一、为了解连续检测中最大偏倚产生的原因, 采用4种检测模式来讨论可能造成这种偏倚的原因。(1)模式一:3份参考样本取血后1 h内, 各连续检测6次, 观察仪器在短时间内连续测定时生化检测的稳定性和最大偏倚; (2)模式二:取10份参考样本, 每份样本取血后1 h内连续检测3次, 室温放置8 h后再检测3次, 观察仪器在没有过多的干扰和取样情况下的最大偏倚; (3)模式三:取10份血分别在采血后2、4、6和8 h各检测1次, 用以观察时间的延长、反复取样, 以及样本量的不断减少, 对生化检测可能产生的影响和最大偏倚; (4)日常模式:30 d内30个参考样本的最大偏倚。结果见表1。

表1

表1

表1 不同模式下检测最大偏倚对照(%) 不同模式 TP Alb ALT AST GGT ALP TBil DBil Glu UA Cr Urea TG Chol 模式一 1.46 1.32 8.33 5.33 3.47 1.33 3.86 3.97 1.53 1.01 1.58 2.08 2.11 2.53 模式二 1.48 1.36 8.48 5.96 3.72 2.69 4.01 4.79 2.01 1.21 1.70 3.01 3.12 2.59 模式三 1.53 1.45 8.92 6.81 3.85 3.47 4.85 8.59 2.72 1.21 1.74 4.03 3.97 2.69 日常模式 1.64 2.33 10.00 14.70 8.59 4.82 8.86 11.30 3.15 1.34 5.68 6.37 4.47 2.86

表1 不同模式下检测最大偏倚对照(%)

二、仪器性能

每日工作完成后, 用配套质控物再次验证仪器性能, 结果表明仪器状况良好, 所有监测指标仍然在控。

三、参考样本的可接受范围

采用 x-± 浮动范围[( x-× 最大偏倚)/2]来确定, 可得到参考样本作为时时质量监测的可接受范围, 或者简化为整数化的可接受偏倚, 见表2。

表2

表2

表2 新鲜血清和配套质控血清浮动范围的比较 项目 偏倚(%) 参考样本 (± 浮动范围) 配套质控物 (± 1s) 最大 可接受 TP (g/L) 1.64 2.00 74.90± 0.61 69.10± 2.80 Alb(g/L) 2.33 3.00 44.80± 0.52 48.50± 2.9 ALT(U/L) 10.00 10.00 24.20± 1.21 47.60± 2.90 AST(U/L) 14.71 15.00 23.00± 1.69 44.60± 2.70 GGT(U/L) 8.59 9.00 26.00± 1.12 46.40± 2.80 ALP(U/L) 4.82 5.00 63.60± 1.53 81.00± 4.90 TBil(μ mol/L) 8.86 9.00 14.60± 0.65 24.30± 1.50 DBil(μ mol/L) 11.29 12.00 4.20± 0.24 13.10± 1.10 Glu(mmol/L) 3.15 4.00 5.49± 0.09 5.22± 0.26 UA(mmol/L) 1.34 2.00 294.50± 1.97 275.00± 14.00 Cr(mmol/L) 5.68 6.00 67.00± 1.90 94.60± 5.70 Urea(mmol/L) 6.37 7.00 4.81± 0.15 7.39± 0.37 TG(mmol/L) 4.47 5.00 1.10± 0.03 1.38± 0.07 Chol(mmol/L) 2.86 3.00 4.10± 0.06 2.31± 0.12

表2 新鲜血清和配套质控血清浮动范围的比较

血细胞分析与生化样本检测不论在样本采集、保存上还是在检测原理上都有很大差别。所以我们实验的设计和方法上作了一定的改动, 以适应生化样本的检测特点。如在参考样本的保存环境上, 血细胞分析可能更适宜室温保存, 而生化样本适宜4 ℃冰箱保存^[2], 我们采取样本回帽保存于4 ℃冰箱内, 使检测的偏倚降到最小。参考样本参数选择基本在正常参考范围内。

8 h内测试条件的不同, 都会给检测结果带来影响。表1中的实验数据表明, 1 h内检测对样本的稳定性影响最小, 偏倚也小, 各参数变化幅度不大; 模式二中各项指标可能随时间的延长, 各项目可出现大小不等的变化; 模式三模拟了日间质控模式。因此, 出现较大的偏倚应该与时间的延长、样本反复取样、样本量的减少、样本自身稳定性等因素有关; 而日常模式数据来源于30 d内的30个样本, 除了具有上述各种不稳定因素外, 还与每日样本选择的不同, 样本之间的差异性, 仪器工作稳定性, 试剂等因素有关, 各参数出现的变化趋势也类似于模式三, 但其变化幅度更大。在4种模式中, TP、UA、Alb、Chol参数比较稳定, 这与这些检测物质本身比较稳定有关。随着时间的延长血糖呈现较好的稳定性, 与本实验采用含分离胶和促凝剂的真空采血管, 并在采血后30 min内分离血清有关。分离胶有效的隔绝了血清与血球的接触, 阻止葡萄糖被细胞代谢, 有报道^[3]显示常规血清分离法葡萄糖的检测结果明显低于分离胶法。

从表2可见参考样本检测中TP、UA、Alb、Chol在8 h内多次检测的结果最为稳定, 极差很小, 最大偏倚分别为:< 2%、< 2%、< 3%和< 3%。这与被测定物质本身的稳定性好有关。而酶类如:ALT、AST、GGT、TBil、DBil, 最大偏倚为15%, 与被检测物质本身的稳定性差, 时间延长有关。表2还表明参考样本各个项目与罗氏N值配套质控物(以批号178985质控物为例) 给定 x-± 1s的浮动范围, 前者显示了更好的精密度和稳定性, 并与本室内质控1s范围相接近, 最大浮动范围明显低于配套质控物给定的1s变异范围。

新鲜血清在生化自动分析仪的质控和校正中有很高价值, 近年来很多作者利用新鲜血清进行了关于室内质控^[4]、仪器校准^[5]等方面的工作。但用在实时监测生化自动分析仪未见相关报道。本研究得到了这些参考样本在8 h内产生浮动的最大偏倚和比较合理的可接受偏倚结果。在具体应用中, 以首次检测结果做参考值, 随后插入的每次检测结果与第1次检测参考值进行计算, 看最大偏倚是否超过预设最大偏倚。如超标应该立即停止工作, 重新用配套质控物来核实。如果证实质控物在控, 则表明可能是参考样本出现不稳定问题或偶然误差, 可继续进行常规检测工作。如果质控物也超出可接受范围, 说明仪器失控, 应按照实验室失控处理的相关标准操作程序(SOP)文件进行处理。全自动生化自动分析仪通过随机或间隔插入质控物的方法, 较好的解决其时时监控和保证质量的问题。又省却应用大量配套质控物所造成的检验成本上升和质控物浪费问题。

在当日质控合格的前提下选择一份参考样本, 按一定时间或一定间隔多次检测, 监测仪器的工作状态的方法, 可用于生化自动分析仪日内质量控制。如发现某次监测结果偏倚较大, 超出可接受偏倚范围时, 应及时考虑重新使用配套质控物复核质控情况, 从而及时发现失控问题。通过使用相对稳定的新鲜患者血清作为参考样本, 部分替代质控物来观察仪器每日在各个时间段的工作情况, 对仪器和试剂在更多的时间点上进行监测, 可达到保证全程质量控制和随机质量控制的目的。