引用本文
郭满盈, 王栋, 王伟明, 罗媛烨, 陈扬. 趋化因子CCL20及其受体CCR6在乳腺癌患者外周血中的表达及意义. 2011, 26(10): 683-685
GUO Manying, WANG Dong, WANG Weiming, LUO Yuanye, CHEN Yang. Expression of chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in peripheral blood from patients with breast cancer and its significance. Labratory Medicine, 2011, 26(10): 683-685  
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趋化因子CCL20及其受体CCR6在乳腺癌患者外周血中的表达及意义
郭满盈1, 王栋2, 王伟明3, 罗媛烨1, 陈扬3
1. 解放军第98医院检验科,浙江 湖州 313000
2. 第二军医大学解剖学教研室,上海 200433
3. 解放军第98医院院部,浙江 湖州 313000

通讯作者:陈扬,联系电话:0572-3269503。

作者简介:郭满盈,男,1970年生,硕士,主管技师,主要从事临床免疫检验工作。

基金:南京军区科技创新课题资助项目(09MA010);
摘要
目的

研究乳腺癌患者外周血中趋化因子CCL20及其受体CCR6的表达变化在乳腺癌发病机制中的作用。

方法

把乳腺癌患者分为2组,癌组织上有CCR6表达的为CCR6+组,癌组织上未见有CCR6表达的为CCR6-组。采用酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测乳腺癌患者及正常人血清中CCL20水平,同时用流式细胞仪分析外周血CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达。

结果

CCR6+组患者血清CCL20水平明显高于正常对照组和CCR6-组(P均<0.01),各组外周血CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达差异无统计学意义。

结论

CCR6+组患者血清CCL20水平升高可能在部分乳腺癌的发病过程中发挥作用。

关键词: CCL20; CCR6; 乳腺癌
中图分类号:Q503 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)10-0683-03
Expression of chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in peripheral blood from patients with breast cancer and its significance
GUO Manying1, WANG Dong2, WANG Weiming3, LUO Yuanye1, CHEN Yang3
1. Department of Clinical Laboratory,the 98th Hospital of People's Liberation Army, Zhejiang Huzhou 313000, China
2. Department of Anatomy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China
3. Hospital Department, the 98th Hospital of People's Liberation Army, Zhejiang Huzhou 313000, China
Abstract
Objective

To study the role of peripheral blood chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in the pathogenesis of breast cancer.

Methods

The patients with breast cancer were classified into 2 groups, according to the expression of CCR6 in breast cancer tissue. One was with positive CCR6 expression (CCR6+ patients), and another was without CCR6 expression (CCR6- patients). The serum levels of CCL20 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in patients with breast cancer and healthy controls. Meanwhile, the chemokine receptor CCR6 expression on peripheral blood CD3+ T-lymphocytes from patients and controls was analyzed by flow cytometry.

Results

The serum levels of CCL20 in CCR6+ patients were significantly higher than those in CCR6- patients and controls (P<0.01). There was no statistical difference in the expression of CCR6 on peripheral blood CD3+ T-lymphocytes among the 3 groups.

Conclusions

The increase of CCL20 in CCR6+ patients may play a role in pathogenesis of partial breast cancer.

Keyword: CCL20; CCR6; Breast cancer

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚未明了。有证据表明,多种趋化因子及其受体与乳腺癌的生长、浸润和转移有关。国外文献[ 1]报道,乳腺癌组织上有趋化因子受体CCR6的表达,且其表达与癌组织特定靶器官的定向转移有关,对此有学者也做了一些初步探讨[ 2]。我们采用酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测了乳腺癌患者血清中趋化因子CCL20水平,同时用流式细胞仪分析外周血CD3+T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR6的表达,试图探讨外周血中趋化因子CCL20及其受体CCR6的表达变化在乳腺癌发病机制中的作用。

材料和方法
一、研究对象

36例乳腺癌患者为解放军第98医院普通外科住院病例,均为女性,年龄35~60岁,所有病例术后均经病理学检查确诊为浸润性导管癌,均已发生淋巴结转移,其中乳腺癌组织有CCR6表达的15例,为CCR6+组,未发现有CCR6表达的21例,为CCR6-组(此检测结果已另文发表[ 2])。对照组是年龄为32~58岁的健康女性。所有研究对象近期均无急性炎症及糖尿病等慢性病史。

二、方法

1. 血清趋化因子CCL20的检测 空腹,肘静脉采血3 mL,3 000 r/min(离心半径15 cm)离心10 min,分离血清备用。抗凝血1 mL用于CCR6的检测。趋化因子CCL20检测试剂盒为美国RD公司产品,试验步骤严格按照试剂盒说明书进行。

2. 外周血CD3+T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR6的检测 采用全血双色荧光标记法。CCR6鼠抗人单克隆抗体为美国RD公司产品。异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗鼠IgG 及藻红蛋白(PE)标记的抗CD3抗体购自北京鼎国生物技术有限公司。主要步骤如下:按试验要求排列离心管,每个离心管中加100 μL全血,加10 μL工作浓度的CCR6单克隆抗体溶液,把反应管放置4 ℃冰箱,过夜,用洗液洗涤。把洗液加到离心管中,加满,混匀,离心除去上清,洗涤2次(洗去多余抗体),摇匀沉淀,加1.3 μL工作浓度FITC标记的羊抗鼠IgG和 10 μL PE标记的抗CD3抗体,放置4 ℃反应30 min,加红细胞裂解液3 μL,充分溶血,1 000 r/min(离心半径10 cm)离心2 min,弃上清,用洗液洗涤,离心2次,恢复体积至0.5 mL,加入固定液50 μL,用流式细胞仪收集淋巴细胞进行检测。CellQuest软件获取及分析数据并打印出二维点阵图,以荧光抗体染色阳性细胞百分率记录结果,试验同时用标准品做标准曲线以及空白对照、阴性对照及单一标记抗体对照。

三、统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行分析,所有检测数据以 ±s表示,组间比较采用 t检验。 P<0.05表示差异有统计学意义。

结果

血清CCL20水平及CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达,结果见 表1。 CCR6+组血清CCL20水平明显高于正常对照组和CCR6-组( P均<0.01),而正常对照组与CCR6-组间的血清CCL20水平差异无统计学意义( P>0.05)。各组外周血中CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达差异无统计学意义( P>0.05)。

表1 乳腺癌组及正常对照组外周血CCL20水平及CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达( ±s)
讨论

趋化因子是由多种细胞产生的一类对多种白细胞如中性粒细胞、单核细胞或淋巴细胞都具有明显趋化作用的细胞因子,可分为4类:CXC类、CC类、C类和CX3C类等,其生理功能是通过与相应受体结合后产生跨膜信号而实现的。根据结合配体的不同,趋化因子受体也可分为CXCR类、CCR类和CX3CR类等。趋化因子及其受体的生物学功能主要包括诱导靶细胞趋化性迁移、调控造血干细胞迁移及归巢、参与人类免疫缺陷病毒(HIV)对靶细胞的感染以及在肿瘤的生长和转移中发挥作用等。

趋化因子CCL20又称为巨噬细胞炎症蛋白-3α(MIP-3α),其惟一的受体是CCR6。CCR6属7次跨膜的孤儿受体,主要表达于记忆性T 细胞、未成熟树突状细胞、B 细胞及中性粒细胞上。CCL20/CCR6相互作用在控制B细胞分化、发育,介导未成熟树突状细胞及记忆性T 细胞向炎症部位的迁移中发挥关键作用。自从Muller 等[ 3]首次发现乳腺癌细胞系及癌组织有趋化因子受体CXCR4和CCR7表达以来,迄今已在乳腺癌组织细胞上发现多种趋化因子受体的表达,其转移的途径(经淋巴道或血道)及靶器官都与所表达的趋化因子受体种类有关。Andre1等[ 1]率先发现乳腺癌组织细胞上有CCR6的表达,且其表达与靶器官的定向转移有关。有学者也曾对乳腺癌组织上趋化因子受体的表达情况进行过研究,发现在乳腺癌组织上有CCR5、CCR6及CXCR4等趋化因子受体表达,且其表达情况与癌细胞是否发生转移有关[ 2, 4, 5]。

本研究对乳腺癌患者外周血中CCL20及CCR6的表达水平进行初步探讨后发现,乳腺癌患者外周血中CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达水平与正常人无差异,说明外周血中CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达水平可能在乳腺癌的发生和进展中作用较小或无关。由于CD3+T淋巴细胞表面还有其他多种趋化因子受体的表达,所以这方面的工作还有待进一步的深入。CCR6+乳腺癌患者血清CCL20水平明显高于正常对照者和CCR6-患者( P均<0.01),表明CCL20可能在部分乳腺癌的发病机制中存在作用。部分乳腺癌患者癌组织中有CCR6阳性表达,而外周血中对应配体水平增高,可能在“吸引”乳腺癌细胞从原发部位进入血液循环并转移至靶器官方面发挥作用。由于趋化因子及其受体作用网络及肿瘤转移机制的复杂性,所以相关工作还需进一步的试验探讨,本研究结果可能为乳腺癌发病机制的研究提供一些新线索。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Andre F, Cabioglu N, Assi H, et al. Expression of chemokine receptors predicts the site of metastatic relapse in patients with axillary node positive primary breast cancer[J]. Ann Oncol, 2006, 17(6): 945-951. [本文引用:2] [JCR: 7.384]
[2] 郭满盈, 罗媛烨, 陈扬, 等. 趋化因子受体CCR6及CCR7在乳腺癌组织上的表达及其意义[J]. 国际检验医学杂志, 2009, 30(1): 28-29. [本文引用:3]
[3] Muller A, Homey B, Soto H, et al. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis[J]. Nature, 2001, 410(6824): 50-56. [本文引用:1] [JCR: 38.597]
[4] 王栋, 郭满盈, 郭葆玉. 趋化因子受体5 在乳腺浸润性导管癌组织的表达及意义[J]. 第二军医大学学报, 2005, 26(6): 657-659. [本文引用:1]
[5] 郭满盈, 陈扬, 吴林松, 等. 乳腺癌组织趋化因子受体CXCR4的表达与意义[J]. 国际检验医学杂志, 2007, 28(10): 888-889. [本文引用:1]