引用本文
牛忆军, 姚祖德. 全自动血液分析仪测定网织红细胞性能评价与应用. 2011, 26(3): 169-171
NIU Yijun, YAO Zude. Application and evaluation on the performance of automated hematology analyzer for the test of reticulocyte count. Labratory Medicine, 2011, 26(3): 169-171  
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全自动血液分析仪测定网织红细胞性能评价与应用
牛忆军, 姚祖德
上海市第一人民医院分院检验科,上海 200081

作者简介:牛忆军,女,1964年生,主管技师,主要从事血液学检验及管理工作。

摘要
目的

对Sysmex XE-2100 全自动血液分析仪测定网织红细胞(Ret)的性能作评价与应用。

方法

采用XE-2100全自动血液分析仪(简称XE-2100)对正常及患者血样本中Ret的精密度、稳定性、线性范围、敏感性及携带污染率进行测定,并与人工显微镜法做相关性分析。

结果

XE-2100测定Ret的精密度、线性范围、敏感性均在允许的范围内,稳定性在4 ℃ 48 h内Ret分析无显著变化( CV<1%),携带污染率仅为0.14%;XE-2100测定Ret的结果与人工显微镜法相关性良好( r=0.997)。

结论

XE-2100测定Ret准确度高、重复性好、线性范围能满足临床之需,携带污染率低,且检测快速简便,与人工显微镜法相关性好,基本上能取代人工显微镜法。

关键词: 网织红细胞; 计数; 全自动血液分析仪
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)03-0169-03
Application and evaluation on the performance of automated hematology analyzer for the test of reticulocyte count
NIU Yijun, YAO Zude
Shanghai First People's Branch Hospital,Shanghai 200081,China
Abstract
Objective

To evaluate the performance and analyze the application of Sysmex XE-2100 automated hematology analyzer for the test of reticulocytes (Ret).

Methods

XE-2100 was applied to detect the precision, stability, linear range, sensitivity and contamination rate of Ret in blood samples of healthy subjects and patients. The correlation of XE-2100 and manual microscopy was analyzed.

Results

The precision, linear range and sensitivity were within the allowable ranges. The stability at 4℃ had no obvious change in 48h [coefficient of variation ( CV) <1%]. The rate of carryover contamination was only 0.14%. The correlation of test results was good between XE-2100 and manual microscopy ( r=0.997).

Conclusions

By XE-2100 to test the Ret, the accuracy, reproducibility and linear range are good for clinical application. The rate of carryover contamination is low,and XE-2100 is rapid and simple. The results are comparable with the manual microscopy, and the correlation is good. Sysmex XE-2100 can replace the manual microscopy.

Keyword: Reticulocyte; Count; Automated hematology analyzer
引言

网织红细胞(reticulocyte, Ret)计数是观察人体骨髓红系细胞造血功能及贫血有关疾病疗效评估的重要临床指标[1]。以往传统的方法是采用人工显微镜法, 费时费力, 稳定性和重复性差。近年来, 全自动血液分析仪取得了令人嘱目的发展, 为Ret计数提供了更先进的检测方法。为此, 我们用Sysmex XE-2100全自动血液分析仪(简称XE-2100)测定Ret的精密度、稳定度、线性范围、敏感性及携带污染率, 对该仪器性能作了评价, 并与人工显微镜法作相关性分析。

材料和方法
一、样本

收集上海市第一人民医院分院2009年5月至2010年5月住院患者血样本。受检者早晨空腹抽血2 mL, 置乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝的真空管内, 样本于2 h内处理完毕。

二、仪器与试剂

日本Sysmex XE-2100全自动血液分析仪及原装配套试剂和专门全血质控物; 日本Olympus CH20双目显微镜; 1%煌焦油蓝试剂, 按《全国临床检验操作规程》(第3版)[2]的要求配制。

三、方法

1.精密度

(1)批内精密度:取住院患者高、中、低Ret值抗凝血样本各1份, 每份重复10次, 计算 ± s及变异系数(CV); (2)批间精密度:每天同一时间用标准全血质控品做质控, 连续测定22 d, 计算 ± s及CV。

2.稳定性

用1份抗凝血样本, 置4 ℃保存, 并分别于即时、30 min及1、2、4、8、24、72 h取出对抗凝血样本测定3次, 取均值。

3. 线性范围

用生理盐水将Ret高值样本分别作100%、80%、60%、50%、40%、20%、10%、5%稀释, 每个浓度样本平行测定3次, 取均值, 并与每一稀释度测得的Ret绝对值与Ret理论值作比较, 以Ret理论值为X轴, 实测值为Y轴, 得出回归方程。

4. 敏感性

经强烈化疗后的急性髓性白血病患者, 其外周血Ret计数的百分比可视为0, 测定结果可作为敏感性指标[3]。

5. 携带污染率

用高值的抗凝血样本(15.42%)连续测定3次(H1、H2、H3), 然后再检测低值抗凝血样本(0.66%)连续测定3次(L1、L2、L3), 按biouqnton方法[4]计算携带污染率, 公式为[(L1-L3)/(H3-L3)× 100%]。

6.相关性

取100份抗凝血, 样本用XE-2100及人工显微镜法计数比较, 将结果作相关性统计。

四、统计学方法

用SPSS10.0统计软件处理完成。数据用 ± s表示, 采用配对t检验及相关性分析。

结果
一、精密度

1. 批内精密度 XE-2100测定高、中、低Ret值抗凝血样本批内精密度结果见表1。

表1 3份抗凝血样本重复测定及CV结果(± s)

2. 批间精密度

XE-2100测定标准全血质控品的批间精密度结果见表2。

表2 批间精密度测定结果
二、 稳定性

在4 ℃条件下, 48 h内Ret测定值无明显变化, CV< 1%, 72 h时稍有降低。

三、 线性范围

以Ret理论值为X轴, 实测值为Y轴, 得出回归方程为Y=0.99X+7.45, r=0.995。结果显示线性很好。

四、 敏感性

XE-2100测得急性髓性白血病患者外周血Ret为0.012%, 表明XE-2100检测Ret敏感性较高。

五、 携带污染率

计算得出XE-2100的携带污染率为0.14%。

六、 相关性

XE-2100测定Ret的结果与人工显微镜计数法的相关性良好(r=0.997), P> 0.05, 结果差异无统计学意义。

讨论

Ret人工显微镜法是传统的检测方法, 八十年代国际血液学标准化委员会亦曾推荐Miller窥盘目视计数法, 但该方法影响因素颇多, 操作费时、误差亦大。九十年代后, 全自动血液分析仪法已逐渐应用于临床Ret测定。XE-2100在全血细胞计数中可随时有选择地分析Ret, 并提供多种有临床价值的Ret参数[5]。XE-2100应用了半导体激光流式细胞检测技术, 并结合细胞化学荧光染色技术, 使血细胞分析的准确度和灵敏度大为提高, 其测定原理是利用RNA有很强亲和力的染料, 经染色在氩激光束照射下通过流式细胞原理检测Ret, 根据激光穿透红细胞时光的散射性, 得出Ret百分比(%)、Ret绝对值(#)、未成熟Ret百分数、低荧光Ret比率、中荧光Ret比率、高荧光Ret比率等新型参数。

本实验结果表明, XE-2100其批内、批间变异系数小, 精密度高; 抗凝血样本在4℃放置48 h内Ret百分比变化很小, 差异无统计学意义, 说明稳定性良好, 此现象可能是由于低温(4℃)条件下, Ret成熟放慢, RNA消失延迟所知, 这与邱君凤等[6]报道在48 h内Ret百分比变化差异无统计学意义, 72 h后稍有降低, 差异有统计学意义相同; 本实验线性良好, r值为0.995, 且测定范围广, 完全覆盖了生理及普遍的病理范围; 经强烈化疗后的急性髓性白血病患者, XE-2100测得数仅为0.012%, 说明敏感性好; XE-2100的携带污染率低, 仅为0.14%, 说明不同样本间互染少; XE-2100与人工显微镜法计数Ret比较, r=0.997, P> 0.05, 两种方法测定结果差异无统计学意义, 说明两法相关性良好。

由此可见, 全自动血液分析仪测定Ret可随时、有选择地分析Ret, 具有快速简便、敏感性及准确性好、线性及重复性佳、携带污染率低等特点, 且样本不需要预处理, 适合大批量标本的测定, 并可提供多个Ret新参数, 与传统人工显微镜法相比优越性显而易见, 基本上能取代人工显微镜法用于Ret测定。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 丛玉隆. 当代血液分析技术与临床[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1997: 184. [本文引用:1]
[2] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 131. [本文引用:1]
[3] Lacombe F, Lacoste L, Vial JP, et al. Automated reticulocyte counting and immature reticulocyte fraction measurement. Comparison of ABX PENTRA 120 Retic, Sysmex R-2000, flow cytometry, and manual counts[J]. Am J Clin Pathol, 1999, 112(5): 677-686. [本文引用:1] [JCR: 2.881]
[4] ICSH. Proposed reference method for reticulocyte counting based on the detemination of the reticulocyte to red cell ratio. The expert panel on cytometry of the international council for stand ardization in haematology[J]. Clin Lab Haematol, 1998, 20(2): 77-79. [本文引用:1] [JCR: 1.304]
[5] 陈梅, 方伟祯, 傅玉如. Sysmex XE-2100i全自动血细胞分析仪分析网织红细胞性能评价[J]. 实用医学杂志, 2007, 23(2): 268-270. [本文引用:1]
[6] 邱君凤, 叶跃红, 石姜. XT-2100i全自动血细胞分析仪测定网织红细胞的评价[J]. 国际检验医学杂志, 2006, 27(4): 305-306. [本文引用:1]