引用本文
冯厚梅, 孙德华, 郑磊, 裘宇容, 曾方银, 李强. Sysmex CA 7000全自动凝血仪性能评价. 2011, 26(1): 58-62
  
Permissions
Copyright©2011, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部版权所有
Sysmex CA 7000全自动凝血仪性能评价
冯厚梅, 孙德华, 郑磊, 裘宇容, 曾方银, 李强
南方医科大学南方医院检验科,广东 广州 510515

作者简介:冯厚梅,女,1983年生,医师,主要从事临床血凝检验及检验与临床沟通工作。

通讯作者:郑磊,联系电话:020-61642147。

摘要
目的

对Sysmex CA 7000全自动凝血仪进行性能评价。

方法

对Sysmex CA 7000凝血仪上的准确性、不精密度、线性、检测限、携带污染率进行评价。检测189名健康体检者的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)并建立95%参考区间。

结果

准确性试验测定结果在厂家给定范围或标定靶值的±8%范围内,仪器的准确性良好。批内和天间最大变异系数( CV)为6.05%,符合厂家要求( CV<10%),仪器的不精密度良好。线性验证试验结果显示FIB相关系数( r)为0.999 1、FⅧ∶C为0.999 5、AT∶A为0.998 5、D-二聚体(D-D)为0.996 7,均符合厂家要求( r≥0.975),仪器线性范围良好。检测限最大 CV为10.45%,符合厂家要求( CV<20%),对低值样本有较好的检测能力。样本及试剂携带污染率最高 CV为 5.44%,均符合厂家要求(≤10%)。PT、APTT、TT和FIB的95%参考区间分别为8.0~14.2 s、25.1~40.8 s、15.1~19.7 s、1.7~4.0 g/L。

结论

Sysmex CA7000凝血仪具有精密度良好、准确性可靠、检测范围宽、对低值样本有良好的检测结果、样本间及试剂间携带污染率低的特点,适合临床应用。

关键词: CA7000全自动凝血仪; 性能评价; 参考范围
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)01-0058-05
Abstract
Keyword:
引言

Sysmex CA7000全自动凝血仪是集凝固法、发色底物法、免疫法等检测功能于一身的全自动凝血仪。为保证检测结果的准确性以及与临床的相符性, 我们在Sysmex CA7000凝血仪上进行了准确性试验、不精密度试验、线性(可报告范围)验证试验、检测限测定、携带污染率试验及建立95%参考区间, 对其进行较全面的性能评价。

材料和方法
一、对象

随机选择南方医科大学南方医院健康体检者189名, 男48名, 女141名, 年龄22~58岁。

二、仪器

日本Sysmex生产的CA7000全自动凝血仪。

三、试剂

所有试剂均为Dade Behring公司配套试剂。Standard Human Plasma批号为503123、Control Plasma P批号为509902、血浆凝血酶原时间(PT)试剂批号为545195A、活化部分凝血活酶时间(APTT)试剂批号为537424、凝血酶时间(TT)试剂批号为515499、纤维蛋白原(FIB)试剂批号为537904。

四、标本

正常和异常质控血浆为Dade Citrol 1、Dade Citrol 2, 进行准确性试验的血浆为Dade Citrol 1、Dade Citrol 2、Standard Human Plasma、DD-Standard、Control Plasma P, 不精密度试验血浆为Dade Citrol 1、Dade Citrol 2、Control Plasma P, 线性(可报告范围)验证试验血浆为高值血浆样本, 检验限样本为接近0水平血浆样本, 携带污染率试验血浆为高值样本、低值样本、异常APTT样本、时间异常PT样本、异常TT正常混合血浆样本, 参考范围建立样本为健康体检者样本。血浆样本处理用0.109 mmol/L枸橼酸钠1∶ 9抗凝, 3 000 r/min(离心半径10 cm)离心10 min, 当贫血和红细胞增多症红细胞压积明显有变化时, 即红细胞压积< 20%或> 50%时, 抗凝剂和血比例应按下列公式调整:抗凝剂用量(L)=0.001 85(L)× [(100-红细胞压积(HCT)]。

五、方法

试验方法多按照Sysmex仪器评估文件Evaluation Protocal for CA Line标准执行, 准确性试验结合美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) EP5-A2[1]的要求, 天间不精密度(CV)要求在CLIA'88标定的范围的1/3内。

1. 准确性试验

使用2个水平的定值质控品(Citrol 1、Citrol 2)验证PT、APTT水平, TT无高值质控及标准品, 验证正常范围水平, 测定结果必须符合厂家提供的定值范围。使用定值标准品(不同于定标时批号)检测FIB、FⅧ 、AT∶ A、D-二聚体(D-D), 用Standard Human Plasma检测FIB、FⅧ 、AT∶ A正常水平, Control Plasma P检测FIB、FⅧ 、AT∶ A异常水平, 用DD-Standard检测D-D水平, 测定结果必须在标定靶值要求的± 8%范围内。

2. 不精密度试验

(1)批内变异系数(CV):取2个水平的质控血浆, 连续重复测定10次以上, 测定结果的CV必须在厂家文件给定的标定靶值要求的范围内(PT为2.00%、APTT为2.00%、TT为10.00%、FIB为4.00%、FⅧ ∶ C为5.00%、AT∶ A为5.00%、D-D为10.00%); (2)天间CV:选取正常参考范围内(Dade Citrol 1)和异常(质控血浆Control P)血浆各1份, 每天测定2次, 连续测定5 d, 每次测定都同时测定2个水平的质控, 测定结果的CV必须在厂家文件给定的标定靶值要求的范围内(PT为5.00%、APTT为5.00%、TT为10.00%、FIB为10.00%、FⅧ ∶ C为10.00%、AT∶ A为10.00%、D-D为10.00%)。

3. 线性(可报告范围)

选取1份接近预期上限的高浓度血浆, 分别按100%、80%、60%、40%、20%和10%的比例进行稀释, 每个稀释度重复测定2次, 将实测值与理论值作比较(偏离应小于10%)。线性范围须符合厂家文件要求[相关系数(r)> 97.5%, 斜率(a)在1± 0.05范围内]。

4. 检测限测定

连续测定0水平标准品或接近0水平血浆10次, 记录结果, 计算CV值, 要求CV< 20%。

5. 携带污染率试验

(1)高值样本对低值样本的污染:将低值样本置样本架1和3位置, 高值样本置于2位置, 每个样本分别测定3次, 记录结果(N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6), 计算 k1=[N4-Mean(N1, N2, N3)]/Mean(N1, N2, N3); (2)低值样本对高值样本的污染:将高值样本置样本架1和3位置, 低值样本置于2位置, 每个样本分别测定3次, 记录结果(A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6), 计算 k2=[A4-Mean(A1, A2, A3)]/Mean(A1, A2, A3); (3)PT试剂的污染:将异常APTT样本(选择用肝素治疗的患者血浆)置样本架1和3位置, 异常PT样本(选择用口服抗凝剂治疗的患者血浆)置于2位置, 每个样本分别测定3次, 记录结果(APTT1、APTT2、APTT3、PT1、PT2、PT3、APTT4、APTT5、APTT6), 计算 k1=[APTT4-Mean(APTT1, APTT2, APTT3)]/Mean(APTT1, APTT2, APTT3), 得出PT试剂对APTT检测结果的影响; (4)FIB试剂的污染:将异常APTT样本(选择用肝素治疗的患者血浆)置样本架1和3位置, 将正常混合血浆样本置于2位置, 每个样本分别测定3次, 记录结果(TT1、TT2、TT3、FIB1、FIB2、FIB3、TT4、TT5、TT6), 计算 k2=[TT4-Mean(TT1, TT2, TT3)]/Mean(TT1, TT2, TT3), 得出FIB试剂对TT检测的影响。PT、APTT、FIB、FⅧ 、AT∶ A结果CV值均应符合仪器标定范围内, 符合厂家要求(CV≤ 10%)。

6. 建立95%参考区间

对189名健康体检者进行凝血4项(PT、APTT、TT、FIB)检查, 对数据进行分析, 计算其 ± s, 建立95%参考区间。

六、统计学方法

按各项试验方案对数据进行统计学处理, 要求符合仪器厂家及相关文件的要求。

结果
一、准确性试验

PT、APTT、TT测定结果及FIB、FⅧ 、AT∶ A的异常水平测定结果均在厂家给定的范围内, FIB、FⅧ 、AT∶ A、D-D标准值测得的结果均在标定靶值的± 8%范围内, 均符合准确性实验要求。结果见表1、表2。

表1 PT、APTT、TT准确性试验结果
表2 FIB、FⅧ ∶ C、AT∶ A、D-D准确性试验结果
二、不精密度试验

批内不精密度及天间不精密度试验所测得的各组结果均在厂家文件给定的标定靶值要求的范围内, 仪器的批内不精密度及天间不精密度良好。见表3。

表3 不精密度批内和天间试验结果
三、线性验证试验

线性验证试验结果显示各指标相关系数(r)≥ 0.975, 且斜率(a)在1± 0.05范围内, 仪器线性范围良好。具体结果见表4。

表4 线性验证试验结果
四、检测限测定

结果显示最大CV为10.45%, 在厂家给定20%范围内, 仪器对低值样本也有很好的检测。结果见表5。

表5 检测限试验结果
五、污染率试验

样本携带污染率试验(高值样木对低值样本的污染、低值样本对高值样本的污染)及试剂携带污染率试验(PT试剂携带污染率、FIB试剂携带污染率)结果均在仪器标定范围内, 符合厂家要求(≤ 10%)。说明仪器携带污染率符合要求, 样本及试剂携带污染不影响检测结果。结果见表6、表7。

表6 样本携带试验率试验结果(%)
表7 试剂携带污染率试验结果(%)
六、建立95%参考区间

对189名健康体检者进行PT、APTT、TT及FIB检测。同一地区凝血4项对不同性别及不同年龄段使用同一参考区间。95%参考区间见表8。

表8 PT、APTT、TT、FIB的95%参考区间
讨论

随着止凝血项目在临床的逐渐推广, 临床上对凝血4项及其余止凝血检测的要求越来越高, 运用范围也越来越广泛。如术前检查、止血与血栓疾病的诊断和治疗、溶栓治疗的监测、心脏介入及手术治疗后抗凝治疗的监测、肝脏功能的诊断及监测、肺栓塞及弥散性血管内凝血(DIC)等疾病的判断等。这也给止血血栓实验室提出了更高的要求, 配合临床给出快速、准确的报告。因此国内针对多种凝血仪进行了性能评价[2, 3]。Sysmex CA7000全自动凝血仪检测速度达500测试/h, 集凝固法、发色底物法、免疫法等检测方法于一身。通过以上试验对Sysmex CA7000凝血仪性能的全面评估, 说明Sysmex CA7000凝血仪具有良好重复性、精密度、准确性, 检测范围宽且携带污染率低的特点, 检测性能良好, 适合临床运用。

在准确性试验中, 由于凝血试剂的溯源问题, 目前没有标准化的溯源品, 准确性试验暂时使用不同于定标批号的定值标准品:TT无高值水平质控, 仅进行一个水平的检测, 由于D-D异常质控品较难获得, 使用D-D标准品作为标准值[3]。仪器优良的批内及批间不精密度, 对及时复查的样本结果比较有保证。Sesmex CA7000凝血仪较宽的检测限及良好的线性范围, 也保证了临床上如对重型血友病患者Ⅷ 因子的检测要求, 要求检测限在1%以下, Sysmex CA7000凝血仪完全可以满足此项检测。对于D-D的检测, 高于2 000 μ g/L的样本应稀释后检测, 而低于25 μ g/L则低于线性范围, 数值意义不大。由于D-D主要是一个阴性排除指标, 因此并不影响临床判断。携带污染率低, 在检测样本时不必考虑高低值样本及多项检测的相互影响, 从另一角度也保证了实验室结果的准确性。

各实验室均应根据自己实验条件的不同建立自己实验室的参考值。性别及年龄差异对凝血参考值无显著影响, 可使用同一参考范围。本研究随机抽取189名年龄在2258岁的健康查体人员静脉血行凝血4项检查, 对数据进行分析, 得到95%可信区间为参考区间。各实验室的参考范围存在一定差异, 与所用仪器、方法、试剂、检测条件等不同有关。为使本实验室的参考范围尽量符合所在区域人群的状况, 可加大样本量以减少抽样误差; 其次应进一步规范抽血及送检流程, 不能排除采血及送血过程中对凝血检测的影响。查体的样本和患者的样本均经过医院的送检流程, 凝血检测的检验前质量控制尤为重要, 体现在抽血量、是否顺利、血HCT比值、送检时间等方面, 均会影响检测结果。也因此呼吁重视检验前质量控制[4], 加强对相关人员的培训, 尽量减少以上因素造成的结果影响。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Evaluation of precision performance of quantitative measurement methds; approved guideline[S]. EP5-A2, NCCLS, 2004. [本文引用:1]
[2] 黄彬, 陈茶, 钟武平. Sysmex CA 6000全自动血凝仪实验性能评价[J]. 临床检验杂志, 2003, 21(21): 82-83. [本文引用:1]
[3] 唐宁, 曹文静, 夏汛生, 等. ACL TOP全自动血凝分析系统的性能评价[J]. 中国医疗设备, 2007, 22(2): 48-51. [本文引用:2]
[4] 贾劲, 左成华, 郭曼英. 分析前质控在止凝血检查中的重要性探讨[J]. 现代检验医学杂志, 2007, 22(6): 113-115. [本文引用:1]