引用本文
黄斌伦, 蒋旭峰, 程屹, 徐燕, 陆晓东, 王敏, 何云芹, 徐秋仙. 蛋白Z和蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物在正常妊娠妇女中的变化和意义. 2012, 27(10): 825-828
HUANG Binlun, JIANG Xufeng, CHEN Yi, XU Yan, LU Xiaodong, WANG Min, HE Yunqin, XU Qiuxian. The change and significance of protein Z and protein Z-dependent protease inhibitor in healthy pregnant women. Labratory Medicine, 2012, 27(10): 825-828  
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蛋白Z和蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物在正常妊娠妇女中的变化和意义
黄斌伦1, 蒋旭峰2, 程屹3, 徐燕3, 陆晓东3, 王敏1, 何云芹3, 徐秋仙3
1.金华职业技术学院,浙江 金华 321017
2.金华市妇幼保健院,浙江 金华 321000
3. 金华市中心医院,浙江 金华 321000

作者简介:黄斌伦,男,1963年生,学士,教授,主要从事血液学检验教学及血栓性疾病研究。

基金:金华市科技局重点资助项目(2009-3-307)
摘要
目的

探讨不同孕期正常妊娠妇女血浆蛋白Z(PZ)、蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物(ZPI)浓度及其临床意义。

方法

选择正常未孕妇女、妊娠早期(14~27周)、妊娠晚期(28~40周)各50例,用酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法测定其血浆PZ和ZPI浓度,用凝固法检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(Fg)浓度。

结果

PZ和ZPI从正常未孕妇女至妊娠早期、妊娠晚期,其血浆浓度逐渐下降,妊娠后期比正常未孕妇女PZ下降16.1%,ZPI下降22.8%。妊娠早期、妊娠后期与正常未孕妇女比较,PT、TT明显缩短( P<0.01),Fg明显增高( P<0.01);妊娠晚期与妊娠早期比较PT和TT明显缩短( P<0.05),Fg明显增高( P<0.05);妊娠后期组APTT与正常未孕妇女比较明显缩短( P<0.05)。PZ、ZPI浓度降低与PT异常有一定相关性。

结论

随着妊娠周数增加,孕妇凝血因子活性和凝血功能增强,可能与抗凝物质PZ、ZPI血浆浓度逐渐下降有关,这种妊娠期生理变化为产后快速有效止血提供了物质基础,但也可能使妊娠期血栓形成的风险增大。

关键词: 蛋白Z; 蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物; 凝血因子; 妊娠
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)10-0825-04
The change and significance of protein Z and protein Z-dependent protease inhibitor in healthy pregnant women
HUANG Binlun1, JIANG Xufeng2, CHEN Yi3, XU Yan3, LU Xiaodong3, WANG Min1, HE Yunqin3, XU Qiuxian3
1. Jinhua College of Profession and Technology, Zhejiang Jinhua 321017,China
2. Jinhua Women and Children Health Care Hospital, Zhejiang Jinhua 321000,China
3. Jinhua Municipal Central Hospital, Zhejiang Jinhua 321000,China
Abstract
Objective

To investigate the levels and clinical significance of plasma protein Z (PZ) and protein Z-dependent protease inhibitor (ZPI) during different gestational periods in healthy pregnant women.

Methods

Fifty cases of healthy non-pregnant women, 50 cases of early stage pregnant women (14~27 weeks) and 50 cases of late stage pregnant women (28~40 weeks) were enrolled. Plasma PZ and ZPI were determined by competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In addition, prothrombin time (PT), activation partial thromboplastin time (APTT), thrombin time (TT) and fibrinogen (Fg) content were measured by coagulation method.

Results

The levels of plasma PZ and ZPI decreased gradually from the non-pregnant women to the early stage pregnant women and the late stage pregnant women. Compared to the non-pregnant women, the level of plasma PZ decreased by 16.1%, and the level of ZPI decreased by 22.8% in the late stage pregnant women. Compared to the non-pregnant women, the PT and TT shortened significantly ( P<0.01), and the Fg increased significantly in the early stage pregnant women and the late stage pregnant women( P<0.01). Compared to the early stage pregnant women, the PT and TT shortened significantly ( P<0.05), and the Fg increased significantly in the late stage pregnant women( P<0.05). Compared to the non-pregnant women, the APTT shortened significantly in the late stage pregnant women ( P<0.05). The decreased levels of PZ and ZPI were related to the shortening of PT.

Conclusions

The activity of blood coagulation factor and coagulation function increase in pregnant women along with the increase of gestational weeks. It may relate to a gradual decrease of the concentrations of plasma anticoagulants such as PZ and ZPI. This kind of physiological change provides a material base for the pregnant women to prepare them to stop bleeding effectively after childbirth, however, it also increases the risk of thrombosis during the pregnancy.

Keyword: Protein Z; Protein Z-dependent protease inhibitor; Blood coagulation factor; Pregnancy

蛋白Z(protein Z, PZ)和蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物(protein Z-dependent protease inhibitor, ZPI)是近年来发现的2种抗凝调节蛋白[1, 2], 均属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。起初人们发现PZ能够抑制凝血因子Ⅹ a的活性, 后来研究证实真正抑制Ⅹ a 活性是ZPI, PZ只是一个辅助因子, 能加快ZPI的灭活速度[3]。孕妇PZ浓度下降, 可导致不良的妊娠结局的发生[4, 5], 但有关ZPI在妊娠时期的变化未见报道。为此, 我们探讨了ZPI和PZ在正常妊娠孕妇血浆中的变化, 以及与凝血功能的关系。

材料和方法
一、对象

选取2010年11月至2011年12月, 正常孕妇100例, 其中妊娠早期(14~27周)50例, 年龄22~39岁, 妊娠后期50例(28~40周), 年龄23~38岁。同时随机选取正常未孕妇女50例作为未孕对照组, 年龄20~36岁。各组均无肝脏疾病、高血压、糖尿病、血栓、肿瘤等病史, 也未使用影响凝血功能的药物。

二、方法

1.标本采集和处理

所有对象均空腹抽取静脉血。参见文献[6], 采用0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝制备血浆, 另外一部分血浆保存于-80 ℃超低温冰箱中, 用于测定PZ和ZPI。

2.试剂

PZ和ZPI检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法, 试剂由上海蓝基生物科技有限公司提供; 凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(Fg)采用凝固法检测, 试剂由上海太阳生物技术有限公司提供。

3. 检测

(1)PZ测定:待测血浆置于37 ℃水浴10 min溶解, 混匀。加待测血浆、标准品(浓度分别为0、100、250、500、1 000、2 500 ng/L)100 μ L于已包被抗PZ抗体的微孔板中, 各孔中加入50 μ L酶标记物, 混匀, 用封口胶密封, 37 ℃孵育1 h后, 用酶标洗板机洗板5次, 再每孔加底物显色剂A、B液各50 μ L, 温育15 min后, 加终止液50 μ L, 室温静置15 min后, 于波长450 nm测定吸光度(A)值。以标准品浓度为自变量X, A值为应变量Y, 用Logistic曲线拟合修匀标准曲线, 根据标准曲线可求出标本中PZ浓度; (2)ZPI测定:其方法与PZ相似, 只是标准品浓度分别为0、250、500、1 000、2 500、5 000 ng/L; (3)PT、APTT、TT和Fg测定:具体参见文献[6]。

三、统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行分析, 结果以 x̅± s表示, 组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)后进行t检验。同时, PZ、ZPI与凝血指标PT、APTT、TT和Fg在妊娠早期组和妊娠后期组中作相关性分析, P< 0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、 凝血指标分析

未孕对照组、妊娠早期组和妊娠后期组凝血指标比较见表1。PT、APTT、TT和Fg参考范围分别为10~14 s、22~38 s、14~21 s和2 000~4 000 mg/L。妊娠后期组、妊娠早期组PT、TT比未孕对照组明显缩短, 差异有统计学意义(P< 0.01); 妊娠后期组与妊娠早期组比较, 差异也有统计学意义(P< 0.05)。从未孕对照组、妊娠早期组到妊娠后期组APTT逐渐缩短, 但只有妊娠后期与未孕组比较差异有统计学意义(P< 0.05), 其他各组之间差异均无统计学意义(P> 0.05)。从未孕对照组、妊娠早期组到妊娠后期组, Fg含量逐渐增高, 3组之间差异有统计学意义(P< 0.01, P< 0.05)。

表1 不同妊娠时期凝血指标( x̅± s)
二、 PZ和ZPI测定结果比较

未孕对照组、妊娠早期组和妊娠后期组血浆PZ、ZPI测定结果见表2。从未孕对照组、妊娠早期组到妊娠后期组, 血浆PZ和ZPI水平逐渐下降。妊娠后期组较未孕组PZ下降16.1%, ZPI下降22.8%, 但3组之间差异无统计学意义(P> 0.05)。

表2 不同妊娠时期PZ、ZPI的血浆水平 (ng/L, x̅± s)
三、 PZ和ZPI与凝血指标的相关性分析

妊娠早期组PZ与PT呈负相关(r=-0.795, P=0.006), 与Fg呈正相关(r=0.737, P=0.015), 与其他凝血指标无相关性; ZPI与Fg呈正相关(r=0.637, P=0.047), 与其他凝血指标无相关性。妊娠晚期组ZPI与PT呈正相关(r=0.978, P< 0.001), 与其他凝血指标无相关性; PZ与各项凝血指标均无相关性。

讨论

PZ和ZPI主要由肝脏合成的维生素K依赖性血浆蛋白, PZ基因位于第13号染色体上q34带, 相对分子质量为62 000。ZPI基因位于第14号染色体上q21.1~q21.3带, 相对分子质量为72 000。ZPI在Ca2+、磷脂存在的条件下, 与PZ、Ⅹ a结合, 形成Ca2+-ZPI-PZ-Ⅹ a复合物, 从而抑制Ⅹ a活性, 明显延迟凝血酶的产生; ZPI也可直接抑制Ⅹ a活性, 但抑制效率相当低, 加入PZ其抑制Ⅹ a活性提高1 000倍, 而缺乏PZ时, 这种抑制作用下降99.99%[3]。所以PZ是ZPI的辅助因子, 增强ZPI灭活凝血因子Ⅹ a能力和速度。另外, ZPI对因子Ⅺ a也有直接抑制作用, 并且不需要PZ、磷脂和Ca2+的存在, 但抑制作用很慢, 肝素可增加抑制的速度和程度。ZPI在抑制Ⅹ a和Ⅺ a过程中或在血液凝固过程中, 被蛋白酶降解, 功能活性消失。PZ和ZPI在机体抗凝、防止血栓形成的过程中发挥重要的生理作用, 越来越引起人们重视。

本研究结果显示, 妊娠早期、妊娠晚期与未孕妇女比较, 凝血指标发生了明显变化, PT、TT明显缩短, Fg含量明显增高, 其差异均有统计学意义(P< 0.01), 并且随着妊娠的进行, 各项指标差异更加明显; 妊娠晚期APTT明显缩短, 与未孕妇女比较差异有统计学意义(P< 0.05)。这些结果说明在妊娠过程中, 血液凝血因子水平和活性在增高, 这与常勇等[7]报道一致, 尤其是启动和参与外源性凝血系统的凝血因子Ⅶ 可增加10倍, 使检查外源性凝血系统的PT比检查内源性凝血系统的APTT缩短更明显。

其次, 从PZ和ZPI与凝血指标的相关性分析可知, 妊娠早期组PZ、ZPI与Fg呈正相关, 说明抗凝物质PZ、ZPI含量减少, Fg含量也相对减少, 这样有利于机体保持凝血功能与抗凝功能之间的动态平衡, 避免血栓发生, 可能是机体的一种自我保护机制; 但PZ与PT呈负相关, 说明PZ减少, 会引起PT相对延长, 这种PT相对延长是否与Fg相对减少所致有关, 有待进一步观察。妊娠晚期组ZPI与PT呈正相关, 与其他凝血指标无相关性, 说明ZPI浓度的降低, 随之对外源性凝血系统的抗凝作用减弱, 凝血活性相对增加, 导致PT相对缩短; 而PZ与各项凝血指标均无相关性, 说明PZ在妊娠晚期对凝血功能影响不明显。

PZ和ZPI浓度随着妊娠周数的增加而逐渐下降, 妊娠后期组与未孕对照组比较, PZ下降了16.1%, ZPI下降了22.8%, 但差异无统计学意义(P< 0.05), 这与Paidas等[8]报道一致。PZ和ZPI下降, 说明灭活凝血因子Ⅹ a、Ⅺ a能力和速度在减弱, 机体抗凝水平下降, 加上凝血因子含量和活性增高, 使机体凝血与抗凝平衡失调, 这种妊娠期生理变化为产后快速有效止血提供了物质基础, 但也可能使妊娠期血栓形成的风险增大。但是, 妊娠妇女PZ浓度变化与郝艳华等[9]报道PZ随着妊娠进行其含量逐渐增高不一致, 他们认为PZ增高是机体的保护机制, 降低胎盘血栓形成的几率。PZ在妊娠期究竟如何变化, 是标本差异还是其他原因, 可能还需要作进一步的研究。

近年来PZ缺乏与异常妊娠之间的研究, 引起了人们关注。Paidas等[8]早期研究发现多种不良妊娠结局(包括26例先兆子痫)的患者血浆PZ浓度明显低于正常妊娠者; 程明刚等[10]研究认为PZ缺乏的孕妇发生妊娠期高血压疾病的危险性增加; Gowri等[11]研究表明, 在妊娠高血压疾病、妊娠糖尿病和出生低体重儿的孕妇中PZ浓度比正常孕妇相对下降, 但差异无统计学意义。PZ和ZPI浓度下降, 尤其是原来基础水平较低的孕妇, 是否发生不良妊娠结局, 还需要进一步探讨。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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