引用本文
季正华, 计雪强, 黄益萍, 何亚香, 邵雪君, 徐俊, 胡绍燕. t(8;21) 儿童急性髓系白血病伴cCD79a的异常表达. 2012, 27(11): 1013-1016
JI Zhenghua, JI Xueqiang, HUANG Yiping, HE Yaxiang, SHAO Xuejun, XU Jun, HU Shaoyan. Abnormal expression of cCD79a in acute myeloid leukemia with t (8;21) in children. Labratory Medicine, 2012, 27(11): 1013-1016  
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t(8;21) 儿童急性髓系白血病伴cCD79a的异常表达
季正华, 计雪强, 黄益萍, 何亚香, 邵雪君, 徐俊, 胡绍燕
苏州大学附属儿童医院,江苏 苏州 215003

作者简介:季正华,男,1964年生,学士,副主任技师,主要从事临床血液学检验工作。

摘要
目的

报道自2005年来在190例急性髓系白血病(AML)患儿发现的7例t (8;21)(q22;q22)M2亚型中cCD79a异常表达的细胞生物学特征。

方法

分析7例t (8;21)(q22;q22)M2伴cCD79a异常表达的双表型AML患儿细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(MICM)分型及临床特征,取同期诊断的20例t (8;21)的AML-M2患儿作为对照组。

结果

83例t (8;21)(q22;q22)AML-M2患儿占同期连续190例AML患儿的43.7%,其中有7例伴有cCD79a异常表达,占8.4%。伴有cCD79a异常表达的t (8;21)(q22;q22)的AML-M2患儿其骨髓细胞形态学均显示为急性粒细胞白血病M2,分类中原始细胞均显著增多;免疫表型均为髓系伴B淋系表达;CD34为高表达阳性;均有t (8;21)(q22;q22)染色体改变,且常伴有染色体复杂易位或缺失等改变;融合基因 AML1 /ETO检测均为阳性;临床治疗对兼顾髓系和淋系的联合治疗方案效果较好。

结论

t(8;21)M2是儿童AML中的最常见类型,易伴有B淋巴细胞表型共表达。

关键词: cCD79a; 急性髓系白血病; 免疫表型; t (8; 21)易位
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)12-1013-04
Abnormal expression of cCD79a in acute myeloid leukemia with t (8;21) in children
JI Zhenghua, JI Xueqiang, HUANG Yiping, HE Yaxiang, SHAO Xuejun, XU Jun, HU Shaoyan
Children Hospital Affiliated to Soochow University,Jiangsu Suzhou 215003,China
Abstract
Objective

To report the cell biology characteristics of the abnormal expression of cCD79a in 7 cases of acute myeloid leukemia (AML)-M2 with t (8;21) (q22; q22) selected from 190 AML children since 2005.

Methods

The characteristics of cell morphology,immunology,cytogenetics, molecular biology (MICM) and clinical manifestations in 7 cases of AML-M2 with t(8;21) (q22; q22) expressing cCD79a abnormally were analyzed. The control group including 20 cases of AML-M2 with t (8;21) was detected during the same period.

Results

The 83 cases of AML-M2 t (8;21) (q22; q22) accounted for 43.7% of 190 continuous childhood AML patients,and the percentage of the cCD79a expression in the 83 cases of AML-M2 t (8;21) was 8.4% (7 cases). In the cases of AML-M2 with t (8;21) (q22;q22) expressing cCD79a abnormally,the bone marrow cell morphology showed the acute myelogenous leukemia M2. The initial cells all increased evidently in the classification. The immunophenotypes were all the expressions of myeloid markers with B-lymphoid. CD34 had high positive expression. There were changes of the chromosome with t (8;21)(q22;q22) ,also with the complexly translocation or depletion. The detections of the confluent gene AML1 /ETO were positive. It had achieved good response to combined chemotherapy targeted to both myeloid and lymphoid leukemia.

Conclusions

t (8;21) M2 is the most frequent type of childhood AML. It may be related with abnormal expression gene of B lymphocyte phenotype.

Keyword: cCD79a; Acute myeloid leukemia; Immunophenotype; t (8; 21) translocation

t (8; 21) (q22; q22)易位是和M2型急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)相关的一种特异性染色体重排, 也是最常见的染色体异常之一。含1种以上表型的白血病分类为髓系伴淋系表达, 或淋系伴髓系表达, 或双表型白血病(biphenotypic acute leukemias, BAL)。cCD79a是判断B淋系的一种特异性及敏感性较高的标志。我们对苏州大学附属儿童医院近7年来发现的7例t (8; 21)AML伴cCD79a异常表达的患儿临床和实验室资料进行回顾性总结, 探讨其临床和生物学特征。

材料和方法
一、病例资料

从2005年1月至2011年11月间连续在苏州大学附属儿童医院初治的190例AML患儿中选出83例t(8; 21)(q22; q22)AML-M2患儿, 其中7例伴cCD79a异常表达, 男5例, 女2例, 中位年龄4.7(3~7)岁。对照组为同期诊断的20例t (8; 21)的AML-M2患儿。

二、细胞形态学观察

骨髓涂片后采用瑞-吉氏染色镜检, 细胞组织化学检查包括过氧化物酶(POX)、非特异性酯酶、氟化钠抑制试验和糖原染色。骨髓细胞形态学分型按最新的世界卫生组织(WHO)分型标准分型。

三、细胞免疫表型检测

治疗前抽取2~3mL骨髓, 肝素抗凝, 采用活细胞流式细胞术直接免疫荧光标记, 试剂为直标单克隆抗体; T淋巴细胞系列包括cCD3、CD2、CD7; B淋巴细胞系列包括cCD79a、CD10、CD19、CD20; 髓系细胞系列单克隆抗体包括cMPO、CD13、CD14、CD33、CD117; 胞浆抗原为cCD3、cCD79a、髓过氧化物酶(MPO); 造血干/祖细胞单克隆抗体为CD34。胞浆抗原阳性细胞≥ 10%, CD34抗原阳性细胞≥ 10%, 其余抗原阳性细胞≥ 20%为阳性诊断指标。仪器为美国Beckman Coulter 公司的EPICS-XL 四色流式细胞仪。试剂为美国Beckman Coulter 公司产品。

四、细胞遗传学检查

在治疗前抽取骨髓5 mL, 用肝素抗凝, 采用直接法和24 h培养法制备染色体。核型分析采用R带或G带显带技术, 异常核型描述根据人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN, 1995)识别和描述, 每份标本计数20个分裂相。其异常诊断标准为:至少3个细胞有同样的染色体增加或结构异常, 或至少3个细胞有一致的染色体丢失。

五、分子生物学检测

分别于治疗前抽取肝素2~3 mL, 分离单个核细胞, 采用TRIZOL一步法提取单个核细胞的总RNA, 应用套式逆转录聚合酶链反应(PCR)检测t(8; 21)易位的AML1/ETO融合基因转录本。所用引物为A:5'-ATGGATCCTGGCGGCTGC-AACAAGACC-3'; B:5'-AGCCTGAAATGACTTA-CAC-3'; C:5'-AATCACAGTGGATGGGC-3'; D:5'-TGGAGCTCCTTGAGTAGTTG-3'。PCR反应管的总体积均为50 μ L, 含cDNA或第一轮产物5 μ L, PCR引物各1 μ L, 10 mmol/L dNTP 1 μ L, 25 mmol/L Mg2+4 μ L, 10× 缓冲液5 μ L, Taq酶0.4 μ L。反应条件为:94 ℃变性5 min; 94 ℃ 30 s, 56 ℃ 30 s, 72 ℃ 60 s, 各为30个循环; 72 ℃延伸7 min。扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定并扫描, 以1名正常儿童标本的cDNA为阴性对照, β -actin为内对照。

六、治疗

诱导化疗采用的方案为DA[柔红霉素(DNR)、阿糖胞苷(Ara2C)]、DAE[DNR、Ara2C、依托泊甙(VP16)]或HAE[三尖杉酯碱、Ara2C、VP16]。DA方案:DNR 30 mg/(m2· d)或IDA 8~10 mg/(m2· d), 每天1次, 共2 d; Ara-C 100~150 mg/(m2· d), 每12小时1次, 共7 d。DAE方案:即在DA基础上加用VP16 150 mg/(m2· d), 每天1次, 3~5 d。HAE方案:将DAE方案中的DNR改为三尖杉酯碱3~4 mg/(m2· d), 每天1次, 共7 d。巩固治疗用原方案1~2个疗程。

结果
一、患者的临床资料

患者发病年龄一般均较轻, 其中4例年龄均< 5岁, 以贫血和血小板减少首诊, 白细胞均较高, 可见髓外浸润, 可累及淋巴结。白细胞总数除2例< 10× 109/L外, 其余均> 10× 109/L, 血红蛋白均< 75 g/L, 血小板均< 35× 109/L。

二、细胞形态学分析

7例伴有染色体t(8; 21)(q22; q22)异常患儿从细胞形态学上分类, 均为M2型AML, 其原始细胞比例均显著增高, 其中3例> 60%, 而异常中性中幼粒细胞比例不高, 有断尾现象。其原始细胞胞体较大, 核有凹陷或近核浅染区, 胞浆量多, 呈嗜碱性, 内含异常的大颗粒, 常易见Auer小体和空泡。见图1。

图1 1例AML-M2a患儿骨髓中的原始细胞(瑞氏染色× 1 000)

三、细胞免疫学分析

7例患儿均为髓系伴B淋系表达。CD34高表达(> 60%), MPO高表达(> 60%), cCD79a阳性, 其中1例cCD79a表达比例为63.3%。见图2和表1。

图2 5号患儿的白血病细胞胞浆染色MPO-异硫氰酸荧光素/cCD79a-藻红蛋白流式细胞图注:MPO/cCD79a均为阳性

表1 t(8; 21)AML患儿免疫表型(%)
四、细胞遗传学分析

7例M2患儿均伴有染色体t(8; 21)(q22; q22)的结构异常, 伴有染色体数目异常4例, 其中多倍体异常1例, 伴有Y染色体缺失3例, 复杂易位1例。见表2。

表2 t(8; 21)AML患儿细胞遗传学及分子生物学分析
五、分子生物学分析

本组7例病例均做了RT-PCR检测, AML1/ETO融合基因检测均为阳性, 我们对目前已完全缓解的7例BAL, 连续作RT-PCR检测, 发现AML-ETO融合基因转为阴性的时间从2个月到1

年不等。

六、预后

7例采用AML兼顾急性淋巴细胞(ALL)方案治疗, 其中5例完全缓解, 1例未缓解, 1例单采用AML方案治疗未缓解, 后自动放弃治疗。

讨论

急性白血病超过一系的抗原表达有急性淋巴细胞伴髓系表达、急性髓系伴淋巴细胞系表达、双表型白血病。cCD79a是B淋巴细胞的特异性抗原, 近来已有在急性双表型白血病中的表达报道。2005以来我们共发现了7例t (8; 21) AML-M2患儿伴cCD79a的异常表达, 同时细胞膜表面抗原CD19也表达阳性。在同期诊治了83例t(8; 21)(q22; q22)患儿中占8.4%(7/83), 占同期AML患儿的3.7%(7/190), 与Kozlova等[1]报道的2.2%相近。提示在AML-M2中常易伴有B淋系的浆或膜表面标志表达。该组患儿发病年龄均较小, 均< 7岁; 并且可有髓外浸润; 外周血白细胞计数均较高, 仅1例< 10× 109/L; 在形态学上与其他的AML-M2无明显的改变, 均有原始细胞核凹陷, 胞浆嗜碱性, 有近核淡染区, 伴有成熟分化、巨幼变和明显核浆发育的不平衡。骨髓细胞形态学显示为粒细胞白血病, 且原始细胞均显著增多, 其中免疫分型均显示为髓系伴B淋系表达, CD34、cMPO、CD13、CD19表达强阳性, cCD79a表达阳性, CD33弱阳性表达。染色体改变除了t(8; 21)(q22; q22)外, 可见缺失、复杂易位及二倍体异常。AML1-ETO融合基因检测均为阳性。对兼顾髓系和淋巴系的联合治疗方案效果较好, 有1例单用髓系方案的患儿经治疗后未缓解, 后自动放弃治疗。

Miyamoto等[2, 3]对含有AML1/ETO融合基因患者的CD34+细胞进行体外培养, 发现形成CFU-GM、CFU-MK、BFU-E及CFU-Mix集落, 把这些集落收集起来进行逆转录PCR检测, 在其中都能够检测到AML1/ETO融合基因, 这说明AML1/ETO融合基因阳性的CD34+细胞可以分化为髓系及淋系细胞; 在其最原始的造血干细胞、次级原始造血干细胞(能分化为粒、淋祖细胞)及B细胞中均可表达AML1/ETO融合基因; 用单个核细胞或骨髓造血干细胞作体外细胞培养, 发现可以形成CFU-GM、CFU-MK、BFU-E及CFU-Mix集落, 初诊白血病患者样本作体外细胞培养时还可生成淋巴细胞早期集落形成单位, 在这些集落中均能检测到AML1/ETO融合基因。这表明AML1/ETO融合基因在造血干细胞阶段已经有表达。这可以解释用兼顾AML和ALL的化疗方案的疗效比单用AML方案好。

本组7例t (8; 21) AML-M2患儿的免疫分型中均表现为CD34与CD19高表达阳性, CD33低表达阳性, 与何广胜等[4]报道的结果一致, 同时我们发现了在该组患儿的细胞浆中存在cCD79a的阳性表达, 表明伴t (8; 21)AML-M2患儿易累及B淋巴细胞相关基因的异常表达。已有的研究表明, CD19阳性表达与t(8; 21)均是M2预后好的指标[5], 但我们发现CD19阳性表达有t(8; 21)且伴有cCD79a的阳性表达时, 预后并不好, 因为这实际上是一种双表型白血病, 所以单以AML方案治疗疗效并不是很理想。因此, t (8; 21) AML-M2伴cCD79a异常表达的患儿只有使用兼顾髓系和淋系的方案治疗, 才可以取得较好的疗效。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Kozlov I, Beason K, Yu C, et al. CD79a expression in acute myeloid leukemia t(8;21) and the importance of cytogenetics in the diagnosis of leukemias with immunophenotypic ambiguity[J]. Cancer Genet Cytogenet, 2005, 163(1): 62-67. [本文引用:1]
[2] Miyamoto T, Weissman IL, Akashi K. AML1/ETO-expressing nonleukemic stem cells in acute myelogenous leukemia with 8; 21 chromosomal translocation[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97(13): 7521-7526. [本文引用:1]
[3] Miyamoto T, Nagafuji K, Akashi K, et al. Persistence of multipotent progenitors expressing AML1/ETO transcripts in long-term remission patients with t(8;21) acute myelogenous leukemia[J]. Blood, 1996, 87(11): 4789-4796. [本文引用:1]
[4] 何广胜, 周玲, 吴德沛, 等. 染色体t(8;21)急性髓系白血病cCD79a/cCD22的异常表达[J]. 中华血液学杂志, 2006, 27(3): 187-189. [本文引用:1]
[5] 潘湘涛, 夏学鸣, 李建勇, 等. M2/t (8;21) 的免疫学和遗传学特征及其与预后的关系[J]. 临床内科杂志, 2002, 19(2): 133-135. [本文引用:1]