引用本文
马东礼, 吴跃萍, 孙丽芳. 儿童葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原检测参考范围的建立. 2011, 26(4): 263-265
MA Dongli, WU Yueping, SUN Lifang. Establishment of children's reference value of glucose-6-phosphate isomerase antigen determination. Labratory Medicine, 2011, 26(4): 263-265  
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儿童葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原检测参考范围的建立
马东礼, 吴跃萍, 孙丽芳
深圳市儿童医院,广东 深圳 518026

作者简介:马东礼,男,1967年生,硕士,副主任技师,主要从事病原微生物感染与免疫研究。

摘要
目的

建立儿童葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)抗原浓度检测的临界值。

方法

采用固相酶联免疫吸附试验(ELISA)检测775名正常对照者[分别按年龄(≤3岁、4~6岁、7~9岁和>9岁)和性别(男、女)分组]及53例类风湿关节炎(RA)患儿G6PI抗原浓度。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定G6PI的临界值。

结果

≤3岁、4~6岁、7~9岁和﹥9岁正常对照者G6PI抗原浓度分别为0.126±0.069、0.127±0.079、0.129±0.072和(0.126±0.072)mg/L,各组间差异均无统计学意义( P>0.05)。以性别分组,男、女G6PI抗原浓度分别为0.124±0.089和(0.123±0.065) mg/L,2组间差异无统计学意义( P>0.05)。RA组G6PI抗原浓度[(0.517±0.298)mg/L]显著高于正常对照组[(0.127±0.073)mg/L, P=0.00]。当临界值在0.27 mg/L时,G6PI抗原用于RA诊断的特异性为95.1%,敏感性为79.2%;当临界值在0.32 mg/L时,其特异性为96.2%,敏感性为65.4%。

结论

深圳地区儿童G6PI抗原检测当临界值在0.27和0.32 mg/L时,具有较好的诊断符合率,且无年龄、性别差异。

关键词: 葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原; 固相酶联免疫吸附试验; 临界值
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)04-0263-03
Establishment of children's reference value of glucose-6-phosphate isomerase antigen determination
MA Dongli, WU Yueping, SUN Lifang
Shenzhen Children's Hospital, Guangdong Shenzhen 518026, China
Abstract
Objective

To establish the critical value of glucose-6-phosphate isomerase (G6PI)antigen determination in children.

Methods

775 healthy controls (age groups:≤3 years old, 4-6 years old, 7-9 years old and >9 years old; sex groups: girl and boy groups) and 53 patients with rheumatoid arthritis (RA) were enrolled. The concentration of G6PI antigen was determined by solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The critical value of G6PI antigen was analyzed by receiver operating characteristic (ROC) curve.

Results

The concentrations of G6PI antigen from different age groups ≤3 years, 4-6 years, 7-9 years and >9 years were 0.126±0.069, 0.127±0.079, 0.129±0.072 and (0.126±0.072) mg/L respectively. There was no statistical difference in different age groups ( P>0.05). The concentrations of G6PI antigen were 0.124±0.089 and (0.123±0.065) mg/L in boy group and girl group with no statistical significance ( P>0.05). The concentration of G6PI antigen in RA group [(0.517±0.298) mg/L] was higher than that in healthy group [(0.127±0.073)mg/L, P=0.00]. The specificity and sensitivity were 95.1%and 79.2%, when the critical value was 0.27 mg/L. The specificity and sensitivity were 96.2%and 65.4%, when the critical value was 0.32 mg/L.

Conclusions

The G6PI antigen concentration of children in Shenzhen is not affected by age and sex. With good specificity and sensitivity, 0.27 and 0.32 mg/L may be the high reference values for RA.

Keyword: Glucose-6-phosphate isomerase antigen; Solid phase enzyme-linked immunosorbent assay; Critical value
引言

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种常见多关节受累的自身免疫系统疾病, 因免疫功能紊乱产生多种自身抗体, 致关节炎症、畸形、功能障碍。早期诊断、积极干预是RA患者获得较好预后的关键, 因此寻找敏感、特异的血清学诊断指标是RA研究的重要内容。葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)是一种催化6-磷酸葡萄糖向6-磷酸果糖转化, 在糖酵解及糖异升过程中发挥重要作用的酶, 广泛存在于细胞胞质内, 可作为细胞因子或生长因子分泌于细胞外。Schaller等[1]报道G6PI抗原在RA患者血液、关节液中有高表达, 并且与病情活动状态相关, 是诊断RA患者的新指标。我们采用固相酶联免疫吸附试验(ELISA)对深圳地区儿童G6PI抗原的临界值进行了研究, 并对临界值是否存在年龄、性别差异进行评估, 以期发现具有较好诊断符合率的临界值, 从而协助临床正确诊断深圳地区儿童RA。

材料和方法
一、研究对象

1. 正常对照组

选择2009年4至12月深圳市儿童医院门诊健康体检者共903名, 去除年龄、性别记录不全者和吸光度(A)值检测为负值者139名, 符合录入标准者共775名, 其中男312名, 女463名, 年龄0~16岁, 按照年龄分为4组(≤ 3岁、4~6岁、7~9岁、﹥9岁)。以抗核抗体(ANA)、抗环瓜氨酸抗体(ACCP)、类风湿因子(RF)、抗ds-DNA、抗可提取核抗原(ENA)抗体阴性, 关节无肿胀、压痛为录入标准。

2. RA组

选择2009年4至12月深圳市儿童医院风湿肾脏病科患儿53例, 其中男23例, 女30例, 年龄0~16岁。均符合1987年美国风湿病学会修订的RA诊断标准。

二、方法

1. ELISA双抗体夹心法

检测G6PI抗原的试剂购自上海北加生化试剂公司, 操作严格按照说明书进行。使用雷度RT-2100C酶标仪在492 nm 处(参比波长630 nm)检测A值。以G6PI抗原的标准品浓度为纵坐标, 以标准品对应的A值为横坐标做标准曲线, 检测标本根据A值, 在曲线上查得各自G6PI抗原浓度值。

2. 临界值的确定

计算正常对照组G6PI抗原浓度 +1.96s和 +2.58s, 作为该方法学的备选临界值, 比较2个临界值的特异性和敏感性, 计算A值在0.10、0.20、0.27、0.30、0.32、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80时的特异性和敏感性, 以敏感性为纵坐标代表真阳性率, 以“ 1-特异性” 为横坐标代表假阳性率, 采用Excel软件绘制受试者工作特征(ROC)曲线, 利用ROC曲线确定最佳临界点[2]。

3. 分组

将正常对照组按照年龄分为4组(≤ 3岁、4~6岁、7~9岁、﹥9岁), 检测并计算各组的G6PI抗原浓度; 再按性别分组, 检测并计算男、女G6PI抗原浓度。检测并计算RA组与正常对照组的G6PI抗原浓度。

三、统计学方法

采用SPSS 11.0统计软件, 正常对照组的不同年龄段G6PI抗原浓度数据呈正态分布, 且方差齐性, 采用两两均数比较的q检验; RA组与正常对照组G6PI抗原浓度数据分别呈正态分布, 但方差不齐, 采用两独立样本均数比较的t’ 检验; 正常对照组的不同性别之间G6PI抗原浓度数据呈正态分布, 且方差齐性, 采用两独立样本均数比较的t检验, 所有假设检验的检验水平α 为0.05。

结果

一、正常对照组不同年龄段G6PI抗原浓度参数见表1。正常对照组不同年龄段G6PI抗原浓度间差异无统计学意义(P> 0.05); 正常对照组男、女G6PI抗原浓度分别为0.124± 0.089、(0.123± 0.065) mg/L, 2组间差异无统计学意义(t=0.241, P> 0.05)。

二、RA组与正常对照组G6PI抗原浓度分别为0.517± 0.298、(0.127± 0.073)mg/L, 2组间差异有统计学意义(t=9.509, P=0.00)。见表1。

表1 正常对照组与RA组G6PI抗原浓度(± s, mg/L)

三、当正常对照组95%可信区间上限值为0.27 mg/L时, G6PI抗原用于RA诊断的特异性为95.1%, 敏感性为79.2%; 当99%可信区间上限值为0.32 mg/L时, 其特异性为96.2%, 敏感性为65.4%。由ROC曲线可以看出, 在0.27和0.32 mg/L处有较好的诊断符合率。见图1。

图1 ROC曲线图

讨论

Schubert等[3]和Schaller等[4]报道, G6PI抗原与RA高度相关。那么G6PI抗原可否作为RA的临床血清学诊断指标, 以及G6PI抗原临界值在何处时用于儿童RA疾病诊断的特异性、敏感性较高, 具有较好的诊断效率, 是本研究重点讨论的问题。

本研究表明, 正常对照组的各年龄段以及男、女G6PI抗原浓度间差异均无统计学意义(P> 0.05), 说明G6PI抗原检测的临界值无年龄、性别差异, 即G6PI抗原检测的临界值无需按照年龄、性别分组。正常对照组与RA组间G6PI抗原浓度差异有统计学意义, 说明G6PI抗原浓度检测可以有效区分RA患者群和健康人群, G6PI抗原浓度检测可以作为RA患病的血清学指标。正常对照组G6PI抗原95%、99%可信区间的上限值分别为0.27、0.32 mg/L。由ROC曲线图可以看出, 选择0.27 mg/L作为临界值具有较好的敏感性, 选择0.32 mg/L作为临界值具有较好的特异性, 因此可根据不同的临床用途选择不同的临界值。

本研究标本的获得是采取在某一时间段内整群、分层抽样方法, 涵盖了不同年龄段、不同地域的儿童, 并且正常对照组各年龄段及RA组的数据基本呈正态分布, 说明样本来源具有一定随机性、代表性; 正常对照组G6PI抗原浓度如> 0.20 mg/L则需复查, 2次结果之差除以数据全距若> 1/3, 则考虑为离群点, 应剔除; 儿童RA病例数较少, 与正常对照组数据量差距较大, 可能存在一定的抽样误差, 但因二者数据基本呈正态分布, 且二者均值差异较大, 所以得出的结论是可以接受的。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Schaller M, Burton DR, Ditzel HJ. Autoantibodies to GPI in rheumatoid arthritis: linkage between an animal model and human disease[J]. Nat Immunol, 2001, 2(8): 746-753. [本文引用:1] [JCR: 26.199]
[2] 杨有业, 张秀明. 临床检验方法学评价[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2008: 352-355. [本文引用:1]
[3] Schubert D, Schmidt M, Zaiss D, et al. Autoantibodies to GPI and creatine kinase in RA[J]. Nat Immunol, 2002, 3(5): 411. [本文引用:1] [JCR: 26.199]
[4] Schaller M, Stohl W, Tan SM, et al. Raised levels of anti-glucose-6-phosphate isomerase IgG in serum and synovial fluid from patients with inflammatory arthritis[J]. Ann Rheum Dis, 2005, 64(5): 743-749. [本文引用:1] [JCR: 9.111]