引用本文
黄庆梅, 覃锦耀. CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血中的水平变化 [J].检验医学, 2015,25(9): 705-707
HUANG Qingmei, QIN Jinyao. Study on the levels of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of patients with primary hepatocellular carcinoma [J]. Labratory Medicine, 2015,25(9): 705-707  
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CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血中的水平变化
黄庆梅1, 覃锦耀2
1. 广西横县人民医院检验科,广西 南宁 530300
2.广西医科大学第一附属医院临床医学实验部,广西 南宁 530021

作者简介:黄庆梅,女,1969年生,学士,主管技师,主要从事免疫学及分子生物学研究。

摘要
目的 研究原发性肝癌(HCC)患者外周血中CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞的表达及意义。方法 采用流式细胞仪测定93例HCC患者和24名健康人外周血中的CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞水平。结果 HCC患者外周血中的CD4+CD25+细胞[(14.39±4.58)%]和CD8+CD28-调节性T细胞[(24.05±5.64)%]表达均显著高于对照组[(8.37±1.73)%、(15.93±4.84)%, P<0.05];CD8+CD28- 调节性T细胞与HCC的分期呈正相关( r=0.463, P<0.001)。结论 CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞在HCC患者外周血中呈高表达,且CD8+CD28-调节性T细胞与HCC的病情及预后相关。
关键词: CD8+CD28-; CD4+CD25+; 调节性T细胞; 原发性肝癌
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)09-0705-03
Study on the levels of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of patients with primary hepatocellular carcinoma
HUANG Qingmei1, QIN Jinyao2
1.Department of Clinical Laboratory ,the People's Hospital of Hengxian, Guangxi Nanning 530300,China
2.Department of Clinical Laboratory, the First Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Nanning 530021,China
Abstract
Objective To study the expression and significance of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of patients with primary hepatocellular carcinoma (HCC).Methods Flow cytometry was used to investigate the levels of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of 93 patients with HCC and 24 healthy controls.Results The percentages of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of patients with HCC were (14.39±4.58)% and (24.05±5.64)%,respectively. They were significantly higher than those of controls [(8.37±1.73) %,(15.93±4.84)%, P<0.05]. The levels of CD8+CD28- regulatory T cell were positively correlated with HCC stages( r=0.463, P<0.001).Conclusions The levels of CD4+CD25+ cell and CD8+CD28- regulatory T cell in the peripheral blood of patients with HCC show high expression. CD8+CD28- regulatory T cell may be considered as reliable marker in the prognosis of HCC.
Keyword: CD8+CD28-; CD4+CD25+; Regulatory T cell; Primary hepatocellular carcinoma

肿瘤的形成与机体免疫内环境的改变及肿瘤细胞的免疫逃逸能力增强有关, 而CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞是一类具有免疫负调控功能的T细胞亚群。本研究通过测定原发性肝癌(HCC)患者外周血中CD4+CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞的水平探讨其与HCC的关系。

材料和方法
一、研究对象

93例HCC患者为2008年3月至2009年3月来横县人民医院就诊患者, 男72例, 女21例, 平均年龄(46.6± 28.1)岁, 根据国际抗癌联盟(UICC)[1]分期标准, Ⅰ 期患者31例, Ⅱ 期患者19例, Ⅲ 期患者27例, Ⅳ 期患者16例; 24名正常对照者均为健康体检中心志愿者, 男17名, 女7名, 平均年龄(44.9± 23.5)岁, 均无任何急、慢性疾病史。

二、试剂和仪器

抗CD4-藻红蛋白(PE)、抗CD25-异硫氰酸荧光素(FITC)、抗CD8-PE、抗CD28-FITC、IgG1-FITC、IgG1-PE (美国Beckman-Coulter公司); Coulter Epics XL 流式细胞仪(美国Beckman-Coulter公司); 溶血仪(美国Beckman-Coulter 公司)。

三、外周血淋巴细胞亚群的检测

取1 mL静脉血, 用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝, 各吸100 μ L全血于4支测定管中, 第1管加入IgG1-FITC、IgG1-PE; 第2管加入CD4-PE、CD25-FICT; 第3管加入IgG1-FITC、CD8-PE; 第4管加入CD28-FITC、CD8-PE, 每支测定管所加每种单克隆抗体量均为10 μ L。混匀试剂和抗凝血, 在室温避光孵育20 min后用溶血仪溶解红细胞。测定CD4+CD25+时, 利用侧向散射光(SS)和前向散射光(FS)选取淋巴细胞群(设门), 以IgG1-FITC/ IgG1-PE作为同型对照, 测定CD4+CD25+双阳性淋巴细胞的百分比。测定CD8+CD28-时, 也利用SS 和FS 选取淋巴细胞群, 再以CD8+淋巴细胞设门(二级设门), 选取CD8+淋巴细胞群, 以IgG1-FITC/CD8-PE 为同型对照, 测定CD8+淋巴细胞上CD28+和CD28-的百分比。数据经Cell Quest软件获取和分析, 每个样本每次检测1× 104个细胞。

四、统计学方法

全部数据用SPSS 13.0软件进行处理。计量资料采用 x̅± s表示。两组间比较采用两样本均数的t检验, T细胞数量与HCC分期相关性分析采用Spearman等级相关分析。P< 0.05为差异有统计学意义。

结 果

与健康对照组比较, HCC患者组外周血中的CD4+CD25+细胞和CD8+CD28- 调节性T细胞水平均显著升高, 差异有统计学意义(P< 0.05), 且CD8+CD28-调节性T细胞与HCC的分期呈正相关(r=0.463, P< 0.001), 疾病越严重, CD8+CD28-调节性T细胞水平越高。而CD4+CD25+细胞与疾病的严重程度无相关性(r=0.219, P> 0.05)。见表1和图1、2。

表1 2组外周血中CD8+CD28-调节性T细胞及CD4+CD25+细胞测定结果 (%)

图1 HCC患者CD4+CD25+细胞流式细胞仪检测图

图2 HCC患者CD8+CD28-细胞流式细胞仪检测图

讨 论

调节性T细胞作为一类T细胞亚群近年来引起医学界的广泛关注。该类细胞具有免疫负调控功能, 通过细胞直接接触和分泌调节性细胞因子发挥抑制效应, 从而逃避自身免疫反应[2]。清除具有免疫抑制作用的调节性T细胞会引起各种严重的自身免疫反应[3], 但调节性T细胞也会使少量的恶性转化细胞逃逸免疫监视和免疫防御, 从而导致肿瘤的发生、发展[4]。有研究发现, 肿瘤患者外周血中的CD4+ CD25+细胞明显增多(如食管癌和胃癌), 而且CD4+ CD25+细胞水平越高预后越差[5]。而CD8+CD28- T细胞是近年来证实的另一种重要的调节性T细胞, 这种T细胞在肿瘤患者及慢性病毒感染患者的外周血中也大量增多, 体内及体外实验均证实具有较强的免疫抑制作用, 抑制体内产生保护性抗体[6]。

本实验研究HCC患者与CD4+ CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞水平的关系。研究发现HCC患者中的CD4+ CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞百分率均比健康对照组人群明显升高, 提示HCC患者中存在的CD4+ CD25+细胞和CD8+CD28- 调节性T细胞具有抑制自身免疫监视和免疫防御消灭少量恶性转化细胞的免疫功能, 从而导致肿瘤的发生、发展。本研究中CD8+CD28-调节性T细胞在HCC患者外周血中的数量与患者病情呈正相关, 提示CD8+CD28-调节性T细胞与患者的预后呈负相关, CD8+CD28-调节性T细胞水平越高预后越差, 这与国外的研究结果相一致[7]。而HCC患者外周血单个核细胞中的CD4+ CD25+细胞与HCC的程度并无明显相关性, 这与国外的一些研究不一致。分析其原因可能是:FoxP3是自然调节性T细胞分化和功能的重要分子[8], 是界定自然调节性T细胞的关键标志, 本工作未测定CD4+CD25+FoxP3细胞, 因而不能真正反映自然调节性T细胞的数量(这也是本研究的不足之处, 有待在后续的研究中改进); 此外, CD4+ CD25+及CD8+CD28-这2种细胞在免疫耐受中的作用机制可能不同, 从而导致其作用部位及效应有差异。

从本研究结果初步可以得出以下结论:CD4+ CD25+细胞和CD8+CD28-调节性T细胞在HCC的发生和发展中起一定作用。探讨CD4+ CD25+细胞及CD8+CD28-调节性T细胞生物学特性及作用有利于进行有效的免疫调控, 同时在HCC的防治方面具有重要的学术意义和实际应用价值。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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[6] 刘玉兰, 肖文斌, 陈国栋, 等. 近交系大鼠肝移植自发免疫耐受模型的建立及其CD8+CD28- T细胞的作用[J]. 中华肝胆外科杂志, 2005, 11(7): 481-484. [本文引用:1]
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