引用本文
康懿, 刘华, 王蕾, 高锋. 血清κ/λ轻链比值及蛋白电泳在诊断多发性骨髓瘤中的临床应用. 2011, 26(10): 675-678
KANG Yi, LIU Hua, WANG Lei, GAO Feng. The clinical application of serum κ/λ light chain ratio and protein electrophoresis in the diagnosis of multiple myeloma. Labratory Medicine, 2011, 26(10): 675-678  
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血清κ/λ轻链比值及蛋白电泳在诊断多发性骨髓瘤中的临床应用
康懿1, 刘华1, 王蕾2, 高锋1
1. 上海交通大学附属第六人民医院检验科 ,上海 200233
2. 上海中医药大学附属龙华医院检验科,上海 200032

作者简介:康懿,女,1974年生,学士,主管技师,主要从事免疫学方面工作。

摘要
目的

探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清轻链(sLC)κ/λ比值及血清蛋白电泳(SPE)在MM诊断中的临床价值。

方法

采用速率散射免疫比浊法测定282例MM患者及521例健康对照人群sLC水平并计算κ/λ比值,同时做SPE和免疫固定电泳(IFE)。以临床已确诊为MM的患者分型结果为标准,评价sLC比值联合SPE检测对MM诊断的敏感性和特异性。

结果

282例MM患者中145例为IgG型(IgGκ型83例、IgGλ型62例),73例为IgA型(IgAκ型34例、IgAλ型39例),19例为IgM型(IgMκ型14例、IgMλ型5例),45例为轻链型(游离κ型轻链16例、游离λ型轻链29例)。除IgMλ型MM外,其余各类型MM患者sLCκ/λ比值与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。以临床确诊为MM的患者分型结果为标准,单独以sLCκ/λ比值诊断MM的敏感性为61.0%、特异性为95.0%、阳性预测值为90.9%、阴性预测值为89.5%;sLCκ/λ比值联合SPE检测的敏感性为98.0%、特异性为86%、阳性预测值为68.8%、阴性预测值为99.3%。

结论

sLC及SPE联合检测对MM的诊断具有较高的敏感性和特异性,且检测方法简便、快速,可在各临床实验室推广应用。

关键词: 免疫球蛋白; 游离轻链; 总轻链; 多发性骨髓瘤
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)10-0675-04
The clinical application of serum κ/λ light chain ratio and protein electrophoresis in the diagnosis of multiple myeloma
KANG Yi1, LIU Hua1, WANG Lei2, GAO Feng1
1. Department of Clinical Laboratory,the Sixth People's Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200233,China
2. Department of Clinical Laboratory,Long Hua Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200032,China
Abstract
Objective

To investigate the clinical application of serum light chain(sLC) κ/λ ratio and serum protein electrophoresis(SPE) in the diagnosis of multiple myeloma (MM).

Methods

A total of 282 MM patients and 521 healthy controls were enrolled in this study. The sLC levels were measured by immune rate nephelometry, and the κ/λ ratios were calculated. The SPE and immunofixation electrophoresis(IFE) were also performed. MM patients were defined according to clinical diagnosis. The sensitivity and specifity of combined use of sLC ratio and SPE were evaluated.

Results

Among the 282 MM patients, 145 were IgG MM(83 IgGκ MM and 62 IgGλ MM), 73 were IgA MM(34 IgAκ MM and 39 IgAλ MM),19 were IgM MM(14 IgMκ MM and 5 IgMλ MM),and 45 were light chain MM(16 free light chain κ MM and 29 free light chain λ MM). The sLC κ/λ ratios were significantly different between all subgroups of MM patients and controls,except IgMλ MM patients (P<0.05,P<0.01). The sensitivities, specificities, positive predictive values and negative predictive values were 61.0%,95.0%,90.9% and 89.5% for sLC κ/λ ratio alone,and 98.0%,86.0%,68.8% and 99.3% for combined use of sLC κ/λ ratio and SPE.

Conclusions

The combined determination of sLC κ/λ ratio and SPE shows high sensitivity and specificity in the diagnosis of MM and is simple, rapid and worthy to be widely applied.

Keyword: Immunoglobin; Free light chain; Total light chain; Multiple myeloma

正常人的免疫球蛋白(Ig)是由一对轻链及一对重链组成,κ轻链约占65%,λ轻链约占35%,二者比例约为2∶1。肿瘤浆细胞会过量产生一种单克隆Ig轻链,同时抑制另一种轻链的生成。因此血清轻链(sLC)κ/λ比值会明显异常。sLCκ/λ比值异常可提示MM的克隆性增殖[ 1, 2]。近几年来,随着一种高敏感性定量测定sLC的技术——速率散射免疫比浊法的应用,能较精确地测定血清中sLC的水平。

据Piehler等[ 3]报道,在综合性医院的1 067份患者样本中,当SPE检测出单克隆Ig条带或临床症状提示为MM时,可用血清游离轻链(sFLC)做为蛋白电泳(SPE)的补充检测。研究发现联合sFLC和SPE检测,能发现几乎所有临床符合的单克隆Ig增多症。以此得出结论:综合应用sFLC和SPE检测和临床资料,可有效地对MM进行诊断或仅在血清学检测的基础上排除MM[ 3]。目前大多数实验室因检测手段的局限,对sLC的测定仍然处于测定总轻链(即结合轻链+游离轻链)的水平,无法测定真正意义上的游离轻链。而且以往的研究多为单单探讨sLC比值在MM诊断中的意义,很少结合SPE一起探讨。那么sLC联合SPE检测对MM的诊断有意义吗?为此,我们对初诊MM患者的sLCκ/λ比值及同期检测的SPE和IFE结果进行了回顾性分析。以临床确诊为MM的患者IFE分型结果为标准,评价sLC联合SPE检测的敏感性和特异性,探讨两者联合检测在MM诊断中的临床价值。

材料和方法
一、对象

1. MM组 选择2004年12月至2009年12月上海交通大学附属第六人民医院门诊及住院的282例MM初诊患者,男176例,女106例,年龄52~76岁。所有患者均按《血液学诊断标准及疗效标准》(第2版)确诊[ 4],无合并其他肿瘤。

2. 对照组 521例对照者均来自于上海交通大学附属第六人民医院同期门诊患者,男251例,女270例,年龄40~77岁。临床诊断已排除MM。

二、方法

1. sLC测定 采用速率散射比浊法检测IgG、IgA、IgM及轻链κ、λ。使用的仪器和试剂为BNII全自动特种蛋白分析仪(德国西门子公司)及配套试剂盒。轻链κ配套试剂批号为122160C;轻链λ配套试剂批号为122269A。

2. SPE及IFE SPE直接使用Sibia HYDRASYS全自动电泳仪,IFE采用Sibia HYDRASYS全自动电泳仪及其配套试剂盒。

三、κ/λ比值的阳性判断值

以高于或低于对照人群的 ±2 s作为本研究的临床异常界定值。

四、统计学方法

采用SAS8.0 统计分析软件。计量资料用均值±标准误( ±sEM)表示,2组间比较采用非参数统计法, P<0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、MM患者分型

282例MM患者中145例(51%)为IgG型,73例(26%)为IgA型,19例(7%)为IgM型,45例(16%)为轻链型,见 图1。

图1 MM患者分型结果分布图

二、MM患者组及对照组sLCκ/λ比值结果

除了IgM型λMM患者外,其余各类型MM患者sLCκ/λ比值与对照组比较,差异均有统计学意义 ( P<0.05、 P<0.01),见 表1。

表1 MM组各型及对照组血清中κ、λ、Ig含量及κ/λ比值( ±sEM)
三、sLCκ/λ比值及SPE诊断MM的敏感性和特异性

对照者的sLCκ/λ比值为1.79±0.29,以κ/λ比值<1.21或κ/λ比值>2.37作为判断标准进行敏感性及特异性分析。以临床确诊为MM的患者的IFE分型结果为标准,单以sLCκ/λ比值诊断MM的敏感性为61.0%、特异性为95.0%、阳性预测值为90.9%、阴性预测值为89.5%;sLC联合SPE检测的敏感性为98.0%、特异性为86.0%、阳性预测值为68.8%、阴性预测值为99.3%。

讨论

MM是一种浆细胞的恶性肿瘤,能侵犯全身各组织,临床表现为多系统和多样化,主要以贫血、骨骼损害和肾脏病变为主。由于在病程早期特征性不强,患者往往因各种骨痛、病理性骨折或肾功能改变而到骨科、肾病科就诊,常导致早期的误诊、漏诊。

本研究采用速率散射比浊法检测282例MM患者血清中的Ig及sLC。结果显示IgG型所占比例最高(51%),其次为IgA型(26%),轻链型(16%),最少的为IgM型(7%)。除IgMλ型MM患者外,其余各组MM的sLCκ/λ比值与对照组比较,差异均有统计学意义 ( P<0.05、 P< 0.01)。

然而,单以sLCκ/λ比值来诊断MM可能存在着一定局限性。本研究结果显示IgMλ型MM患者组的sLCκ/λ比值与对照组比较差异无统计学意义。本研究进一步以临床确诊为MM的患者的IFE分型结果为标准,判断单以sLCκ/λ比值和sLCκ/λ比值联合SPE诊断MM的敏感性和特异性。结果显示,单以sLCκ/λ比值诊断MM的敏感性为61.0%、特异性为95.0%;阳性预测值为90.9%、阴性预测值为89.5%;sLC联合SPE检测的敏感性为98.0%、特异性为86.0%、阳性预测值为68.8%、阴性预测值为99.3%。可见,2种方法联合检测可以大大提高诊断的敏感性,并完全可以达到临床血清学检测的要求。

结果显示,部分IgMλ型MM的3种免疫球蛋白都增高,而非IgM单克隆增高。这有可能与19S的IgM具有冷球蛋白的特性有关。因大部分冷球蛋白在溶液中可呈混浊甚至沉淀,但不具特异性,可能造成IgG、IgA测定结果也增高。有文献提出如果能将血清放冰箱数天,再离心去除冷球蛋白后,再测定Ig,可能可测得更高浓度的IgM,而IgG、IgA则可能正常或降低[ 5]。IgMλ型MM患者的sLCκ/λ比值与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。一方面有可能是该组病例数较少;另一方面,也可能是由于冷球蛋白的存在导致κ和λ测定值的不准确。颜宇飞等[ 6]分别使用B-羟基乙醇、fluidil试剂处理样本后,使IgM分子上的二硫键、氢键被打开,使巨分子多聚体IgM成为单体后再进行IFE,则原先增高的κ轻链值明显降低,不再显示增强条带。说明是冷球蛋白造成了κ轻链的增高。关于IgM型MM有待于在今后的研究中改进实验方法并积累数据进行相关的探讨。

轻链型多发性骨髓瘤(LCMM)的骨髓瘤细胞产生重链的能力被选择性抑制,只能合成轻链,不能合成完整的Ig,导致IgG、IgA、IgM 均降低,尿中κ或λ轻链增高。以往对LCMM的诊断需要进行本周氏蛋白即尿游离轻链(uFLC)的检测。但由于uFLC浓度高度依赖于肾功能的好坏,而且LCMM较其他类型MM更容易造成肾功能损害。因此,sLC较uFLC浓度可能是个更好的指标。Bradwell等[ 7]分析224例确诊的LCMM患者,诊断时所有患者的sLC浓度和κ/λ比值均异常。本研究结果显示LCMM的IgG、IgA、IgM均降低( P<0.01),这与有关文献报告相吻合;LCMM的sLCκ/λ比值与对照组比较,差异有统计学意义( P<0.01)。说明sLCκ/λ比值在LCMM诊断中是一个很有价值的指标。

在用sLC联合SPE诊断MM中,有8例IFE阳性的MM患者未被检出。其中7例是LCMM,没有M峰,且sLCκ/λ比值正常。因此,对于LCMM的诊断,SPE有一定的局限性,而sLCκ/λ虽然是个很好的指标,但并不能完全取代IFE的检测,同时也需要结合uFLC的结果作全面分析。在8例中另外1例是未分泌型MM,也无M峰。大部分不分泌型多发性骨髓瘤(NSMM)并不是真正的“未分泌型”,而是由于分泌量少,而IFE、SPE等方法敏感性差,未能检测到单克隆Ig。Drayson 等[ 8]检测了28例NSMM患者sLC水平,发现19例患者sFLCκ/λ比值异常。本研究由于病例太少,关于此类患者今后会继续关注。

目前,骨髓涂片和活检是形态学上诊断MM的主要手段之一。血清学检测包括免疫球蛋白(Ig)定量检测、血清蛋白电泳(SPE)和血清免疫固定电泳(IFE)。Ig定量在MM中的意义在于确定M蛋白所属的Ig类别及数量;但有部分MM患者Ig的量在正常范围之内,仅2种轻链比例失调,所以单凭Ig定量不能很好地提示MM。SPE操作较为简便,可以批量检测。一般情况下,能够直观地提示M峰;但SPE对分泌轻链型MM的诊断有局限性。IFE是一项能对MM进行免疫分型的检测手段,但操作繁琐、成本较高、只能小批量测定,其操作和结果的判断都需要有经验的专门人员,而且无法定量。因此,无法在一些中、小型实验室大规模推广应用。随着免疫比浊仪在临床上的大规模应用,目前已能较精确地测定血清中的sLC水平。由于采用全自动仪器和配套试剂,故该方法具有操作简便、快速、可定量、便于质控等优点。

综上所述,IFE是MM诊断中较权威的血清学指标,但因各种原因开展受到限制。SPE和sLC的检测简便、快速,且两者联合检测可显著提高诊断的敏感性、特异性,在MM的诊断中有较高的临床应用价值。当然,对MM的确诊和分型仍需依据骨髓细胞形态学及IFE检测,并结合临床症状进行全面分析。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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