引用本文
丁双双, 汪浩, 沈霞. HDL-C试剂干扰血清总胆汁酸测定结果的原因分析及对策. 2011, 26(3): 215-216
  
Permissions
Copyright©2011, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部版权所有
HDL-C试剂干扰血清总胆汁酸测定结果的原因分析及对策
丁双双, 汪浩, 沈霞
上海交通大学医学院苏州九龙医院检验科, 江苏 苏州 215021

作者简介:丁双双,女,1970年生,学士,副主任技师,主要从事生化检验工作。

摘要
关键词: 总胆汁酸; 携带污染; 搅拌棒
中图分类号:R446.1 文献标志码:B 文章编号:1673-8640(2011)03-0215-02
引言

近年来, 采用循环酶法测定血清总胆汁酸(TBA)已被广泛应用, 该法具有灵敏度高、仪器管道无污染等优点[1]。但我们在常规生化多种项目的检测中经常出现 TBA结果有假性升高的现象。经追踪分析发现, 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定试剂含有TBA成分, 试剂针的携带发污染干扰其测定结果, 设定特殊的清洗程序能消除这种干扰 , 但搅拌棒表面涂膜层的损坏使得残留试剂成分不能被冲洗干净仍可造成TBA结果假性升高。我们对上述现象进行了分析, 并采取相应对策以保证TBA检测结果的准确性。

一、材料和方法
1. 仪器和试剂

雅培C8000型全自动生化分析仪; 特殊清洗液:雅培C8000专用DetergentA、 DetergentB、0.5%酸洗液。TBA(循环酶法, 试剂批号10062/901005/1)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)试剂均为罗氏诊断产品(上海)有限公司产品, 其中TG 、TC为单试剂, TBA、HDL-C为双试剂。

2.方法

(1)测定参数设置:各项目测定参数按实际供应商提供进行设定; (2)试剂中TBA的检测:以生化室各种常规项目的试剂[双试剂时试剂1(R1)、试剂2(R2)按比例混合]作为样本, 为消除基质效应加入等量混合血清, 分别测定其中的TBA含量; (3)试剂针及搅拌棒携带污染实验: 30份血清(来自健康体检者)样本先单独测定TBA, 然后按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA组合分别先测定TC 、TG、HDL-C 再测定TBA含量; (4)避免试剂针携带污染的程序设定: 用去离子水和特殊清洗液冲洗试剂针R1、R2后再按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA组合分别先测定TC 、TG、HDL-C 再测定TBA; (5) 更换搅拌棒:更换搅拌棒后再重复上述(4)的步骤, 比对分析实验结果。

3.统计学方法

应用t检验和Excel电子表格统计分析。

二、结果
1.常规生化项目试剂中TBA含量的测定结果

TC试剂为133.6 μ mol/L; TG试剂为150.3 μ mol/L; HDL-C试剂> 最大检测限, 其他试剂含量都低于4.3 μ mol/L。TC、TG、HDL-C试剂中TBA含量明显高于其他试剂, 可能对胆汁酸的测定造成干扰。

2.试剂针携带污染对血清TBA测定影响的分析

30份血清样本先单独测定TBA, 浓度均值为5.03 μ mol/L; 然后挑出TBA测定结果最高的3种试剂:TC、TG、HDL-C分别按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA的组合顺序分别检测。TBA浓度分别为5.19、4.95、85.02 μ mol/L。实验结果证明HDL-C→ TBA的检测结果存在严重的干扰, 致使TBA结果假性升高。配对t检验显示这种干扰对结果的影响较大(P< 0.001)。其他试剂对TBA的测定结果无影响。

3.设定特殊清洗程序避免试剂针携带污染后TBA的测定结果

用去离子水和特殊清洗液冲洗试剂针R1、R2后再按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA组合测定TBA, 结果分别为5.14、4.81、83.42 μ mol/L。结果显示设定特殊清洗程序不能消除HDL-C对TBA检测结果存在的严重干扰。

4.搅拌棒携带污染对TBA结果影响的检测

更换新的搅拌棒后再按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA组合分别测定TBA, 结果分别为5.09、4.82、8.77 μ mol/L。

5.更换搅拌棒并设定特殊清洗程序避免携带污染后TBA的测定结果

更换搅拌棒后用去离子水和特殊清洗液冲洗试剂针R1、R2后再按照TC→ TBA、TG→ TBA、HDL-C→ TBA组合测定TBA, 结果分别为4.98、4.63、5.12 μ mol/L。后者明显低于更换搅拌棒后常规清洗后测得的TBA结果(8.77 μ mol/L)(P< 0.001), 显示存在系统误差。见表1。

表1 采用不同抗干扰方法后的TBA结果(μ mol/L)
三、讨论

目前, 全自动生化分析仪的使用极为普遍, 但在检测患者样本时因多种原因引起的交叉污染常影响样本检测结果的准确性。交叉污染与不同仪器、试剂组分及测定的顺序、项目的组合以及试剂针、搅拌棒、比色杯是否清洁或损坏均有一定的关系。

血清TBA测定是一项很具实用价值的肝功能诊断指标[1], 已在临床广泛开展。但在脂肪酶、胆固醇(包括HDL-C)和TG测定试剂中往往加有胆酸盐, 自动分析时会引起携带污染。本研究结果显示HDL-C试剂干扰血清TBA测定结果的原因是:HDL-C试剂中含有大量的TBA成分, 试剂针和搅拌棒都有可能产生携带污染。当前一分析的试剂组分中(HDL-C)含有对后一分析项目(TBA)中待测物质有干扰的成分(胆酸盐), 而待测物质的浓度与之相比很微量时, 造成分析项目之间的携带污染[2], 这种现象只有在这2个项目先后检测时才出现, 较隐匿不易觉察。其对策包括:调整检测项目的先后顺序以避免HDL-C试剂对TBA的干扰; 启动试剂针的特殊清洗程序消除试剂针的携带污染; 必要时(搅拌棒表面涂膜受损)更换搅拌棒以消除搅拌棒的携带污染。

本实验室生化仪在早期使用中因特殊清洗程序的设定而未发现明显的交叉污染问题, 但随着仪器在使用过程中不易察觉的损坏, 搅拌棒表面涂膜层被逐渐腐蚀起毛, 导致搅拌棒的携带不能被冲洗干净严重干扰TBA测定结果, 这种情况若不注意就不易发现, 值得实验室工作人员引起重视。

综上所述对于日常工作中某个项目多次出现异常不稳定结果时, 要及时考虑到交叉污染问题, 特别是试剂的交叉污染, 应仔细研究分析每个项目试剂成分, 必要时进行比对试验, 判断交叉污染项目及程度, 多方查找原因寻找有效的消除方法, 以确保结果的准确性。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 张秀明, 温冬梅, 袁勇. 临床生物化学检验质量管理与标准操作规程[M]. 北京: 人民军医出版社北京人民军医出版社, 2010: 248-251. [本文引用:2]
[2] 陈继中, 李旭光, 唐吉斌. 试剂携带污染对血清总胆汁酸测定结果的影响及消除措施[J]. 检验医学, 2006, 21(3): 228-230. [本文引用:1]