引用本文
陈戴红, 毛会军, 邱建萍, 吴文娟. 电化学发光法检测单纯疱疹病毒2 IgG抗体应用评估. 2012, 27(11): 887-889
CHEN Daihong, MAO Huijun, QIU Jianping, WU Wenjuan. Application evaluation of electro-chemiluminescence assay for the detection of anti-herpes simplex virus type 2 IgG antibody. Labratory Medicine, 2012, 27(11): 887-889  
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电化学发光法检测单纯疱疹病毒2 IgG抗体应用评估
陈戴红, 毛会军, 邱建萍, 吴文娟
上海市公共卫生临床中心医学检验科,上海 201508

作者简介:陈戴红,女,1972年生,学士,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。

通讯作者:吴文娟,联系电话:021-37990333-7350。

摘要
目的

对电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单纯疱疹病毒2(HSV-2)IgG抗体结果进行比较分析,评价ECLIA的性能及临床应用价值。

方法

应用罗氏诊断公司ECLIA与爱尔兰Trinity公司ELISA试剂分别检测400份血清标本中的HSV-2特异性IgG抗体,检测结果不一致的标本用欧蒙生物技术有限公司的抗HSV-2 IgG抗体检测试剂进行复核。

结果

ELISA和ECLIA检测阳性率分别为39.0%、37.8%;以ELISA为参照,ECLIA假阴性率为1.3%,假阳性率为0.8%,相对敏感性为96.8%,相对特异性为98.8%,二者的符合率为98.0%。使用欧蒙生物技术有限公司试剂对13份检测结果不一致(包括2个不确定结果)的标本进行了复核,其中6份标本结果支持ECLIA,5份标本结果支持ELISA。

结论

ECLIA和ELISA检测HSV-2 IgG抗体结果符合情况良好,罗氏“HSV-2 IgG抗体检测试剂(ECLIA)”是一种快速、准确、敏感性和特异性高的试剂,可以应用于临床。

关键词: 单纯疱疹病毒2; IgG抗体; 电化学发光法; 酶联免疫吸附试验
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)11-0887-03
Application evaluation of electro-chemiluminescence assay for the detection of anti-herpes simplex virus type 2 IgG antibody
CHEN Daihong, MAO Huijun, QIU Jianping, WU Wenjuan
Department of Clinical Laboratory, Shanghai Public Health Clinical Center, Shanghai 201508, China
Abstract
Objective

To compare the results of anti-herpes simplex virus type 2(HSV-2)IgG antibody detected by electro-chemiluminescence assay (ECLIA)and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and evaluate the performance and application significance of ECLIA.

Methods

Anti-HSV-2 specific IgG antibody of 400 serum samples were detected by ECLIA (Roche)and ELISA(Trinity, Ireland). The samples with inconsistent results were detected by anti-HSV-2 IgG antibody detection kit of Euroimmun Biotechnology Co., Ltd..

Results

The positive rates were 39.0% by ELISA and 37.8% by ECLIA respectively. Compared with ELISA, the false negative rate of ECLIA was 1.3%, and the false positive rate was 0.8%. The relative sensitivity and relative specificity were 96.8% and 98.8%. The coincidence rate of the 2 methods was 98.0%. The 13 samples with inconsistent results (including 2 uncertain results)were detected by anti-HSV-2 IgG antibody detection kit of Euroimmun Biotechnology Co., Ltd.. The results indicated that 6 samples were consistent with ECLIA, and 5 samples were consistent with ELISA.

Conclusions

ECLIA and ELISA results had good coincidence, and Roche ECLIA can be used as a fast, accurate, sensitive, high-specific reagent for clinical application in the determination of anti-HSV-2 IgG antibody.

Keyword: Herpes simplex virus type 2; IgG antibody; Electro-chemiluminescence assay; Enzyme-linked immunosorbent assay

单纯疱疹病毒2(HSV-2)是疱疹病毒家族的2个成员之一。普通人群中HSV-2的患病率为17%~25%。HSV-2通过血清阴性个体和分泌病毒的个体之间的密切接触进行传播。约85%存在临床症状的初次生殖器HSV感染是由HSV-2所致, HSV-2感染是人类免疫缺陷病毒(HIV)传播的风险因素之一, 与HIV感染的风险增加存在相关性[1]。目前主要的检测方法是酶联免疫吸附试验(ELISA), 其中市场占有率较高、性能稳定的是爱尔兰Trinity公司生产的HSV-2特异性IgG抗体检测试剂盒, 而电化学发光法(ECLIA)检测具有自动化及易操作优点, 目前国内外将ECLIA广泛应用于感染性疾病标志物检测, 但HSV-2的试剂还处于开发验证阶段, 尚无商品化检验试剂应用于临床。为此, 我们选取了400份血清标本用ELISA和ECLIA检测, 对2种试剂的检测效果进行比较, 评价罗氏“ HSV-2 IgG抗体检测试剂(ECLIA)” 的应用价值。

材料和方法
一、材料
1. 标本来源

收集2010至2011年上海市公共卫生临床中心门诊或病房送检的血液标本, 用普通分离胶试管采集血样, 离心取血清, -20 ℃冰箱放置备检。研究标本共计400份, 其中HIV阳性标本140份, 正常健康体检标本200份, 潜在干扰标本60份(潜在干扰标本包括类风湿因子阳性标本30份、脂血标本10份、溶血标本10份和胆红素标本10份)。

2. 试剂与仪器

ECLIA检测试剂和质控品为德国罗氏诊断公司提供的“ HSV-2 IgG抗体检测试剂盒” ; ELISA检测试剂为爱尔兰Trinity公司提供的“ HSV-2特异性IgG抗体检测试剂盒” ; 复核试剂为欧蒙生物技术有限公司提供的“ 抗HSV-2 IgG抗体检测试剂盒(ELISA)” 。检测仪器为罗氏全自动电化学发光仪E模块, MK3酶标仪(芬兰)、加样枪、电热恒温培养箱, Wellwash Plus洗板机。

二、方法
1. 试验方法及判定原则

ELISA检测操作步骤严格按试剂盒说明书进行。ECLIA按照罗氏全自动免疫分析仪E-601仪器标准操作规程及罗氏诊断公司提供的“ HSV-2 IgG抗体检测试剂盒” 说明书进行操作。判断原则:(1)ECLIA被检标本检测结果< 0.51临界值指数(COI)视为阴性, ≥ 1.0 COI视为阳性, 0.51~< 1.0 COI则不能确定; (2)ELISA被检标本检测结果的免疫状态指数(ISR)≤ 0.90视为阴性, 检测结果的ISR≥ 1.10视为阳性, 检测结果的ISR在0.91~1.09为不确定(参照试剂说明书); 如果ELISA和ECLIA的检测结果一致, 可进行标本抗HSV-2 IgG抗体阴阳性判定; 如果ELISA和ECLIA的检测结果不一致, 对初次具反应性或“ 灰区” 可疑的标本用同一批号的相同试剂再次双孔复试, 复检后ELISA和ECLIA结果一致的, 可进行标本抗HSV-2 IgG抗体阴阳性判定。如果ELISA和ECLIA经复检后检测结果仍不一致, 再用第三方试剂进一步进行复核试验。经复核试验检测为不确定的结果剔除, 不记入数据统计。

2. 标本抗HSV-2 IgG抗体阴阳性判定

真阳性:标本经ECLIA及ELISA检测结果为阳性, 或ECLIA的检测结果与第三方试剂的检测结果均为阳性; 真阴性:标本经ECLIA及ELISA检测结果为阴性, 或ECLIA的检测结果与第三方试剂的检测结果均为阴性; 假阳性:标本经ECLIA重复检测结果为阳性, 其ELISA检测结果与第三方试剂的检测结果均为阴性; 假阴性:标本经ECLIA重复检测结果为阴性, 其ELISA检测结果与第三方试剂的检测结果均为阳性。

3. 评价指标

精密度试验:选取中、低浓度的标本各1份, 经ECLIA分别检测10次, 计算变异系数(CV); 敏感性试验:以爱尔兰Trinity公司ELISA试剂为相对标准, 计算相对敏感性(阳性符合率); 特异性试验:以爱尔兰Trinity公司ELISA试剂为相对标准, 计算相对特异性(阴性符合率); 总符合率:以爱尔兰Trinity公司ELISA试剂为相对标准, 计算相对总符合率。

结果
一、敏感性、特异性结果分析

400份标本检测结果中, 140份确诊HIV感染者抗HSV-2 IgG抗体检测阳性137例(97.8%); 200份健康体检者抗HSV-2 IgG抗体检测阳性8例(4.0%); 60份潜在干扰标本抗HSV-2 IgG抗体检测阳性6例(10.0%); ELISA检测为阳性结果156份, 阳性率为39.0%; ECLIA检测阳性155份, 阳性率为38.8%。以ELISA为参照, ECLIA假阴性标本5份, 假阴性率为1.3%; 假阳性标本3份, 假阳性率为0.8%, 相对敏感性为96.8%, 相对特异性为98.8%, 二者的符合率为98.0%。见表1。

表1 检测标本定性统计分析结果
二、精密度试验结果分析

对罗氏诊断公司提供的“ HSV-2 IgG抗体检测试剂” 进行精密度考核, 结果见表2, 检测单位为COI。

表2 ECLIA 试剂测量精密度
三、第三方试剂复核结果分析

2种方法试剂检测结果不一致的13份标本(双孔复测后), 用欧蒙生物技术有限公司试剂“ HSV-2 IgG抗体检测试剂盒(ELISA)” 复核, 13份标本中, 复核结果5份支持ELISA, 6份支持ECLIA。13份标本复测结果显示ECLIA的重复性很好, 定性结果一致性符合率为100.0%, ELISA的重复性偏低, 13份标本复测就有3份结果不一致, 定性结果一致性符合率为76.9%。见表3。

表3 不一致标本复核检测结果分析
四、潜在干扰标本结果分析

60份潜在干扰的标本中, 2种方法试剂检测结果, 除类风湿因子阳性及胆红素标本中各有1份ECLIA结果阴性, ELISA结果阳性外, 其余标本定性结果一致。其中检测结果为抗HSV-2 IgG抗体阳性的6份标本中, 类风湿因子阳性标本3份, 脂血、溶血、胆红素标本各1份, 其他均阴性。经第三方试剂复核, 上述2份潜在干扰标本的ECLIA初测和复测结果与第三方试剂复核结果均为阴性, ELISA复测结果仍为阳性。

讨论

罗氏诊断公司“ HSV-2 IgG抗体检测试剂” 是一种检测HSV-2 IgG抗体的ECLIA试剂, 相对爱尔兰Trinity公司生产的ELISA试剂, 其检测敏感性达96.8%, 具有较高的检出水平。本研究140份确诊HIV感染者中抗HSV-2 IgG抗体阳性137份(97.8%); 200份体检者抗HSV-2 IgG抗体阳性仅8份(4.0%), 说明HSV感染是HIV-2传播的风险因素之一, 与HIV感染的风险增加存在相关性。HSV感染通常不会被发现, 亚临床病毒脱落和未被发现的病毒感染似乎是病毒传播的主要因素, 仅根据临床表现做出诊断的敏感性非常低[2]。本试验中, ECLIA相对ELISA的假阳性率为0.8%, 特异性较高, 达到98.8%, 如果用于妊娠妇女、无症状患者和存在HIV感染风险的患者, 有利于HSV感染的早期诊断。

一般的ELISA可存在类风湿因子干扰、高免疫球蛋白G血症、超氧化物歧化酶的干扰或包被抗原不纯等缺陷, 本试验的类风湿因子阳性和高胆红素标本中各有1例标本ECLIA和复核试剂均为阴性, Trinity公司ELISA检测阳性, 可能是干扰造成的假阳性; 另外ELISA极易受加样错误、加试剂的不均一性、孔与孔之间的交叉污染、检验人员的熟练程度、洗板不干净、板底被污染、血清不稀释产生的非特异性反应等的影响。而ECLIA是将发光系统与免疫反应相结合检测抗原或抗体的方法, 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代标记免疫技术, 其具有操作简便、试剂贮存有效期长、检测速度快、敏感性高、线性范围宽、应用范围广等特点, 不足之处是价格较高[3]。 本研究中ECLIA的重复性很好, 定量结果精密度CV< 1.43%, 定性结果一致性符合率为100.0%; ELISA的重复性偏低, 两者之间在抗体包被、试验流程、显色与比色、结果判断、质控等多方面存在一定差异。由于方法学的不同, 此次检测中极少部分标本出现了ELISA和ECLIA及复核检测结果不一致。作为辅助诊断检测, 该项目临床应用时还需结合患者具体症状和相关病史等。

综上所述, 对于妊娠妇女、存在HIV感染风险的患者和疑似HSV-2感染者, 罗氏诊断公司的ECLIA“ HSV-2 IgG抗体检测试剂” 不失为一种可用于筛查和诊断的新试剂。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Wald A, Link K. Risk of human immunodeficiency virus infection in herpes simplex virus type 2-seropositive persons : a meta-analysis[J ]. J Infect Dis, 2002, 185(1): 45-52. [本文引用:1]
[2] 赖伟红, 邵长庚. 生殖器疱疹的研究进展[J]. 中国麻风皮肤病杂志, 2002, 18(4): 372-374. [本文引用:1]
[3] 张忠英, 林永志, 叶辉铭, 等. 电化学发光免疫分析技术检测尿CKl9片段的临床应用及其评价[J]. 中华检验医学杂志, 2005, 28(1): 50-53. [本文引用:1]