1. 仪器 日立7600-020全自动生化分析仪

2. 试剂 总蛋白(TP)(双缩脲法)、碱性磷酸酶(ALP)与CK(IFCC推荐法); 肌酸激酶同I酶(CK-MB)(免疫抑制法)、淀粉酶(Amy)(亚乙基-4-NP-麦芽庚糖苷法)、二氧化碳(CO₂)(酶法)试剂由上海申能德赛公司提供; 三酰甘油(TG)与TC(氧化酶-过氧化物酶法); 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(直接法)试剂由上海名典公司提供; 血糖(Glu)(己糖激酶法); Mg²⁺检测试剂(甲基麝香草酚蓝法)由上海科华公司提供。质控血清由罗氏公司(Roche)提供, 批号:181528。去离子水由本室自制。HIALKALI-D清洗液由日立公司提供。

1. 10个疑似污染项目的选择 参考我室试剂说明书及相关文献^[1~3], 有重点地选择疑似对Mg²⁺存在试剂污染的TP、ALP、CO₂、Glu、Amy、TG、TC、HDL-C、CK、CK-MB 10个项目作为观察对象, 把其试剂1(R1)、试剂2(R2)作为样本在日立7600-020上直接检测Mg²⁺2次, 取均值。

2. 质控血清无污染时Mg²⁺值的确定 实验前先确认制水机水质处于良好状态, 然后用无水乙醇清洗生化仪试剂针、样本针、搅拌棒, 清洗反应槽, 用有效氯清洗清洗机构管道, 进行仪器维护后再进行系统清洗、反应槽换水、光度计检查、杯空白检测。复溶质控血清若干瓶并充分混匀, 单独检测血清Mg²⁺10次, 取均值作为无污染时Mg²⁺对照值(X₁), 作为后面确定试剂污染之用。

3. 试剂针交叉污染试验 在一个模块上, 把Mg²⁺通道号设置最后, 设置消除反应杯交叉污染程序, 将上述质控血清分成4个样本(这样也就不存在样本针污染)按TP、Mg²⁺、 Mg²⁺、 Mg²⁺组合检测, 重复一次取均值, 结果分别记作TP、Mg²⁺₁、 Mg²⁺₂、 Mg²⁺₃; 然后转入下一项目组合ALP、Mg²⁺、 Mg²⁺、 Mg²⁺检测, 以此类推, 直至将上面10个疑似施污染项目试验完毕。以Mg²⁺₁/ X₁× 100%> 105%或< 95%时为疑似污染, 以Mg²⁺₁/ Mg²⁺₃× 100%> 105%或< 95%时确认存在污染为判断标准^[4], 判断上面10个项目中哪些项目对Mg²⁺检测存在试剂针交叉污染。

4. 比色杯的试剂交叉污染试验 在一个模块上, 将质控血清分成160个样本, 对以上10个项目按通道顺序TP→ ALP→ CO₂→ Glu→ Amy→ TG→ TC→ HDL-C→ CK→ CK-MB, 设计TP₁、TP₂… TP₁₅、TP₁₆、ALP₁、ALP₂… ALP₁₆…、CK-MB₁、… CK-MB₁₆组合试验(16次× 10项), 即每个项目连续测16次, 160份样本分别一一对应上面组合中的一个试验, 并且日立7600一个模块上刚好160个反应杯, 10种试剂放置也按通道顺序相邻连续放置, 设置试剂针清洗程序防止上一项目试剂通过试剂针污染下一项目。进行检测后结果不记, 然后在stand by状态下, 第二轮再检测这160份质控血清Mg²⁺, 得Mg²⁺₁、Mg²⁺₂… Mg²⁺₁₆; Mg²⁺₁₇… M g322+; ……; Mg²⁺₁₄₅… Mg²⁺₁₆₀结果, 即前、后两轮检测中TP₁与Mg²⁺₁、TP₂与Mg²⁺₂、ALP₁与Mg²⁺₁₇、… CK-MB₁与Mg²⁺₁₄₅、CK-MB₁₆与Mg²⁺₁₆₀前后共用同一个比色杯。为了慎重起见(尽管设置试剂针清洗程序), 仍从第1轮每个项目中用过的第4至第16号比色杯统计第2轮这些杯对应的Mg²⁺均值(Mg²⁺_n表示, n代表疑似污染项目)。例如, 从Mg²⁺₄至Mg²⁺₁₆计算均值, 该均值表示在检测过TP后的13个比色杯中第2轮再测Mg²⁺时的13个结果的均值(Mg²⁺_TP), 与Mg²⁺无污染时的X₁比较, 以Mg²⁺_TP/ X₁× 100%> 105%或< 95%时, 确认为检测TP后对Mg²⁺存在比色杯污染^[3]。其余ALP等9个项目参照TP做法顺次类推。

5. 消除试剂交叉污染的清洗程序设置 分别就Mg²⁺的试剂针和比色杯交叉污染问题, 设计增加特殊冲洗程序:(1)在特殊冲洗程序special wash 中设置2个项目间试剂针、比色杯用去离子水清洗(water 300 μ L), 再观察这些项目对Mg²⁺的污染是否依然存在; (2)如对上面(1)操作中Mg²⁺交叉污染仍存在项目, 需再设立以碱性清洗液HIALKALI-D(D₁ 300 μ L)代替(1)中去离子水的清洗试验, 观察交叉污染是否依然存在; (3)将施污染项目与Mg²⁺检测分置在不同的模块上, 观察交叉污染是否依然存在。

一、TP、ALP等10个项目试剂中 Mg²⁺的检测值, 见表1。

表1

表1

表1 10个项目试剂中Mg2+的检测值(mmol/L) 试剂 TP ALP CO2(单试剂) Glu Amy TG TC HDL-C CK CK-MB R1 2.90 1.53 5.79 4.95 5.46 1.99 5.74 1.99 5.27 5.36 R2 0.25 2.07 0.17 0.34 2.13 0.38 1.98 0.06 0.11

表1 10个项目试剂中Mg2+的检测值(mmol/L)

二、在无交叉污染的条件下, 仅仅检测质控血清Mg²⁺10次时, 计算10次结果均值(X₁)为0.930 mmol/L。

三、试剂针交叉污染试验发现在这10个项目中对Mg²⁺检测存在试剂针交叉污染的项目有CO₂、Amy、TC 3个项目, 见表2。

表2

表2

表2 10个疑似对Mg2+存在试剂针污染的试验结果(mmol/L, %) 疑似污染 项目 Mg2+1 Mg2+2 Mg2+3 Mg2+1/Mg2+3× 100% TP 0.96 0.94 0.93 103.2 ALP 0.96 0.93 0.92 104.3 CO2* 1.02 0.97 0.94 108.5 Glu 0.97 0.94 0.94 103.2 Amy* 1.07 0.99 0.93 115.1 TG 0.98 0.95 0.94 104.3 TC* 1.09 0.98 0.94 116.0 HDL-C 0.97 0.94 0.93 104.3 CK 0.99 0.96 0.95 104.2 CK-MB 0.98 0.94 0.94 104.3 注:* 表示存在试剂针污染

表2 10个疑似对Mg2+存在试剂针污染的试验结果(mmol/L, %)

四、10个项目试剂对Mg²⁺检测是否存在比色杯交叉污染的试验结果表明CO₂、Amy、TC、HDL-C、CK、CK-MB 6个项目试剂存在对Mg²⁺检测的比色杯污染, 见表3。比较表2和表3可知, 从试剂交叉污染的项目范围及污染程度来讲, 试剂通过比色杯污染比试剂通过试剂针污染严重。

表3

表3

表3 10个疑似比色杯试剂污染项目试验结果(mmol/L, %) 疑似施污染项目 Mg2+n X1 Mg2+n/X1× 100% TP 0.975 0.930 104.8 ALP 0.965 0.930 103.8 CO2* 1.089 0.930 117.1 Glu 0.971 0.930 104.4 Amy* 1.151 0.930 123.8 TG 0.972 0.930 104.5 TC* 1.163 0.930 125.1 HDL-C* 1.030 0.930 110.8 CK* 1.010 0.930 108.6 CK-MB* 1.045 0.930 112.4 注:* 表示存在试剂的比色杯污染; Mg2+n、X1为计算出的均值, 故保留3位有效数字

表3 10个疑似比色杯试剂污染项目试验结果(mmol/L, %)

五、对上述试剂的试剂针及比色杯交叉污染设立特殊清洗程序, 以去离子水作为清洗剂或将施污染项目与Mg²⁺检测分置在不同的模块上检测, 发现上述污染能有效消除, 其Mg²⁺_n/X₁× 100%均> 95%而< 105%。