作者简介:许泼实,男,1969年生,硕士,副主任技师,主要从事临床免疫学基础与应用研究。
研究中原地区人乳头瘤病毒(HPV)感染率及亚型分布,探讨HPV感染与年龄的关系。
方法采用聚合酶链反应(PCR)及导流杂交技术对11 861例就诊的女性进行HPV分型检测。
结果HPV感染率为29.0%,其中高危型HPV16感染率最高(8.3%),其次依次为低危型HPV6(6.0%)、低危型HPV11(5.5%)、高危型HPV52(4.6%)、高危型HPV58(3.8%)。不同年龄组间HPV感染率差异有统计学意义( P<0.01), 20~30岁组感染率(42.8%)最高,其次为30~40岁组(25.7%)和50岁以上组(23.2%),最低的为40~50岁组(17.9%)。
结论中原地区女性HPV感染的优势亚型为HPV16,20~30岁女性HPV感染率最高。
To investigate the infection rate of human papillomavirus (HPV), the distribution of HPV subtypes and the relationship between HPV infection and age.
MethodsPolymerase chain reaction (PCR) and channelization hybridization were used to detect the subtypes of HPV among 11 861 women.
ResultsThe infection rate of HPV was 29.0%. The predominant subtype was high risk-HPV16 (8.3%), followed by low risk-HPV6 (6.0%), low risk-HPV11 (5.5%), high risk-HPV52 (4.6%) and high risk-HPV58 (3.8%). The infection rate of HPV was statistically significant in different age groups ( P<0.01). The highest infection rate distributed in 20-30 years old group (42.8%), followed by 30- 40 years old group (25.7%), more than 50 years old group (23.2%) and 40-50 years old group (17.9%).
ConclusionsThe predominant subtype of HPV infection is HPV16, and the 20-30 years old women have the highest infection rate in Chinese central plains.
人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是一种无包膜的小DNA病毒, 根据HPV亚型致癌的危险程度, 可将其分为低危型HPV和高危型HPV。有关宫颈癌的病因学研究表明, 绝大多数的宫颈癌患者高危型HPV感染为阳性[1, 2, 3, 4, 5]。要控制和减少宫颈癌的发生, 关键是筛查和消除HPV感染[6]。本研究运用基因扩增及导流杂交技术, 对11 861例来河南省人民医院就诊并进行HPV检测的女性进行HPV基因分型, 旨在了解中原地区女性HPV感染的流行病学信息, 为宫颈癌防治及流行病学研究提供依据。
2009年3月至2011年7月来河南省人民医院进行HPV检测的女性11 861例, 年龄20~91岁。其中20~30岁3 878例, 30~40岁3 599例, 40~50岁3 079例, 50岁以上1 305例。
标本采集前要求被检查者3 d内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗, 24 h内无性行为, 在非月经期内进行标本采集。使用凯普一次性宫颈细胞采集器, 将宫颈刷置于宫颈口, 轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转4~5圈, 慢慢取出宫颈刷, 将其放入标有患者编号和日期的取样管中, 取样管内已加有专用细胞保存液, 拧紧瓶盖, 送检标本。对于不能马上进行检测的标本, 置于4 ℃保存, 在2周内完成检测。
2.HPV基因分型检测
(1)DNA分离提取:取保存有宫颈细胞的细胞保存液0.5 mL, 13 000× g离心1 min, 弃上清后, 使用潮州凯普生物化学有限公司生产的细胞裂解液提取DNA, 严格按照试剂盒说明书进行操作; (2)PCR扩增:使用潮州凯普生物化学有限公司生产的聚合酶链反应(PCR)试剂盒, 将PCRMix 23.25 μ L、Taq酶0.75 μ L、DNA模板1 μ L混匀成25 μ L反应体系, 使用德国Biometra公司生产的PCR仪进行扩增, 扩增程序为:95 ℃ 9 min, 95 ℃ 20 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 72 ℃ 5 min, 40个循环; (3)导流杂交:使用潮州凯普生物化学有限公司生产的杂交试剂盒和HybriMax医用核酸分子快速杂交仪进行杂交分型, 具体操作步骤见杂交试剂盒说明书。
采用SPSS 16.0统计软件进行χ 2检验, 以α =0.05为检验水准。
11 861例受检者中21种HPV亚型均有检出, 其中高危型HPV16感染率最高, 为8.3%(包括多重感染), 其次依次为低危型HPV6(6.0%)、低危型HPV11(5.5%)、高危型HPV52(4.6%)、高危型HPV58(3.8%)。见表1。
![]() | 表1 11 861例女性HPV感染亚型构成比 |
HPV阳性例数为3 438例, 总感染率为29.0%(3 438∕ 11 861)。在HPV阳性患者中, 主要以单一感染为主, 占53.1%, 其次为二重感染(30.8%)。多重感染(包括二重感染、三重感染、四重感染、五重感染)共占47.0%, 与单一感染所占比例大致相当。见表2。
![]() | 表2 3 438例HPV阳性者感染类型构成比 |
11 861例受检者中, 20~30岁、30~40岁、40~50岁、≥ 50岁各年龄组HPV的感染率分别为42.8%、25.7%、17.9%、23.2%, 各年龄组间感染率差异有统计学意义(χ 2=6.105, P< 0.01)。20~30岁组感染率较高, 其次为30~40岁组和50岁以上组, 最低的为40~50岁组。见表3。
![]() | 表3 不同年龄组女性HPV的感染情况 |
宫颈癌占女性癌症死亡顺位的第2位, 仅次于乳腺癌, 全世界每年有20万妇女死于宫颈癌。近年来我国宫颈癌的发生率有明显上升和年轻化的趋势, 严重影响着妇女的生活和健康。现有研究已经证实, HPV感染是子宫上皮内瘤变和宫颈癌的主要原因[1, 2, 3, 4, 5]。HPV可能的致癌机制为:在机体免疫力低下时HPV整合到机体的核染色体基因组上, 致使抑癌基因p53失活, 进而引起细胞增殖调节失控[7]。宫颈癌的发生过程可归结为:持续高危型HPV感染, 宫颈上皮不典型增生, 宫颈原位癌, 宫颈癌[2], 这一过程大约需要10年之久。因此, 如果我们能及早发现HPV特别是高危型HPV感染, 并进行积极有效的治疗, 将会大大降低宫颈癌的发生率。之前所用的宫颈巴氏涂片法及最近开展起来的薄层液基细胞学方法由于技术本身的特点存在漏诊现象, 而且HPV感染的潜伏期可以仅有感染却不发病, 这也增加了细胞形态学检查的漏诊概率。通过宫颈拭子采集宫颈脱落细胞进行HPV DNA检测可在一定程度上避免这些问题, 是目前HPV筛查的有效手段[6]。
我们运用PCR及导流杂交技术对11 861例来自中原地区的女性进行HPV分型检测。结果发现21种HPV亚型均有检出, 其中高危型HPV16感染率最高(8.3%), 其次依次为低危型HPV6(6.0%)、低危型HPV11(5.5%)、高危型HPV52(4.6%)、高危型HPV58(3.8%)。不同地区HPV感染率及感染亚型存在地域性差异, 在中国大陆主要以HPV16亚型为主, 低危型中6和11亚型发病率较高, 本研究结果与之相符。16型和58型HPV感染是影响宫颈癌发生的重要因素, 我们统计的中原地区女性这2个HPV亚型的感染率都较高, 提示患者发生癌变的可能性较大, 要及时进行防治以降低癌变率。有研究报道, 重庆永川地区主要的HPV感染亚型依次为16型(9.92%)、6型(5.74%)、11型(4.36%)、33型(1.32%)、58型(1.05%)[8]。本研究结果与之大致相当, 说明中原地区HPV感染的优势型别与重庆永川地区相差不大, 2个地区的HPV感染状况存在相似之处, 究其原因可能为两地区在地理位置上毗邻之故。在对HPV阳性者感染类型的分析中, 我们发现单一型感染占HPV感染者的53.1%, 多重感染占47.0%, 说明中原地区HPV感染者中多重感染占了很大的比例, 有报道称HPV多重感染对宫颈病变的发展有促进作用[9], 这需要我们提高警惕, 做好多重感染者的防治工作。
通过对不同年龄组间HPV感染进行χ 2检验, 得知不同年龄组间感染率差异有统计学意义, 20~30岁组感染率较高, 其次为30~40岁组和50岁以上组, 最低的为40~50岁组。宫颈HPV感染与年龄相关, 有研究表明低年龄组女性(< 35岁)HPV感染率较高[10], 我们统计得出20~30岁女性感染率较高, 与此研究结果较为符合。有文献报道意大利女性HPV感染20~30岁者发病率最高[11], 美国20~24岁女性发病率最高[12], 芬兰调查研究发现25~29岁是高发病年龄段[13]。这些研究结果均说明低年龄段的女性HPV感染率较高, 究其原因可能为低年龄段女性性生活较为频繁导致HPV感染机会增多。
我国地域宽广, HPV感染存在明显的地域性差异。明确不同地区HPV感染的优势亚型, 不仅可以使HPV感染亚型的检测更加有针对性, 而且可以为本地区HPV感染的防治及疫苗研发提供重要的参考价值。本次HPV感染调查为中原地区HPV感染现状提供了一组可靠数据, 为HPV流行病学研究及宫颈癌的防治提供了重要依据。
The authors have declared that no competing interests exist.
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