引用本文
张海燕, 王万海, 夏雪山, 王永恒, 冯悦, 苏田溶, 张晓燕. 大理市HIV感染者中HCV感染状况的研究. 27(2): 141-144
ZHANG Haiyan, WANG Wanhai, XIA Xueshan, WANG Yongheng, FENG Yue, SU Tianrong, ZHANG Xiaoyan. Investigation of HCV co-infection among HIV-1 infected patients in Dali city. Labratory Medicine, 27(2): 141-144  
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《检验医学》编辑部
大理市HIV感染者中HCV感染状况的研究
张海燕1, 王万海2, 夏雪山3, 王永恒1, 冯悦3, 苏田溶1, 张晓燕2
1.大理市疾病预防控制中心,云南 大理 671000
2.上海市公共卫生临床中心,上海 201508
3.昆明理工大学,云南 昆明 650093

通讯作者：张晓燕,联系电话：021-37990333-7310。

作者简介：张海燕,女,1975年生,学士,副主任医师,主要从事获得性免疫缺陷综合征防治工作。

基金:2010年度上海市优秀学科带头人计划（A类）（10XD1403500）
摘要
目的

探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者中丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染率,并了解HCV对HIV-1感染者CD4+T细胞计数的影响。

方法

采用横断面研究方法,在云南大理市招募HIV-1感染者,分别采用血清学和核酸方法检测HCV混合感染。

结果

在526例HIV-1感染者中,静脉吸毒者占94.3%,其余为性途径感染。86.9%(457/526)为HCV血清学检测抗体阳性,其中HCV核酸阳性者占78.3%。在HCV 血清学阴性的69例中,24例HCV RNA >1 000 IU/mL。由于引入HCV核酸检测方法,现场HCV混合感染的发现率增加了4.6%(24/526),所调查的HIV-1感染者中HCV混合感染率为91.4%。HCV混合感染者的CD4+ T细胞计数明显低于HIV-1单纯感染者。

结论

在HCV感染的高流行区或髙危人群中,HCV与HIV-1共感染率较高。筛查HIV-1感染时应加强对HCV的检测,有助于对HCV感染进行早期诊断并开展HCV的早期治疗,减少HCV对HIV-1感染者的不利影响。

关键词: 人类免疫缺陷病毒; 丙型肝炎病毒; 核酸检测; 混合感染; CD4+T细胞计数
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)02-141-04
Investigation of HCV co-infection among HIV-1 infected patients in Dali city
ZHANG Haiyan1, WANG Wanhai2, XIA Xueshan3, WANG Yongheng1, FENG Yue3, SU Tianrong1, ZHANG Xiaoyan2
1.Dali Center for Disease Control and Prevention, Yunnan Dali 671000, China
2.Shanghai Public Health Clinical Center, Shanghai 201508, China
3. Kunming University of Science and Technology, Yunnan Kunming 650093, China
Abstract
Objective

To investigate the ratio of hepatitis C virus (HCV) co-infection and the impact of HCV co-infection on CD4+T cell counts in human immunodeficiency virus 1 (HIV-1)-infected patients.

Methods

A cross-sectional study was performed among HIV-1-infected patients for assessment of HCV co-infection determination with serology and nucleic acid test in Dali Yunnan.

Results

Among 526 HIV-1-infected patients, the injecting drug users accounted for 94.3%, and the others were infected through sex. The percentage of anti HCV-IgG positive was 86.9%(457/526), and the positive accordant rate of HCV RNA and anti HCV-IgG was 78.3%. However, HCV RNA >1 000 IU/mL was detected in 24 patients out of 69 anti HCV-IgG negative patients. As for HCV nucleic acid test, the detection rate of HCV co-infection increased 4.6% (24/526). The ratio of HCV co-infection was 91.4%. The CD4+ T cell counts among single HIV-1 infection were significantly higher than those among HCV co-infection.

Conclusions

The ratio of HIV-1/HCV infection is high in high-risk areas or population, and the determination of HCV during screening HIV-1 infection may help for the early diagnosis and treatment of HCV and decrease the effect of HIV-1 infection patients.

Keyword: Human immunodeficiency virus 1; Hepatitis C virus; Nucleic acid test; Co-infection; CD4+ T cell count
引言

目前, 我国人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染的主要传播途径为性途径和静脉吸毒途径 [1]。由于HIV-1和丙型肝炎病毒(HCV)感染与传播途径的相似性, 既往有偿献血和吸毒人群中的HIV-1感染者存在较高比例的HCV混合感染[2, 3]。目前对HIV-1混合感染HCV后促进感染者肝脏纤维化、增加晚期肝脏功能失常和死亡率等已达成共识[4, 5], 但对于HCV混合感染对获得性免疫缺陷综合征(AIDS)疾病进展的影响存在很大分歧。有报道称HCV 混合感染降低CD4+ T细胞计数上升的趋势, 增加AIDS患者疾病进展和死亡[6]。 较高水平的HCV RNA与CD4+ T细胞减少相关[7]; 也有报道显示HCV的混合感染与HIV-1单一感染疾病进展没有明显差异[8]。本研究采用横断面研究方法, 采用血清学和核酸检测的方法对比分析HIV-1感染者中HCV的混合感染率, 以期对HIV-1混合HCV感染现场流行病学疫情估计方法的确立, 以及相关综合防控措施的制定提供科学依据, 并了解HCV对HIV-1感染者CD4+T细胞计数的影响。

材料和方法
一、材料

1. 研究对象 2007年9至12月在云南省大理市吸毒人群中招募的HIV-1感染者作为研究对象, 通过现场访谈完成调查问卷的填写, 获取人口学、行为病学及临床一般资料。研究对象须能够和愿意提供书面知情同意书。

2. 检测样本 采集每位受试对象的外周血10 mL, 样本采集后在6 h内运达实验室, 新鲜血液用于CD4+T细胞检测。分离血清储存于-20 ℃, 进行HIV-1感染的确证试验及HCV IgG、IgM检测; 同时分离血浆储存于-80 ℃冰箱内, 用于HCV核酸检测。

二、方法

1. 血清学检测 HIV-1抗体确证试验采用GENELABS Diagnostics HIV BLOT 2.2 WB 试剂盒进行。HCV IgG检测采用北京万泰公司生产的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒。操作程序按照检测试剂盒说明书进行。

2. HCV核酸定量检测 采用美国Roche公司全自动核酸提取仪提取血浆HCV RNA, 操作步骤参照使用说明书。以深圳匹基生物技术开发有限公司HCV核酸扩增荧光检测试剂盒测定。取HCV RNA 2 μ L为模板进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR), 合成相应的cDNA, 取4 μ L cDNA为模板进行荧光实时定量PCR, 检测相应病毒载量。仪器为ABI7300型荧光定量PCR仪。

3. HIV-1感染者CD4+ T细胞检测 所有试剂及器材均来自Becton Dicknson 公司。操作按照使用说明书进行。向TruCOUNT绝对计数管中加入20 μ L CD3-异硫氰酸(FITC)/CD4-藻红蛋白(PE)/CD45-多甲藻叶绿素蛋白(PerCP)试剂; 然后加入50 μ L混匀的血样; 充分混匀, 室温(2025 ℃)避光反应1530 min; 加入FACS Lysing Solution(1X)溶血素450 μ L; 充分混匀, 室温(2025 ℃)避光放置15 min; 利用流式细胞仪, 分析检测CD4+ T淋巴细胞亚群数量。

三、 统计学方法

用SPSS 10.0统计软件进行数据分析, 计量资料采用方差分析及q检验, P< 0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、人口学特征

526例HIV-1感染者中男456例(86.7%), 女70例(13.3%), 年龄1855岁。在HIV-1感染途径中, 静脉吸毒感染者496例(94.3%), 性途径感染者30例(5.7%)。感染HIV-1的时间, 85.0%以上的感染者在5年内, 52.7%的感染者在3年内。 感染者的CD4+T细胞数372 161个/μ L, 平均(443.2± 261.5)个/μ L。

二、血清学与核酸方法检测HCV混合感染率比较分析

526例HIV-1感染者中有457例(86.9%)HCV抗体阳性, HCV RNA在检测线(1 000 IU/mL)以上者占78.3%。在 HCV 抗体阴性的69例中, HCV RNA在检测线以上的有24例(34.8%), 见表1。由于引入HCV核酸检测的方法, 云南大理现场HIV-1感染者中HCV混合感染的发现率提高了4.6%(24/526)。因而, 所调查的HIV-1感染者中HCV混合感染率为91.4%。

表1 HCV抗体与核酸检测结果比较
三、 HCV混合感染对HIV-1感染者CD4+ T细胞计数的影响

以HCV 感染状况为基础对所有的HIV-1感染者进行分组。抗HCV(-)HCV RNA(-)45例; 抗HCV(+)HCV RNA(+)358例; 抗HCV(+)HCV RNA(-)99例; 抗HCV(-)HCV RNA(+)24例。观察不同组CD4+ T细胞计数的差异, 以研究HCV 感染对HIV-1 感染者体内免疫系统的影响。各组间HIV-1病毒载量相比较, 差异无统计学意义, 排除了HIV-1病毒复制组间差异对CD4+ T细胞计数的影响。抗HCV(-)HCV RNA(-)组的CD4+T细胞计数明显高于抗HCV(+)HCV RNA(+)组及抗HCV(+)HCV RNA(-)组(P=0.000 2、P=0.014 5), 但与抗HCV(-)HCV RNA(+)组比较, 差异无统计学意义; 抗HCV(+)HCV RNA(+)、抗HCV(+)HCV RNA(-)及抗HCV(-)HCV RNA(+)3组间CD4+ T细胞计数比较, 差异无统计学意义(P> 0.05), 见表2。

表2 HCV混合感染对HIV-1感染者CD4+ T细胞计数的影响(个/μ L)
讨论

目前全球约有1.7亿HCV感染者, 其中我国的感染者近4 000万。HCV感染的慢性率高达70%, HCV慢性感染与肝硬化以及肝细胞癌高度相关。近年来在既往有偿献血和静脉吸毒途径造成的HIV-1感染者中发现较多的HCV混合感染者[2, 3], 使HCV感染诊断与防治的形势日趋严峻。由于AIDS造成的免疫缺陷, 部分HCV感染者血清阳转滞后或不产生抗体[9]; 在HCV感染的“ 窗口期” 也没有抗HCV产生。如本研究中, 抗HCV阴性的69例HIV-1感染者中, 进行其HCV RNA检测, 发现24例HCV RNA水平在检测线 (1 000 IU/mL) 以上, 占到 34.8%。因此, 识别出这些“ 沉默型” HCV感染者不仅有利于客观分析HCV混合感染对AIDS疾病进展的影响, 而且早期诊断还有助于早期开展干扰素抗HCV的治疗, 防止HCV的进一步传播。但在实际工作中, 血清中病毒核酸含量太少致核酸提取时可能失败, PCR 试剂的检测敏感性、样本和扩增体系中可能存在某些抑制病毒核酸扩增的因素等, 均可能影响病毒核酸的检出。此外, HCV核酸是RNA, 极易被RNA 酶降解, 而RNA 酶无处不在, 样本保存及处理不当也会影响HCV RNA的检出率。另一部分原因可能与HCV病毒血症消退或病毒基因变异等因素有关[10]。如本研究中99例抗HCV 阳性者的HCV RNA检测阴性可能与上述因素有关。HCV RNA试剂可以检出HCV感染的“ 窗口期” , 但在抗HCV确证阳性的样本中也存在一定比例的HCV RNA阴性。因此, 仅用HCV抗体或核酸检测试剂单独检测均不能对HCV感染状态做出正确的判断。故在HIV-1感染者中筛查HCV混合感染可选择两者结合起来, 缩短HCV感染“ 窗口期” , 早期发现HCV混合感染。本研究作为HIV-1感染者的大样本研究, 首先采用HCV血清学抗体检测方法, 然后对所有受检样本进行HCV RNA检测, 结果显示HCV混合感染率为91.4%, 进一步证实中国静脉吸毒人群中, HIV-1感染者中存在较多的HCV混合感染。

许多研究发现, HIV-1感染加速HCV疾病进程, 但HCV感染是否会加速HIV-1的疾病进程历来争议较多[2, 6, 7, 8, 11, 12, 13, 14]。造成这种差异性的原因存在多种可能性, 如研究方法与监测指标不同、研究对象的地域以及遗传背景的不同、感染途径不同等。其中一个重要因素在于对HCV混合感染的判定标准各不相同。有的研究采用单纯的血清学抗体检测, 有的采用HCV RNA定性检测, 还有的增加了HCV病毒载量测定。而本研究同时采用血清学抗体及HCV病毒载量检测的方法, 精确筛查出HCV混合感染者。其结果显示, 同时感染HCV 的HIV-1 感染者的CD4+ T细胞计数明显低于单纯感染HIV-1的感染者, 并且他们感染HIV-1的时间85.0%以上在5年以内及各组间HIV-1病毒载量相比较差异无统计学意义, 这样在本研究中既避免感染时间对宿主CD4+T细胞计数的影响, 又避免HIV-1病毒载量对宿主CD4+T细胞计数的影响。因此, 本研究结果提示了HCV 可能对HIV-1的致病性有一定的加剧作用, 这与一些先前的研究报道相符[6, 7, 11, 12, 13, 14]。可能与HCV自身可抑制CD4+ T细胞增殖和促使CD4+ T细胞易于凋亡相关[15, 16]。在抗HCV(-)HCV RNA(-)组与抗HCV(-)HCV RNA(+)组相比较, 尽管CD4+ T细胞计数差异无统计学意义, 但也存在这样的趋势, 这可能是此组人群处于HCV感染的早期, HCV还未对HIV-1感染者体内免疫系统发生明显的影响。

本研究在研究对象的招募过程中, 由于无法招募到足够数量的HCV单一感染者作为研究对照, 在研究设计上存在一定的缺陷, 因此, 对于本研究中发现的HCV混合感染对于HIV-1感染者CD4+T细胞计数影响的这一趋势, 尚需在今后的工作中扩大样本量, 加以验证。

总之, 在HCV感染的高流行区或髙危人群中, HIV-1/HCV混合感染率较高, 在筛查HIV-1感染时, 应加强HCV混合感染的检测。首先进行HCV血清学检测, 然后对HCV血清学检测阴性的个体, 进行HCV RNA检测。这样既降低了检测成本, 同时也避免了HCV感染漏检的可能, 并为早期诊断HCV提供依据, 有助于早期开展干扰素抗HCV的治疗, 防止HCV的进一步传播和对HIV-1感染者的不利影响。而对于单纯感染HIV-1的感染者应进行HCV疫苗的注射来预防其HCV的混合感染。

The authors have declared that no competing interests exist.

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