剂盒说明书进行。

三、统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计学处理, 采用χ 2检验和四格表概率法及Pearson关联性分析, P< 0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、HBV感染者不同模式中LHBs和HBV DNA检测结果

30名健康对照者血清HBV DNA定量和LHBs检测结果均为阴性。在115例HBeAg阳性的乙型肝炎患者中, HBV DNA阳性率为98.8%, LHBs阳性率为94.2%, 两者之间差异无统计学意义(χ 2=1.79, P> 0.05); 在167例HBeAg阴性的乙型肝炎患者中, LHBs和HBV DNA的阳性率均呈现不同程度下降, 与HBeAg阳性组比较, 差异有统计学意义(χ 2=5.32, P< 0.05), 见表1。

表1 HBV-M不同模式中HBV DNA、LHBs检测结果[例(%)]
二、血清HBV DNA载量与LHBs、HBeAg结果的相关性

LHBs阳性率与HBV DNA载量之间存在关联性(χ 2=9.035, P< 0.01), 且随着HBV DNA载量的增加而增加; HBeAg阳性率与HBV DNA载量之间亦存在关联性(χ 2=7.203, P< 0.05)。HBV DNA定量拷贝数与LHBs吸光度(A)值的相关系数(r)为0.972 1 (P< 0.01), 与HBeAg阳性数的r为0.837 0(P< 0.05)。表明HBV DNA拷贝数与LHBs及HBeAg阳性率之间有很好的一致性, 见表2。

表2 血清HBV DNA拷贝数与LHBs、HBeAg结果的相关性
三、HBV DNA与LHBs、HBeAg阳性率比较

血清HBV DNA阳性患者中LHBs阳性率(90.83%)高于HBeAg阳性率(61.14%) (χ 2=35.17, P< 0.01)。LHBs与HBV DNA的符合率大于HBeAg与HBV DNA的符合率(P< 0.05)。

提示LHBs检测反映HBV复制程度优于HBeAg检测, 见表3。

表3 HBV DNA与LHBs、HBeAg阳性率比较[例(%)]
四、LHBs与HBeAg临床价值评价

以HBV DNA定量结果为标准, 采用四格表概率法对LHBs、HBeAg进行临床价值评价, 结果见表4。

表4 LHBs与HBeAg检测指标临床价值评价(%)
讨论

近年来研究发现, 由HBV S基因编码合成的LHBs存在于感染性颗粒(Dane颗粒)和亚病毒颗粒上, 具有独特的双重跨膜拓扑结构, 其内侧可以和HBV核壳体膜结合, 外侧可与病毒受体结合, 是HBV颗粒成熟包装的关键, 具有反式激活病毒复制的作用, 并与病毒颗粒从细胞内释放调节有关。过量LHBs在肝细胞内质网积聚是导致内质网应激反应的关键因素[3, 4]。临床检测证实LHBs与HBV DNA及HBeAg之间具有良好的相关性, 可作为一种新的判断病毒复制的诊断指标[5]。

本研究结果显示, 在HBV感染的HBeAg阳性血清中, LHBs和HBV DNA的阳性率较高, 两者之间差异无统计学意义(P> 0.05)。表明在此种情况下, LHBs在判断HBV感染状态下HBV DNA与HBeAg的临床意义是一致的, 但在HBeAg 为阴性或HBeAg转化抗HBe时, LHBs和HBV DNA仍具有较高的阳性率, 说明HBeAg阴性患者病毒复制并未终止或病毒血症并未消失[6]。分析可能是部分患者体内HBV前C或CP区基因发生了突变, 导致HBeAg不能合成[7], 临床检测HBeAg敏感性降低, 甚至出现假阴性结果。但这部分患者HBV复制活跃、病情凶险, 预后往往较HBeAg阳性患者更差。因此, LHBs检测具有独立的临床价值, 在一定程度上可以弥补HBV-M检测的不足, 可以更加真实地反映HBV在患者体内复制和感染状况。

HBV DNA是目前临床判断HBV复制和传染性大小的可靠指标, 但不能反映缺乏核酸的亚病毒的存在和载量, 可出现假阴性结果[8]。HBV基因变异和抗病毒药物的广泛应用又常导致HBeAg阴性或HBV-M出现特殊阳性模式, 常常给乙型肝炎患者的诊断和治疗带来困难[9]。本研究结果显示, 在HBV DNA检测阴性或载量低于检测水平线以下(≤ 1.00× 103拷贝/mL)的乙型肝炎患者中, LHBs检测阳性率高达8.41%, 表明在这部分病例中LHBs仍有较高的阳性检出率, 分析原因可能是含有LHBs的亚病毒颗粒(管状颗粒)的数量远远高于完整病毒颗粒的数量, 故血液中消退的时间也晚于HBV DNA。另外, 抗病毒药物只能清除体循环中的病毒, 而肝细胞内的cccDNA仍存在或复制, 富含LHBs的亚病毒颗粒在一段时间内仍不会消失。随着HBV DNA载量的增加, LHBs与HBeAg阳性检出率也明显增加。HBV DNA阳性的乙型肝炎患者血清LHBs的阳性率(90.83%)高于HBeAg阳性率(61.14%, P< 0.05), 且LHBs与HBV DNA的符合率高于HBeAg与HBV DNA的符合率。因此, LHBs的特异性、准确率均优于传统的HBeAg检测, 说明LHBs在反映HBV复制及传染性方面比HBeAg更有意义。

综上所述, 血清LHBs阳性的乙型肝炎患者体内HBV复制活跃、HBV DNA载量水平高。血清标志物联合检测比单纯血清标志物的检测更能反映HBV在体内的存在及复制程度。特别是在用血清学模式判断HBV感染持续存在与复制情况时更有价值。临床上对于LHBs持续阳性的乙型肝炎患者提示病毒仍有复制, 具有一定的传染性, 应引起临床医生的重视。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 范公忍, 韩聚强, 任永强, 等. 乙型肝炎病毒包膜大蛋白检测与病毒复制的相关性研究[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2010, 19(10): 880-882. [本文引用:1]
[2] 中华医学会传染病与寄生虫学分会, 中华医学会肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案[J]. 中华传染病杂志, 2001, 19(1): 56-62. [本文引用:1]
[3] Lambert C, Mann S, Prange R. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J]. J Gen Virol, 2004, 85(Pt5): 1221-1225. [本文引用:1] [JCR: 3.127]
[4] Bruss V. Envelopment of the hepatitis B virus nuclecapsid[J]. Virus Res, 2004, 106(2): 199-209. [本文引用:1] [JCR: 2.745]
[5] Fan X, Fang D, Bin D, et al. Serum levels of surface large envelope proteins: prognostic marker for hepatitis B e antign-negative patients with adefovir dipivoxil treatment[J]. Antivir Ther, 2009, 14(8): 1149-1156. [本文引用:1] [JCR: 3.073]
[6] Lim SG, Cheng Y, Guindon S, et al. Viral quasi-species evolution during hepatitis B e antigen seroconversion[J]. Gastroenterology, 2007, 133(3): 951-958. [本文引用:1] [JCR: 12.821]
[7] 孙颖, 辛绍杰, 雷厉, 等. 乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义[J]. 世界华人消化杂志, 2006, 14(3): 354-357. [本文引用:1]
[8] Chan HL, Wong VW, Tse AM, et al. Serum hepatitis B surface antigen quantitation can reflect hepatitis B virus in the liver and predict treatment response[J]. Clin Gastroenterol Hepatol, 2007, 5(12): 1462-1468. [本文引用:1]
[9] 刘灿, 陈静, 李雯. 化学发光法与ELISA法对乙肝两对半少见模式测定的比较分析[J]. 中国实验诊断学, 2007, 11(12): 1680-1681. [本文引用:1]