三种方法对巨大血小板的检测分析
三种方法对巨大血小板的检测分析
作者简介：薛飞平,男,1980年生,主管技师,主要从事临床检验工作。
摘要
目的
分析LH750血液分析仪提示巨大血小板(PLT)时,其PLT计数结果的准确性。
方法用LH750血液分析仪法、手工法和流式细胞仪法同时计数PLT,LH750血液分析仪法、手工法计数结果分别和流式细胞仪法计数结果相互比较。
结果当LH750血液分析仪提示巨大PLT但PLT直方图无显示拟合曲线时,LH750血液分析仪法与流式细胞仪法之间PLT计数结果差异有统计学意义( P<0.05),而手工法与流式细胞仪法之间差异无统计学意义( P>0.05)。当LH750血液分析仪提示巨大PLT但PLT直方图显示拟合曲线时,LH750血液分析仪法、手工法计数结果分别和流式细胞仪法计数结果相互比较,差异无统计学意义( P>0.05)。
结论当LH750血液分析仪提示巨大PLT,在无拟合曲线时应进行手工复核,而有拟合曲线时可不需复核,其结果可靠。手工法可替代流式细胞仪法进行LH750血液分析仪测定后的复核。
关键词:
巨大血小板; 流式细胞术; 曲线拟合
中图分类号:R446.11
文献标志码:A
文章编号:1673-8640(2010)05-0398-03
Keyword:
血小板(PLT)检测是研究止血与凝血障碍的重要指标之一, 也是其他PLT参数可靠性的基础, 其检测结果的可靠性至关重要。随着血液分析仪在临床检验上的广泛应用, PLT计数值越来越受到了临床上的关注。为了探讨LH750血液分析仪检测血液标本提示巨大PLT, 在无拟合曲线时应进行手工复核, 而有拟合曲线时可不需复核, 我们对90例标本用3种方法进行了比较研究。
材料和方法
一、仪器
美国Beckman Coulter公司LH750五分类血液分析仪; EPICS XL型流式细胞仪; Olympus CX31双目显微镜。
二、试剂
LH750原装试剂(单克隆抗体); CD61-藻红蛋白(PE)购自法国Immunotech公司; 乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管由BD公司提供; 瑞特染色液由Sigma公司提供; 手工法试剂按《全国临床检验操作规程》[1]有关章节严格配制。
三、标本
来源于2007年9至12月温州医学院附属第三医院门诊患者, 共90例, 抽取EDTA-K2抗凝静脉血2 mL, 充分混匀, 2 h内检测完毕。
四、方法
选取 LH750血液分析仪提示巨大PLT, 并经血片瑞特染色[2]镜检证实[红细胞(RBC)均匀分布10个高倍视野中有1个或1个以上巨大PLT体积大于或等于RBC直径二分之一[3]]的标本, 采用LH750血液分析仪法、 流式细胞仪法和手工法3种方法进行平行测定, 每种方法测定2次, 结果取均值。LH750血液分析仪法按血液分析仪标准操作规程进行上机操作, 流式细胞仪法采用双平台法, 先向检测管加入50 μ L磷酸盐缓冲液(PBS), 再向检测管加入10 μ L CD61-PE, 然后再加5 μ L全血标本, 轻轻混匀, 置阴暗处室温孵育15 min后加入500 μ L PBS。流式细胞仪用Flow Check校准仪器光路, 使半峰宽变异系数(HPCV)< 2%, 然后进行上机检测, 在FS Log/SS Log双参数直方图中设门选定PLT和RBC进行分析, 确定RBC/PLT的比值, R=RBC/PLT, 然后用LH750血液分析仪计数的RBC绝对数除以R值得到PLT计数, 见图2。手工法按《全国临床检验操作规程》进行标准操作, 采用双盲法计数。
 | 图1 血涂片上巨大PLT |
 | 图2 流式细胞仪PLT直方图 |
五、统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析。
结 果
LH750血液分析仪提示巨大PLT, 但PLT直方图无显示拟合曲线(见图3)的标本, LH750血液分析仪提示巨大PLT, 但PLT直方图显示有拟合曲线(见图4)的标本, 3种方法分析结果见表1。
 | 图3 无拟合曲线PLT直方图 |
 | 图4 有拟合曲线PLT直方图 |
 | 表1 3种方法PLT检测结果比较(× 109/L) |
经SPSS13.0统计软件单因素方差分析3种方法计数PLT, 无拟合曲线时, LH750血液分析仪法与流式细胞仪法计数结果差异有统计学意义(P< 0.05), 而手工法与流式细胞仪法计数结果差异无统计学意义(P> 0.05)。有拟合曲线时, LH750血液分析仪法、手工法计数结果和流式细胞仪法计数结果差异均无统计学意义(P> 0.05)。
讨 论
PLT作为血液的一种有形成分, 在生理的止血和病理的血栓形成过程中扮演了一个非常重要的角色。现代科学研究表明, PLT不仅在凝血系统有着重要的作用, 在动脉血栓栓塞、冠心病、脑血管病、高血压和糖尿病等疾病的发病和防治中也有重要作用, 他还参与了炎症反应, 并有证据显示PLT可能还具有免疫调节作用。因此, PLT作为临床常用的检验项目之一, 其检测的准确性及可靠性对于临床是及其重要的。一般情况下, PLT分布状态符合偏正态分布, 巨型为0.7%~2.0%, 大型为8%~16%, 中型为44%~49%, 小型为33%~44%[3]。PLT计数的干扰主要来自2 fL以下:噪音、细菌的干扰; 20 fL以上:裂RBC、小RBC、白细胞、巨大PLT、聚集PLT的干扰[4]。LH750血液分析仪采用电阻抗法计数PLT, 其实测PLT体积的范围为2~20 fL, 如果PLT分布状态符合偏正态分布, 仪器可以通过拟合曲线法进行修正, 推导出 0~70 fL范围内PLT数。当仪器提示巨大PLT而PLT分布状态符合偏正态分布, 仪器有显示拟合曲线, 可认为其结果能准确反应实际值。如果血液中巨大PLT很多, PLT分布状态不符合偏正态分布, 仪器就只给出实测2~20 fL体积范围内PLT数, 而无法对其曲线进行拟合, 使计数结果偏低, 特别对于低值PLT, 其测定结果影响较大, 其直接结果可能会导致临床误诊。因此, LH750血液分析仪在测定过程中当提示巨大PLT而无拟合曲线时应进行手工复核, 而有拟合曲线时可不需复核, 其结果可靠。
流式细胞仪运用单克隆抗体CD61的免疫学方法能将PLT准确计数, 为目前计数PLT的参考方法, 手工法也是准确计数PLT的可靠方法。由于流式细胞仪计数PLT, 对仪器要求较高, 价格昂贵, 不利于普及, 因此手工法是替代流式细胞仪进行PLT复核的可靠方法。
The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
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