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徐磊, 曾耀, 胡丽华. 类风湿因子对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响. 2011, 26(5): 350-352
  
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类风湿因子对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响
徐磊, 曾耀, 胡丽华
华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科,湖北武汉 430022

作者简介：徐磊,男,1983年生,学士,技师,主要从事临床免疫检验工作。

摘要
目的

探讨高浓度类风湿因子(RF)对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的影响。

方法

取RF>200 IU/mL的血清用ELISA和微粒子酶免疫法(MEIA)分别检测HBsAg,并比较吸附RF前后ELISA检测HBsAg的吸光度(A)值的差异。

结果

50例高浓度RF血清中,ELISA检出HBsAg阳性11例(其中2例为确诊乙型肝炎患者),阳性率18.75%(9/48);MEIA检出HBsAg阳性1例,阳性率2.08%(1/48),显著低于ELISA (P<0.05)。用吸附有纯化的人IgG的胶乳颗粒试剂吸附RF后重新用ELISA检测除2例确诊乙型肝炎外的48例血清HBsAg,仅1例阳性,吸附后的A值较吸附前明显降低(P<0.05)。

结论

血清中高浓度RF会引起ELISA检测HBsAg的假阳性,而对MEIA检测的干扰较小。

关键词: 乙型肝炎表面抗原; 类风湿因子; 酶联免疫吸附试验
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)05-0350-03
Abstract
Keyword:

酶联免疫吸附试验(ELISA)是临床上检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的常用方法,其敏感性高,简便快捷。但我们在日常工作中发现,部分类风湿因子(RF)阳性(尤其是浓度较高)的患者,用此方法检测HBsAg时有假阳性出现。我们通过对50例RF阳性患者用ELISA检测HBsAg,以评价RF对HBsAg检测的影响。

材料和方法
一、标本

于协和医院风湿科住院和门诊就诊的患者(用速率散射免疫比浊法测定RF>200 IU/mL)共50例,其中男19例,女31例,年龄为(52.3±7.9)岁。取空腹静脉血5.0 mL,分离血清后于-20 ℃冻存备用。

二、试剂和仪器

1.RF检测 采用德灵公司生产的BNP速率散射免疫比浊仪及配套试剂进行检测,严格按试剂、仪器说明书操作。

2.HBsAg检测 ELISA试剂盒由英科新创(厦门)科技有限公司生产,严格按照试剂说明书操作。微粒子酶免疫法(MEIA)为美国雅培公司生产的Axsym微粒子免疫分析仪及配套试剂,严格按试剂、仪器操作说明判断结果,由专人操作。纯化的人IgG胶乳颗粒试剂由上海捷门生物技术合作公司生产。

三、方法

1.用速率散射免疫比浊法测定RF浓度 空腹采集静脉血5.0 mL,无抗凝,标本放置30 min待血液凝固后,4 000 r/min(离心半径为8 cm)离心10 min分取血清,用BNP速率散射免疫比浊仪测定RF浓度。

2.用ELISA测定HBsAg 采用上述方法分取血清,由专人使用ELISA试剂盒按照说明书操作检测HBsAg。

3.用MEIA测定HBsAg 采用上述方法分取血清,用Axsym微粒子免疫分析仪测定HBsAg。

4.用纯化的人IgG胶乳颗粒试剂吸附RF 将上述方法分取的血清与吸附有纯化的人IgG胶乳颗粒试剂作系列梯度混合(如血清与试剂混合比例为1∶2、1∶3、1∶4等),均在37 ℃水浴反应30 min后,10 000 r/min(离心半径为8 cm)离心10 min取上清液。

四、统计学方法

采用SPSS 10.0统计软件处理试验数据。计数资料采用配对 χ2检验,RF吸附前后ELISA检测HBsAg结果采用配对 t检验,相关分析采用相关系数的 t检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、 RF吸附前,50例RF阳性血清经ELISA检测HBsAg,检出11例阳性。其中有2例经ELISA检测乙型肝炎血清标志物,1例为HBsAg阳性、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性、乙型肝炎核心抗体(抗HBc)阳性,另1例为HBsAg阳性、乙型肝炎e抗体(抗HBe)阳性、抗HBc阳性,且均已诊断为“乙型肝炎”。另9例HBsAg阳性标本的阳性率为18.75%(9/48), A值为0.32±0.24( A值>0.105为阳性),RF浓度为(788.78±501.32) IU/mL。此9例HBsAg阳性标本经ELISA检测乙型肝炎血清标志物,其中有1例为HBsAg阳性、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)阴性、HBeAg阴性、抗HBe阳性、抗HBc阴性,5例为HBsAg阳性、抗HBs阳性、HBeAg阴性、抗HBe阴性、抗HBc阴性,3例为HBsAg阳性、抗HBs阴性、HBeAg阴性、抗HBe阴性、抗HBc阴性。用MEIA检测48例(除2例确诊乙型肝炎外)血清HBsAg,其中阴性47例,S/CO值为0.066±0.043 (S/CO值>2.00为阳性),阳性仅1例,其阳性率为2.08%(1/48),并且该阳性血清经ELISA检测HBsAg也为阳性。见 表1。用相关系数的假设检验统计,RF浓度与ELISA测定HBsAg的 A值间无相关性( r=-0.160 8, P>0.05)。

表1 ELISA和MEIA对HBsAg检测结果的比较

二、将9例HBsAg阳性标本血清用纯化的人IgG胶乳颗粒试剂吸附RF。血清RF被完全吸附时,其浓度为595~900 IU/mL。除2例确诊乙型肝炎患者的血清外,将其余48例标本血清用适量纯化的人IgG胶乳颗粒试剂吸附RF后,用ELISA检测HBsAg,仅1例为阳性( A值为0.188),并且该阳性血清吸附前后MEIA检测HBsAg均为阳性。原来9例HBsAg阳性标本中有8例转为阴性( A值为0.062±0.016)。比较48例标本RF吸附前后ELISA检测HBsAg的 A值,吸附后的 A值较吸附前明显降低( P<0.05)。见 图1。

图1 48例标本RF吸附前后ELISA检测HBsAg的 A值比较

三、ELISA和MEIA检测高RF水平血清HBsAg结果比较, 表1表明ELISA检测高RF水平血清HBsAg,假阳性率(16.67%)远高于MEIA(0.00%)。

讨 论

HBsAg是目前诊断乙型肝炎和监测病情发展的重要指标之一,ELISA则是临床检测HBsAg的主要方法。RF是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体,常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型,IgM型RF被认为是RF的主要类型,也是临床免疫检验中常规方法所测定的类型。有文献报道,RF阳性可以造成ELISA测定乙型肝炎血清学标志物的假阳性[ 1]。我们在日常工作中也发现,RF浓度较高的血清对ELISA测定HBsAg会造成一定的干扰,出现假阳性。在我们的试验中,RF浓度>200 IU/mL的48例血清(除2例确诊乙型肝炎外)中HBsAg呈现阳性反应比例为18.75%(9/48), A值为0.32±0.24,但其 A值与RF浓度无线性相关。经吸附RF后,有8例转为阴性,说明在RF吸附前此8例标本ELISA测定的HBsAg阳性是由RF的干扰所致的假阳性,假阳性率为16.67%(8/48)。用MEIA检测48例RF阳性的血清,阳性1例,其阳性率为2.08%(1/48),并且该阳性血清经吸附RF后ELISA和MEIA检测HBsAg均为阳性,假阳性率(0.00%)明显低于ELISA。这说明高浓度RF对ELISA检测HBsAg有一定的影响,会出现假阳性,而对MEIA检测干扰较小。其原因推测为,MEIA检测HBsAg的原理是采用双抗体夹心法,待测标本中的HBsAg与包被于微粒子的鼠抗HBs IgM结合,再与生物素标记的羊抗HBs IgG结合,形成微粒子复合物[ 2],但待测标本中的RF不会与IgM结合,因而不易造成假阳性。而在ELISA检测HBsAg的试剂盒中,固相包被的是完整的抗HBs IgG。RF作为以变性IgG为靶抗原的自身抗体,可以针对固相包被抗体的Fc段发生结合,其RF的未结合位点再与酶标记物中的完整IgG结合[ 3]。如果酶标记物中的完整IgG没有通过木瓜酶分解为Fab段和Fc段,以去除能与RF结合的Fc段,那么与固相包被抗体结合的RF就会与酶标记物中完整IgG发生非特异性的结合,产生呈色反应,出现假阳性结果。综上所述,在临床检测工作中,如果ELISA检测乙型肝炎血清标志物时,仅有HBsAg阳性,或出现少见的模式,应该结合患者的临床病史并且用其他方法复检,以排除干扰,慎重报告结果。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 苏春力, 郑丹, 张亚楠. 类风湿因子阳性对酶法检测乙型肝炎e抗体的影响[J]. 检验医学, 2006, 21(增刊): 40. [本文引用:1]
[2] 谢顺鸿. ELISA结合微粒子酶免疫测定法检测低水平HBsAg结果分析[J]. 现代中西医结合杂志, 2005, 14(21): 2850-2851. [本文引用:1]
[3] Selby C. Interference in immunoassay[J]. Ann Clin Biochem, 1999, 36(Pt 6): 704-721. [本文引用:1] [JCR: 1.922]