糖化血红蛋白(HbA1c)是血红蛋白与糖类经非酶促反应结合而生成的, 其合成缓慢且相对不可逆, 故可反映机体1~2个月内的平均血糖水平, 因此HbA1c已成为反映糖尿病患者较长时间段内血糖控制水平的良好指标^[1]。目前HbA1c的测定方法主要有色谱法、电泳法、免疫法和化学法等多种, 各种方法检测结果的差异是临床关注和探讨的课题^{[2, 3]}。DQ-2000全自动低压液相HbA1c检测仪系采用低压液相离子交换层析原理, 检测时可采用抗凝全血或预溶稀释血2种性状样本。为了解2种样本检测所产生的偏差程度以及样本放置时间对检测结果的影响, 我们对此作相关检测, 旨为临床应用提供参考。

一、以HPLC测定浓度(X)为参比, 计算得DQ-2000(Y)的相对偏差为3.54%。

二、正常浓度全血样本精密度为2.52%, 高浓度全血样本精密度为1.53%, 正常浓度预溶稀释血精密度为2.54%, 高浓度预溶稀释血精密度为1.84%, HbA1c浓度越高, 检测的变异系数(CV)越小。全血样本、预溶稀释血精密度均在仪器精密度范围(< 7%)内, 全血样本精密度略好于预溶稀释血样本。

三、以全血样本即刻浓度为参比, 预溶稀释血即刻测定HbA1c浓度的相对偏差与其余各时段比较为最小, 48 h内保存相同时段全血样本的相对偏差低于预溶稀释血。预溶稀释血及全血样本放置4 ℃ 24 h起HbA1c测定值即开始下降, 其中有部分样本在放置48 h后检测结果会有所回升, 见表1、表2。

表1

表1

表1 全血即刻与全血保存不同时段HbA1c测定值的相对偏差(± s, %) HbA1c 例数 全血即刻 全血保存24 h 相对偏差 全血保存48 h 相对偏差 ≤ 6.0 33 5.44± 0.38 5.13± 0.36 6.04 5.15± 0.44 5.63 6.1~8.9 19 6.91± 0.61 6.49± 0.71 6.47 6.43± 0.77 7.47 ≥ 9.0 18 11.13± 1.46 10.7± 1.42 4.02 10.72± 1.48 3.82 所有浓度 70 7.30± 2.49 6.93± 2.45 5.34 6.93± 2.47 5.34

表1 全血即刻与全血保存不同时段HbA1c测定值的相对偏差(± s, %)

表2

表2

表2 全血即刻与预溶稀释血保存不同时段HbA1c值相对偏差(± s, %); HbA1c(%) 例数 全血即刻 预溶稀释 即刻 相对偏差 保存24 h 相对偏差 保存48 h 相对偏差 ≤ 6.0 33 5.44± 0.38 5.29± 0.42 2.83 4.93± 0.42 10.34 4.98± 0.41 9.23 6.1~8.9 19 6.91± 0.61 6.69± 0.55 3.28 6.16± 0.76 12.17 6.15± 0.72 12.35 ≥ 9.0 18 11.13± 1.46 10.86± 1.35 2.48 10.58± 1.27 5.20 10.61± 1.38 4.90 所有浓度 70 7.30± 2.49 7.10± 2.43 2.81 6.72± 2.48 8.63 6.74± 2.48 8.30

表2 全血即刻与预溶稀释血保存不同时段HbA1c值相对偏差(± s, %);

四、延长放置时间至72、120 h的全血及预溶稀释血样本结果

全血样本放置时间越长, 部分高浓度样本测定值会急剧下降, 而低浓度样本测定值会明显上升, 且下降与上升均无相关性, 而预溶稀释血样本未出现这种情况, 相对较稳定。见表3。

表3

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表3 全血即刻与全血及预溶稀释血样本保存72、120 h时HbA1c测定值的相对偏差(± s, %) HbA1c 例数 全血即刻 保存72 h 保存120 h 全血 相对 偏差 预溶稀释血 相对 偏差 全血 相对 偏差 预溶稀释血 相对 偏差 ≤ 6.0 10 5.44± 0.38 5.20± 0.52 4.62 5.12± 0.48 6.25 5.24± 0.72 3.82 5.28± 0.74 3.03 6.1~8.9 5 6.91± 0.61 6.42± 0.79 7.63 6.20± 0.80 11.45 6.32± 0.89 9.50 6.30± 0.79 9.68 ≥ 9.0 5 11.13± 1.46 10.12± 1.51 9.98 10.72± 1.35 3.82 10.02± 1.43 11.08 10.58± 1.47 5.20

表3 全血即刻与全血及预溶稀释血样本保存72、120 h时HbA1c测定值的相对偏差(± s, %)

五、全血样本即刻检测HbA1c浓度均高于全血样本4℃保存24、48 h及预溶稀释血即刻、4℃保存24和48 h(P< 0.001), 见表4。

表4

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表4 全血即刻与保存不同时段HbA1c测定值的比较 参数 全血即刻 全血4 ℃ 24 h 全血4 ℃ 48 h 预溶稀释血 即刻 预溶稀释血4 ℃ 24 h 预溶稀释血4 ℃ 48 h HbA1c (%) 6.30 (4.4013.50) 5.85 (4.4013.00) 5.90 (4.5013.20) 6.10 (4.3013.10) 5.50 (4.2012.80) 5.60 (4.2012.60) Z值 -6.943 -6.792 -5.939 -7.132 -7.075 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表4 全血即刻与保存不同时段HbA1c测定值的比较

目前临床实验室常规用于HbA1C检测的方法有两类, 第一类基于GFb和非GFb电荷的不同, 包括阳离子交换色谱法, 电泳法, 等点聚焦法等; 第二类基于GFb结构特点, 包括亲和色谱法, 免疫方法^[5]。DQ-2000 和Rio-Rad D-10(HPLC)均可遡源到美国国家HbA1c标准化程序(NGSP), 本研究同批样本用DQ-2000 和Rio-Rad D-10同时检测, 以HPLC测定浓度(X)为参比, DQ-2000(Y)相对偏差为3.54%。

精密度实验中, 正常浓度及高浓度样本全血模式较预溶稀释血模式精密度高, 考虑为全血模式测试中全程自动化检测, 无人工预溶血稀释可能造成的人为误差, 其结果更加稳定。

将全血样本即刻检测的HbA1c浓度分别与全血样本4 ℃保存24 、48 h以及预溶稀释血即刻、4℃保存24、48 h测得的HbA1c浓度进行比较, 差异均有统计学意义(P< 0.001)。本研究显示预溶稀释血及全血样本4 ℃保存24 h起HbA1c浓度即开始下降, 两者部分样本在保存48 h后检测结果会有所回升。与有关报道中随着样本储存时间延长, 测定结果会逐渐升高^[6]的结论相符。本研究样本4 ℃保存同样时间, 预溶血稀释样本与全血即刻的相对偏差要高于全血样本, 表明4 ℃保存48 h内全血样本的结果较预溶稀释血样本稳定。此结果与文献^[7]报道的HbA1c在十四烷基三甲基溴化铵(TTAB)溶血剂中稳定时间长、检测结果稳定可靠的结论不相同。因此我们将部分样本延长保存时间至72、120 h再进行检测, 发现全血样本保存时间越长, 部分高浓度样本测定值会急剧下降, 而低浓度样本测定值会明显上升, 且下降与上升均无相关性, 而预溶稀释血样本未出现这种情况, 相对较稳定。本研究还发现部分高浓度值全血样本4 ℃保存24 h后HbA1c开始下降, 但放置48 h后又回升, 有的甚至略高于即刻值。本研究结果显示, 若样本保存时间超过48 h, 采用预溶稀释血更为稳定; 而保存时间在48 h以内则全血保存更好, 但因样本量较小(仅20例), 此结论还有待进一步论证。