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宋云霄, 张海晨. 总胆红素氧化酶法检测系统的性能评价. 26(12): 811-813
SONG Yunxiao, ZHANG Haichen. Evaluation on the performance of total bilirubin oxidase assay system performance. Labratory Medicine, 26(12): 811-813  
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总胆红素氧化酶法检测系统的性能评价
宋云霄, 张海晨
上海市徐汇区中心医院,上海 200031

作者简介:宋云霄,男,1973年生,副主任技师,主要从事生化检验工作。

摘要
目的

评价氧化酶法测定血清总胆红素(TBil)的性能。

方法

用氧化酶法测定血清TBil,探讨氧化酶法的精密度、线性、分析灵敏度、抗干扰性和回收率,并与改良J-G法进行比较。

结果

TBil的高、低浓度样本批内CV分别为0.38%、0.78%,日间CV分别为1.78%、2.73%;平均回收率为101.2%;分析灵敏度为1.23 μmol/L;线性范围为1.23~574.40 μmol/L;2种方法相关性良好,直线回归方程为Y=1.105X-1.11,r=0.998。血红蛋白、维生素C和脂肪乳分别为4.8 g/L、500 mg/L和5%时对氧化酶法测定血清TBil不产生干扰。

结论

氧化酶法具有良好的精密度、线性范围和抗干扰能力,与改良J-G法具有很好的一致性,适用于临床常规检测。

关键词: 总胆红素; 氧化酶法; 分析灵敏度
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)012-0811-03
Evaluation on the performance of total bilirubin oxidase assay system performance
SONG Yunxiao, ZHANG Haichen
Xuhui District Central Hospital, Shanghai 200031, China
Abstract
Objective

To evaluate the performance of serum total bilirubin (TBil) determination by oxidase method.

Methods

Serum TBil was determined by oxidase method, and the method's precision, linearity, analytical sensitivity, anti-interference ability and recovery rate were evaluated. The method was compared with the modified J-G method.

Results

The within-run coefficients of variation (CV) of high and low TBil concentration samples were 0.38% and 0.78% respectively. The day to dayCV of high and low TBil concentration samples were 1.78% and 2.73% respectively. The average recovery rate was 101.2%. The analytical sensitivity was 1.23 μmol/L, and the linear range was from 1.23 to 574.4 μmol/L. There was a good correlation between the 2 methods, and the linear regression equation wasY = 1.105X-1.11 (r=0.998). There was no interference when hemoglobin, vitamin C and fat emulsion were 4.8 g/L, 500 mg/L and 5% for serum TBil oxidase.

Conclusions

Oxidase method has good precision, linear range and anti-interference ability and has a good consistency with the modified J-G method. It is suitable for routine clinical testing.

Keyword: Total bilirubin; Oxidase method; Analytical sensitivity

人体中总胆红素(TBil)的升高或降低都具有重要的临床意义,在全自动生化分析仪上建立正确TBil检测系统对检验质量十分重要。目前临床测定TBil的方法主要有钒酸盐氧化法和改良咖啡因法。近年来胆红素氧化酶法在临床上开始应用。胆红素氧化酶在分子氧的存在下,氧化胆红素形成胆绿素。可以检测TBil、直接胆红素和与葡萄糖醛酸结合的胆红素[ 1]。当反应液pH值接近8、含有胆酸钠和十二烷基硫酸盐时,所有4种胆红素都被氧化为胆绿素,后者进一步被氧化为紫色,最终呈无色产物。450 nm处吸光度( A)的下降值与TBil浓度呈比例。胆红素氧化酶方法的结果与Jendrassik-Grof程序的结果具有很好的一致性[ 2]。Doumas等[ 3]经过13年的不断探索和研究,明确了采用Jendrassik和Grof[ 4]的方法原理对方法作了改进,形成了TBil检测的参考方法。因此我们对氧化酶法进行评价,并与改良J-G法进行比较。

材料和方法
一、材料

1. 试剂 血清总胆红素(TBil)改良J-G法试剂盒(美国西门子医学诊断公司);氧化酶法TBil试剂盒(日本关东化学株式会社)。校准品与质控品使用个试剂配套校准品与质控品进行校准和质量控制。

2.干扰剂选择 100 g/L维生素C(Vit C)注射液(上海禾丰制药厂,批号 101009);20%脂肪乳剂250 mL(德国贝朗医疗有限公司,批号 9302A183)。血红蛋白(Hb)干扰剂:取5 mL新鲜血液,用生理盐水反复洗涤,加入蒸馏水使红细胞完全溶解,离心取上清液,用SYSMEX XT2000i血液分析仪检测Hb为96 g/L。

3.仪器 美国SIEMENS Dimension RxL全自动生化分析仪(简称Dimension RxL)。

二、方法

1.反应原理 改良J-G法:在重氮盐的作用下直接生成偶氮胆红素。氧化酶法:胆红素氧化酶存在下胆红素被氧化成胆绿素。

2.参数设定 2种TBil试剂在Dimension RxL上按照厂家说明书进行参数设定和操作。分别组成各自的检测系统(分别简称为氧化酶法、改良J-G法)。

3.精密度实验 取高、低值混合血清分装,并于-20 ℃避光冰冻保存。(1)批内精密度:一次性同时测定20次,批内不精密度( CV)以美国临床实验室修正法案(CLIA'88)允许总误差的1/4为标准;(2)日间精密度:每天2批,每批2个浓度,每个浓度检测2次,连续测定10 d,计算日间 CV,以CLIA'88允许总误差的1/3为标准。

4.线性评价 参考NCCLS EP6-A文件[ 5]对氧化酶法进行评价。取TBil为574.40 μmol/L的高值血清用盐水作1∶0、1∶1、1∶4、1∶8、1∶10、1∶15稀释,相应TBil浓度分别为574.40、287.20、143.60、71.80、57.44、38.29 μmol/L。将6个不同浓度随机排列测定,将测得值与设定值做直线回归方程并进行判断。

5.分析灵敏度 用生理盐水对已定值的混合血清作系列稀释。稀释比例为1、1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶12、1∶15。充分混匀每份血清,分装于安瓿(0.5 mL/支),充氮气后封口,置-20 ℃保存。血清TBil浓度分别为14.80、7.40、3.70、2.47、1.85、1.23、1.00 μmol/L。按照文献[ 6]方法,在连续10 d内,每天用校准品校准Dimension RxL 检测系统,进行质控品检测,确认结果在控后,检测系列稀释样本记录 A值。将各个低浓度TBil血清连续10 d的 A值计算均值( )和标准差( sA)。所有各个血清的 A值没有出现逐日下降的趋势,说明数据有效。

6.回收实验 取0.9 mL的低值样本加入0.1 mL高值样本,计算回收率。

7.干扰实验 参考CLSI EP7-A2文件[ 7]对氧化酶法进行评价。溶血干扰实验使用的15管血红蛋白(Hb)浓度分别为0、2.4、4.8、7.2、9.6 g/L,分别进行上机检测。Vit C和脂肪乳剂的干扰实验浓度与Hb相同配制。

8.比较实验 按NCCLS EP9-A2文件[ 8]对氧化酶法进行评价,检测50例不同TBil浓度的样本。对结果进行数据统计,去除离群点后,以改良J-G法作为比较方法,计算相关系数( r)、回归方程。

三、统计学方法

数据统计用SPSS13.0统计软件进行数据统计。

结果
一、精密度

TBil氧化酶法高、低值批内 CV分别为0.38%、0.78%,在CLIA'88要求的1/3允许总误差范围内;日间 CV分别为1.78%、2.73%,在CLIA'88要求的1/4允许总误差范围内。见 表1。

表1 TBil高、低值混合血清批内、批间精密度结果
二、线性范围

以氧化酶法为 Y轴,改良J-G法为 X轴。氧化酶法在574.40 μmol/L范围内线性良好。线性方程为 Y=0.994 X+2.57, r=0.999, r2=0.998。

三、分析灵敏度

当TBil浓度为1.23 μmol/L时,天间 CV为19.0%。因此,可以确认可报告的定量低限为1.23 μmol/L。见 表2。各个血清TBil浓度的 、 sA和 CV结果见 表3。

表2 TBil检测限统计数据
四、回收率

TBil氧化酶法平均回收率为101.2%,见 表3。

表3 TBil氧化酶法回收实验(μmol/L)
五、抗干扰性能

TBil氧化酶法及改良J-G法干扰试验结果见 表4~6。

表4 Hb对TBil测定干扰
表5 Vit C对TBil测定干扰
表6 脂肪乳剂对TBil测定干扰
六、比较实验

用TBil氧化酶法( Y)检测50份不同浓度的样本,结果与改良J-G法( X)检测结果进行比较。直线回归方程为 Y=1.105 X-1.11, r=0.998,差异无统计学意义( P>0.05)。

讨论

本研究根据NCCLS相关文件和CLIA'88要求,探讨氧化酶法的系统检测性能、系统误差和一致性。氧化酶法表现出良好的精密度、灵敏度和抗干扰性能,线性范围达574.40 μmol/L,而改良J-G法在Dimension RxL上的线性范围为428 μmol/L,明显低于氧化酶法。比较实验显示2种方法有着良好的相关性( r=0.998)。本研究表明Hb<4.8 g/L时对氧化酶法检测TBil无明显干扰,对改良J-G法有明显负干扰;脂肪乳剂在5%以下对2种方法均无明显干扰,但是随着脂肪乳剂浓度增加,对TBil检测呈明显正干扰;Vit C<500 mg/L对氧化酶法和改良J-G法基本无干扰,高浓度的Vit C对2种方法产生负干扰,这可能是Vit C的还原性所致。

Schwertner[ 9]首先报告空腹血清胆红素浓度与男性冠状动脉狭窄有着反比的关系。脂类的氧化和形成氧自由基是动脉斑块形成和粥样硬化的重要的原因,涉及冠心病(CAD)的病理学。因为胆红素具有抗氧化的性质,被认为可对动脉粥样硬化过程中起着预防的作用。实验和流行病的证据认为,胆红素是生理性的抗氧化剂,在抗动脉粥样硬化和CAD中起着预防作用。特别需注意的是血浆胆红素浓度和CAD死亡率间的反比关系。在参考区间的较高部分的血清胆红素浓度,有学者[ 10]认为会减少粥样硬化的危险,提供了抗CAD预防作用。相反,血清胆红素浓度在参考区间的较低处的可能与心肌缺血心脏病有关。建立胆红素检测低限对临床诊断具有重要意义。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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