引用本文
黄妩姣, 黄宪章, 庄俊华, 李强, 黄惠, 张强. CLSI EP12-A2文件在HBeAb定性检测性能评价中的应用. 2012, 27(11): 900-903
HUANG Wujiao, HUANG Xianzhang, ZHUANG Junhua, LI Qiang, HUANG Hui, ZHANG Qiang. Application of CLSI EP12-A2 document in the performance evaluation of qualitative test of HBeAb. Labratory Medicine, 2012, 27(11): 900-903  
Permissions
Copyright©2012, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
CLSI EP12-A2文件在HBeAb定性检测性能评价中的应用
黄妩姣1, 黄宪章1, 庄俊华1, 李强1, 黄惠1, 张强2
1. 广东省中医院检验科,广东 广州 510120
2. 山西长治医学院检验系,山西 长治 046000

作者简介:黄妩姣,女,1978年生,硕士,副主任技师,主要从事临床免疫学检验与研究工作。

通讯作者:黄宪章,联系电话:020-81887233-32908

基金:广东省医学科研基金立项课题(A2011227)
摘要
目的

对A和B 2种定性检测人血清抗乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒进行评估,为实验室选择合适的HBeAb试剂提供实验依据。

方法

参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP12-A2文件推荐方法,对A和B 2种HBeAb检测试剂做偏倚和不精密度分析,比较2种HBeAb检测试剂的C50、C5~C95区间以及不精密度曲线。用2种试剂同时检测910份标本的HBeAb,计算检测结果一致程度的95%可信区间( CI),计算( Kappa)值,评价一致性。

结果

A试剂检测血清HBeAb的C50小于B试剂的C50,A试剂的C5~C95区间比B试剂的窄,A试剂的不精密度曲线比B试剂的陡峭;2种试剂检测标本HBeAb一致程度的95% CI为93.2%~96.1%, Kappa值约0.87。

结论

EP12-A2作为定性检测的性能评价方法可行。

关键词: 性能评价; 定性试验; EP12-A2; 乙型肝炎病毒e抗体
中图分类号:R195.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)11-0900-04
Application of CLSI EP12-A2 document in the performance evaluation of qualitative test of HBeAb
HUANG Wujiao1, HUANG Xianzhang1, ZHUANG Junhua1, LI Qiang1, HUANG Hui1, ZHANG Qiang2
1. Department of Clinical Laboratory,Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Guangzhou 510120,China
2. Department of Clinical Laboratory,Changzhi Medical College,Shanxi Changzhi 046000,China
Abstract
Objective

To evaluate A and B ELISA kits for detecting qualitatively anti-hepatitis B e antigen antibody(HBeAb),and to provide useful reference for choosing suitable HBeAb kits.

Methods

According to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) EP12-A2 document,the bias and imprecision of A and B HBeAb kits were analyzed,and their C50,C5-C95 intervals and imprecision curves were compared.The HBeAb of 910 specimens were simultaneously determined by both A and B kits.The 95% confidence interval ( CI)for concordance was calculated.The Kappa value was calculated to evaluate their concordance.

Results

C50 for A kit was less than that for B kit.C5-C95 interval of A kit was narrower than that of B kit.The imprecision curve of A kit was steeper than that of B kit.The 95% CI for concordance was calculated as 93.2%-96.1%,and the Kappa value was 0.87.

Conclusions

EP12-A2 is a useful protocol for the evaluation of qualitative test performance.

Keyword: Performance evaluation; Qualitative test; EP12-A2; Anti-hepatitis B e antigen antibody

定性试验在临床应用广泛, 可用于疾病的筛查、诊断或监测。由于人们在定性试验的试验设计、数据分析以及结果解释方面强调的重点不同, 定性试验的性能评价规则也多样, 目前还未形成一个统一的方法。美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP12-A2文件《定性检测性能评价的用户协议》[1]为定性试验性能评价的实验设计以及数据分析提供了一个规范的、概括性的研究方法。文件要求定性检测的性能评价也应该像定量试验[2, 3]一样, 将偏倚(系统误差)和不精密度(随机误差)考虑进来, 通过性能评价来熟悉和了解影响该方法近临界值精密度的潜在变异来源, 并在必要时建立合适的实验条件。

目前我国对乙型肝炎病素e抗体(HBeAb)定性检测试剂盒的评价标准主要有:(1)阴性符合率:15份参比品符合率(-/-)应为15/15; (2)阳性符合率:10份参比品符合率(+/+)应≥ 9/10; (3)最低检出限:应符合3份系列稀释参比品的检出要求; (4)精密度(CV):平行测定10孔, (CV)≤ 20%; (5)质控血清:结果为阳性。这些性能评价指标没有对标本的具体浓度提出要求。事实上, 用浓度接近临界值的标本作为评价材料, 比用强阳性或低阴性标本更能发现检测误差。CLSI EP12-A2文件推荐方法弥补了上述不足。我们参照EP12-A2文件对A、B 2种定性检测HBeAb的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂进行性能评价。

材料和方法
一、标本来源
1. 收集2010年8月5日广东省中医院当日HBeAb强阳性的混合血清1份(用罗氏Cobas 411电化学发光分析仪检测, 混合血清HBeAb浓度为0.005 COI)。
2. 收集2010年8月广东省中医院需要做HBeAb检测的临床标本, 收集10 d, 共910份标本。
二、主要仪器与试剂

罗氏Cobas 411电化学发光分析仪及原装配套试剂、质控物、校准品。罗氏HBeAb检测试剂批号:155934-02; 质控品批号:15494599; 校准品批号:15593402。TECAN Genesis RSP150/8+BEPIII全自动酶免分析仪。HBeAb定性检测试剂盒:A试剂盒批号为20100301、B试剂盒批号为201006011。HBeAb室内质控品购自卫生部临床检验中心, 浓度为4 NCU/mL, 批号为200907002。0.9%生理盐水等。

三、方法
1. C50、C5~C95区间定义[1]。在最佳条件下对浓度恰好在临界值的标本进行一系列重复检测, 结果有50%为阴性, 50%为阳性, 该分析物浓度称为C50。“ C” 表示浓度, 下标(50、5或95)表示阳性结果的百分数。标本中分析物浓度超过C50, 重复检测结果是阳性的可能性增大。反之, 阴性的可能性增大。 由于最佳条件不易获得, 对实验室来说, 准确估计C50比较困难, 根据EP12-A2文件[1], 近临界值浓度的标本重复检测40次, 如果阳性结果达到(14~26)次(或阳性结果百分数达35%~65%), 说明对该方法的C50估计正确。C5~C95区间定义为某一接近临界值的分析物浓度范围, 浓度超出该范围, 重复检测标本得到的结果持续为阴性(浓度< C5)或结果持续为阳性(浓度> C95)。由于不精密度, 对该区间内浓度的标本进行重复检测, 得到结果将不一致, 该浓度范围称为C5~C95区间。
2. HBeAb强阳性混合血清用0.9%生理盐水作一系列稀释, 使之接近C50。
3. 用罗氏Cobas 411电化学发光分析仪检测每个稀释后标本浓度。
4. 稀释后标本用A或B试剂重复检测40次或以上, 记录每次阳性结果百分数。A或B试剂ELISA定性检测HBeAb均在TECAN全自动酶免分析系统上进行, 实验操作和结果判断严格按试剂盒说明书进行。以标本稀释度为横坐标, 以HBeAb阳性结果百分数为纵坐标, 拟合A和B试剂检测HBeAb的不精密度曲线。
5. 比较A和B试剂检测HBeAb的C50、C5~C95区间以及不精密度曲线。
6. 用A和B试剂同时检测910份临床标本的HBeAb, 比较2种试剂检测结果的一致程度。
四、统计学方法

对结果做2× 2列联表。根据EP12-A2[1]推荐方法, 计算2种方法一致程度的95%可信区间(CI)。公式为100%(Q1-Q2)/Q3, 100%(Q1+Q2)/Q3。其中:Q1=2(a+d)+1.96× 2; Q2=1.96 3.84+4(a+d)(b+c)/n; Q3=2(n+1.962)。计算Kappa值评价一致性[4]。Kappa值≥ 0.75两者一致性较好; 0.75> Kappa值≥ 0.4两者一致性一般; Kappa值< 0.4两者一致性较差。

结果
一、A、B 2种试剂检测HBeAb的C50结果估计

HBeAb强阳性标本1 ∶ 380稀释时, 用A试剂重复检测, 阳性结果为16/40(40%); HBeAb强阳性标本1 ∶ 240稀释时, 用B试剂重复检测, 阳性结果为23/40(57.5%); 2个阳性结果百分数均在35%~65%之间。见表1、2。

表1 A试剂定性检测HBeAb的C50估计
表2 B试剂定性检测HBeAb的C50估计
二、A、B 2种试剂定性检测HBeAb的不精密度曲线及C5~C95区间比较

A试剂的不精密度曲线陡峭, B试剂的不精密度曲线相对平滑, A试剂检测HBeAb的C5~C95区间比B试剂的C5~C95区间窄。见图1。

图1 A和B试剂定性检测HbeAb的不精密度曲线图

三、A、B 2种试剂检测标本的一致程度

按照EP12-A2文件[1]的公式, 计算2种试剂检测HBeAb一致程度的95%CI为93.2%~96.1%, Kappa值=0.87。表明2种试剂对HBeAb检测结果的一致性较好。见表3。

表3 A、B 2种试剂对相同标本HBeAb的检测结果
讨论

乙肝标志物中HBeAg转阴, 并产生HBeAb是判断病情趋向和药物疗效的一个重要指标[5], 正确检出HBeAb对临床医生判断病情起着重要作用。本实验室之前一直使用B试剂(ELISA)定性检测血清HBeAb。在日常工作中发现弱阳性室内质控得不到预期(+)结果; 曾经在某次卫生部室间质评中, HBeAb预期结果为(+), 而B试剂检测结果为(-)。为给临床提供准确的诊断依据, 本实验室打算更换新的HBeAb试剂。根据ISO15189:2007《医学实验室— 质量和能力的专用要求》, 实验室更换或使用新的检测试剂或系统, 需对之进行性能验证。2008年出版的EP12-A的修订版EP12-A2, 新增了关于CI的内容, 让用户能在观测数变少或更多的时候, 直接鉴别CI的差异。另外, 还包含和定义了一些新的术语如“ C5~C95区间” 等。本研究直接利用EP12-A2文件对HBeAb新旧试剂进行性能评价和比较。

从表1结果看出, A试剂的C50(1.08 COI)小于B试剂的C50(0.757 COI), 说明A试剂的敏感性高于B试剂, A试剂的C50更接近临界点, 偏倚更小。由此也证实了之前本实验室使用B试剂检测HBeAb, 室内质控和室间质评均得不到预期(+)结果的主要原因是B试剂敏感性较低所致。

描述不精密度的方式有多种, EP12-A2文件用C5和C95描述实验室某定性方法的不精密度。不同方法检测相同标本, 其C5~C95区间, 或结果能达到一致要求的浓度范围可能不同, 能鉴别这种差异的能力对定性实验评价是一有用工具。C5~C95区间的宽度暗示了定性试验的精密度, 因为其反映了重复性检测结果不一致的浓度范围。C5~C95区间越窄, 代表方法越好。图1通过对A、B试剂定性检测HBeAb的不精密度曲线及C5~C95区间比较, 都反映了一个事实:A试剂在接近C50处的精密度优于B试剂, 用 A试剂对浓度接近临界值的HBeAb进行重复检测, 得到结果的一致程度比B试剂好。

在采用一种新的检测方法检测患者标本之前, 实验室操作人员必须评价该检测方法在临床实验室中的检测能力; 或当实验室同时使用2套以上检测系统检测同一项目时, 必须保证两者结果的一致性。这在《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的指南》里都作了明确的规定[6]。真正定性检测的性能指标是灵敏度和特异性。当诊断明确时, 计算灵敏度和特异性很容易, 但临床检验过程中很多检测的诊断都不明确, 在不清楚疾病患病率的情况下, 只能计算2种方法在多大程度上一致。本研究用A、B试剂进行了10 d的试验, 共检测了910份临床标本的HBeAb, 最大限度地获得了具有代表性的标本以及在日常实验室使用条件下来评价候选试剂。虽然比对标本是随机选择的, 而实际上每天的标本中, 真实阳性率是变化的。比对标本中阳性标本的比例极大地影响着该区间的计算结果以及Kappa值, 特别是随着接近临界值浓度的标本增多, 出现不一致的可能性愈大。因此, 每次选择的标本浓度不同, 用该方法计算得到的区间也将不一样。但本研究结果提示2种试剂对临床标本的检测结果一致性良好。在A试剂更精密、更高敏感的前提下, 可替换B试剂供临床使用。

本研究利用CLSI EP12-A2文件对HBeAb定性检测做性能评价, 不仅为本实验室选择A试剂进行HBeAb检测提供了实验依据, 也为其他定性检测的性能验证提供了规范、概括性的实验设计和研究。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Clinical and Laboratory Stand ards Institute. User protocol for evaluation of qualitative test performance; approved guideline[S]. 2nd edition. EP12-A2, CLSI, 2008. [本文引用:5]
[2] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods; approved guideline[S]. 2nd edition. EP5-A2, NCCLS, 2004. [本文引用:1]
[3] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory measurement procedures; approved guideline[S]. 3rd edition. EP10-A3, NCCLS, 2006. [本文引用:1]
[4] 夏邦世, 吴金华. Kappa一致性检验在检验医学研究中的应用[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(1): 83-84. [本文引用:1]
[5] 徐飚, 姜庆五, DM Rosenberg, 等. 慢性乙型肝炎患者血清HBeAb转归与疾病发展的关系[J]. 临床肝胆病杂志, 2003, 19(1): 16-18. [本文引用:1]
[6] 陈桂山, 张秀明, 熊继红, 等. 未知诊断定性试验分析性能评价方法探讨[J]. 检验医学, 2010, 25(12): 978-981. [本文引用:1]