引用本文
沙瑶, 石凌波, 康红, 孙宏华, 谢进进, 胡远明, 王露霞, 史慧群. 自建和配套生化检测系统血清酶测定结果的偏差评估和可比性分析[J].检验医学, 2015,25(9): 697-700
SHA Yao, SHI Lingbo, KANG Hong, SUN Honghua, XIE Jinjin, HU Yuanming, WANG Luxia, SHI Huiqun. The comparability study and the bias evaluation on the result of serum enzymes with self-developed and matching biochemical detecting systems[J]. Labratory Medicine, 2015,25(9): 697-700  
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自建和配套生化检测系统血清酶测定结果的偏差评估和可比性分析
沙瑶1, 石凌波1, 康红1, 孙宏华1, 谢进进1, 胡远明1, 王露霞2, 史慧群3
1.广州中医药大学祈福医院检验科,广东 广州 511495
2.广州军区广州总医院检验科,广东 广州 510010
3.广州市越秀区第二人民医院检验科,广东 广州 510180

作者简介:沙 瑶,女,1973年生,学士,主管技师,主要从事临床免疫工作。

基金:广州市番禺区科技局基金资助(2007-Z-74-1)
摘要
目的 通过对自建和配套生化检测系统血清酶测定进行方法比对和偏差评估,探讨2种检测系统间血清酶测定结果的一致性。方法 按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件的要求,以奥林巴斯AU400生化分析仪、奥林巴斯原装试剂、奥林巴斯原装校准品组成的配套检测系统为目标检测系统,以奥林巴斯AU400生化分析仪、国产试剂、罗氏cfas校准品组成的自建检测系统为试验检测系统,用患者新鲜血清对丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、 乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)进行检测,对2种检测系统之间的预期偏差进行评估。当预期偏差不能接受时,对新鲜混合血清赋值后重新用新的校准值校准自建检测系统。结果 在检测的6个项目中,除AST外,其余项目测定结果的偏差均能接受。AST经重新赋值后,2种检测系统的偏差减小,结果可以接受。结论 校准和校准验证是实现自建检测系统量值溯源性和可比性的有效途径,通过新鲜血清对日常校准品重新赋值,可达到自建和配套检测系统检测结果的一致性。
关键词: 酶; 方法比对; 偏差; 评估; 新鲜血清
中图分类号:Q55 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)09-0697-04
The comparability study and the bias evaluation on the result of serum enzymes with self-developed and matching biochemical detecting systems
SHA Yao1, SHI Lingbo1, KANG Hong1, SUN Honghua1, XIE Jinjin1, HU Yuanming1, WANG Luxia2, SHI Huiqun3
1. Department of Clinical Laboratory, Clifford Hospital,Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangdong Guangzhou 511495, China
2. Department of Clinical Laboratory, General Hospital of Guangzhou Military Command of People's Liberation Army,Guangdong Guangzhou 510010,China
3. Department of Clinical Laboratory, the Yuexiu Second People's Hospital in Guangzhou, Guangdong Guangzhou 510180, China
Abstract
Objective To study the coincidence of serum enzyme results of self-developed and matching biochemical detecting systems through the method comparison and bias evaluation.Methods According to National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) document EP9-A2, OLYMPUS AU400 biochemical analyzer, original reagent and its calibrator were performed as the detecting system, and OLYMPUS AU400 biochemical analyzer, homemade reagent and Roche cfas calibrator were the self-developed detecting system. 6 serum enzyme items including alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyltransferase (GGT), alkaline phosphatase (ALP), lactate dehydrogenase (LDH) and creatine kinase (CK) were determined, and the results were used to analyze the prospective bias between these two systems.When the bias was not acceptable,a fresh mixed serum was assayed in OLYMPUS AU400 reagent testing system, and the result was adopted as temporary calibrator to calibrate self-developed detecting system.Results The system bias of AST was not acceptable,and the other 5 items could be accepted. After the value of temporary calibrator was determined and used,the bias between the two systems was significantly decreased and acceptable.Conclusions The traceability and comparability of self-developed detecting system can be achieved by calibration and verification.The value of calibrator can be determined using fresh mixed serum for the coincidence of different biochemical detecting systems.
Keyword: Enzyme; Method comparison; Bias; Evaluation; Fresh serum

随着检验医学的发展, 临床实验室常拥有多个检测系统。当用自建检测系统(实验室根据自己意愿选择仪器、校准品、试剂等而建立的检测系统)进行样本检验时, 结果可能存在偏差。为实现自建检测系统与配套检测系统检测结果的一致性, 以达到同一检验项目在不同检测系统中的检验结果具有可比性, 我们根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) EP9-A2[1]文件对自建检测系统和配套检测系统血清酶测定进行方法比对和偏差评估, 并通过新鲜混合血清作为量值传递载体, 对自建检测系统进行校准及结果评价。

材料和方法
一、仪器及试剂

1.配套检测系统 OLYMPUS AU400生化分析仪及配套试剂[丙氨酸氨基转移酶(ALT) 批号6461、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)批号6545、γ -谷氨酰基转移酶(GGT)批号6230、碱性磷酸酶(ALP) 批号6426、 乳酸脱氢酶(LDH) 批号6756、肌酸激酶(CK)批号6365]。

2.自建检测系统 OLYMPUS AU400生化分析仪, ALT(批号081201)、AST(批号081201)、LDH(批号081201)、CK(批号081201)试剂由上海复旦张江生物医药公司提供; GGT(批号081105)、ALP(批号090115)试剂由广州华鑫科技有限公司提供, 罗氏cfas校准品(批号 178 820-01)。

3.质控品 Randox通用质控水平2(批号 460UN/4)和水平3(批号 292UE/1)。

4.样本 门诊及住院当日无黄疸、无溶血的新鲜血清, 其浓度选择符合NCCLS EP9-A2文件数据分布建议表的要求。

二、方法

1.测定原理 ALT、AST、GGT、ALP、LDH、CK 6个项目在配套检测系统和自建检测系统中的测定原理、反应类型和方法相同。

2.初步评估 首先应用NCCLS EP10-A2文件对自建和配套检测系统进行初步性能评价[2, 3], 评价指标包括偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性度、互染率、漂移度。

3.方法比对 因配套检测系统具有溯源性, 故以配套检测系统作为目标检测系统(比较方法)、自建检测系统为试验方法进行方法比对试验。测定项目包括ALT、AST、GGT、ALP、LDH、CK。实验前对仪器进行常规维护与保养, 按常规方法进行校准和质控, 室内质控在控时进行测定。在同一工作日分别用配套和自建检测系统对8份样本进行6个项目的双份平行测定, 测定顺序为1→ 8、8→ 1, 经过5个工作日得到40组数据。

4.离群值的检查 按照EP9-A2文件进行方法内和方法间离群值检查。若检查中有2.5%以上的离群值, 可在查找原因后补充试验数据。

5.临床可接受性能判断 计算6个项目在给定医学决定水平(Xc)处的预期偏差及预期偏差的95%可信区间(CI), 根据生物学变异确定的偏倚[4]计算出各项目在Xc处的允许误差(Ea), 将预期偏差的95% CI与Xc的Ea相比较[5]:(1)Ea> 预期偏差95%CI的上限(预期偏差95%CI的上、下限为负值时, 取其绝对值进行比较), 预期偏差低于可接受偏差的概率很高(r> 0.975), 试验方法与比较方法可以接受; (2)预期偏差95%CI的上限> Ea> 预期偏差95%CI的下限, 则数据显示试验方法的偏差有别于可接受偏差, 试验方法与比较方法相当; (3)Ea< 预期偏差95%CI的下限, 预期偏差高于可接受偏差的概率很高(r< 0.975), 试验方法与比较方法不能被接受。

6.赋值方法 根据方法比对, 临床可接受性能判断为不可接受时, 以患者新鲜血清为临时校准品, 对自建检测系统进行校准。(1)选择患者样本量较多、分析物浓度适中的某个新鲜血清或另外寻找一份浓度适中的新鲜混合血清为“ 临时校准品” , 在配套检测系统进行多次检测(至少3次以上), 取均值; (2)在自建检测系统上, 用配套系统检测“ 临时校准品” 的均值作为校准值校准自建检测系统, 然后对自建和配套检测系统进行校准验证分析, 即对一批独立患者新鲜血清(6~8例, 分析物浓度分布于整个检测范围)分别在自建和配套检测系统上测定, 计算每个患者样本2个检测系统结果的偏差, 若所有样本结果偏差均小于根据生物学变异确定的偏倚, 说明试验(以新鲜血清为临时校准品的校准)初步成功; (3)在经新鲜血清校准后的自建检测系统上, 对日常校准品进行多次检测(至少3次以上), 取均值作为“ 临时校准值” , 对自建检测系统进行校准, 再进行校准验证, 若校准成功, 说明试验(以重新赋值的日常校准品的校准)初步成功; (4)再次按照 NCCLS EP9-A2文件的要求, 对自建和配套检测系统进行方法学比较试验, 如果方法学比较结果不如使用新鲜混合血清为临时校准品的比较结果, 说明直接对日常校准品的检测值还不是最佳值。可以根据所有样本结果差异分布上的趋势, 对日常校准品的检测值作微小的调整, 再进行方法学比较试验。如此反复试验, 直至实现试验方法与比较方法相当, 可以接受, 说明日常校准品的赋值对自建检测系统校准成功。

结 果
一、检查离群值

2种检测系统的方法内和方法间均未发现离群值。

二、方法比对结果

1.预期偏差可以接受的项目有ALT、GGT、ALP、LDH和CK。以上5个项目Ea> 预期偏差95%CI的上限或包含在预期偏差95%CI的上、下限之间, 试验方法与比较方法相当。

2.预期偏差不能接受的项目有AST, Ea< 预期偏差95%CI的下限, 试验方法与比较方法不能被接受。见表1。

表1 血清酶测定结果在Xc处的预期偏差及CI
讨 论

目前, 全自动生化分析仪在医院广泛使用, 与仪器配套的原装试剂价格昂贵, 可变通性不如不断增加和完善的国产试剂, 但是使用自建检测系统进行患者样本的检验, 测定结果可能存在着偏差。根据国际标准化实验室要求, 检测结果只有直接或间接溯源到参考方法, 才能保证检验结果的准确性和可比性, 这就需要通过一定的方法学比较试验对不同检测系统进行方法比对分析和预期偏差评估, 以确保检测结果具有连续性和一致性。

本研究应用NCCLS EP9-A2文件分别对自建和配套检测系统进行了初步性能评价, 试验数据显示自建和配套检测系统的精密度、检测范围符合要求。

在以上试验的基础上, 应用NCCLS EP9-A2文件对自建和配套检测系统进行方法学比较试验。目前国际上还没有临床可接受性能的统一判断标准, 有资料用美国临床实验室改进修正法案(CLIA'88)可接受范围的1/2为判断标准[6]。本研究采用根据生物学变异确定的偏倚计算出各项目在Xc处的Ea同预期偏差95%CI相比较的判断标准。此方法能够用更加严密的统计作出结论。结果表明自建检测系统同配套检测系统间存在偏差, 其中ALT、GGT、ALP、LDH和CK的偏差在Xc处均可接受, 基本能得到具有一致临床意义的检测结果, 不用再做校准。AST检测结果在Xc为20、60、300 U/L时的Ea均小于对应预期偏差95%CI的下限, 偏差不可接受。通过以新鲜血清对自建检测系统进行重新赋值后, 各Xc处的Ea均在对应预期偏差95%CI内或大于对应预期偏差95%CI的上限, 偏差可以接受。

从试验结果可以看到经过新鲜血清赋值传递可以得到自建和配套检测系统一致性的结果。寻求稳定校准品是保持使用自建检测系统对患者样本检测结果可以溯源至配套检测系统的关键。购买一批质量好、知名度高的公司冻干校准品, 作为自建检测系统的校准品(以下简称为自建校准品), 为了能长期具有可靠性, 最好能考虑使用2~3年的量。其中要考虑正常条件下的定期校准、更换试剂盒批号的校准、出现失控的校准、仪器保养和更换零件后的重新校准、操作人员变动的校准等需要的自建校准品量; 还有, 为以后更换新的自建校准品时, 新老自建校准品间的对比等需要的校准品量, 都应一并考虑在内。

综上所述, 本研究利用配套检测系统的溯源性对新鲜混合血清定值并传递给自建检测系统的日常校准品, 修正日常校准品的校准值后重新校验检测系统并应用NCCLS EP9-A2文件进行方法比对。赋值前后的试验结果表明, 新鲜混合血清的赋值传递是使不同检测系统的结果具有可比性的有效途径。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Method comparision and bias estimation using patient samples[S]. 2nd ed, EP9-A2, NCCLS, 2002. [本文引用:1]
[2] 沙瑶, 石凌波, 康红, 等. 应用CLSI EP10-A2分别对自建和配套生化检测系统进行初步评价[J]. 实验与检验医学, 2009, 27(4): 381-382. [本文引用:1]
[3] 孙宏华, 石凌波, 康红, 等. 应用NCCLS EP10-A2对自建和配套生化检测系统进行初步性能评价[J]. 热带医学杂志, 2009, 9(8): 951-953. [本文引用:1]
[4] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 79-80. [本文引用:1]
[5] 孙虹, 台虹, 赵崇吉, 等. 不同生化分析系统间检测结果的偏差评估及应用[J]. 中华检验医学杂志, 2008, 26(10): 587-590. [本文引用:1]
[6] 张秀明, 庄俊华, 徐宁, 等. 不同检测系统血清酶测定结果的偏倚评估与可比性研究[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(4): 346-349. [本文引用:1]