引用本文
胡翠华, 乔江春, 马嵘, 刘桂芹, 谢洁红, 张传宝, 郭健. 不同抗凝剂对肝移植受者FK506血药浓度测定的影响及临床意义. 25(5): 368-371
HU Cuihua, QIAO Jiangchun, MA Rong, LIU Guiqin, XIE Jiehong, ZHANG Chuanbao, GUO Jian. The effect of different anticoagulants on determination of FK506 blood concentration in liver transplant recipients and clinical significance. Labratory Medicine, 25(5): 368-371  
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不同抗凝剂对肝移植受者FK506血药浓度测定的影响及临床意义
胡翠华1, 乔江春2, 马嵘1, 刘桂芹3, 谢洁红1, 张传宝1, 郭健1
1.卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京 100730
2. 卫生部北京医院外科,北京 100730
3.卫生部北京医院病案室,北京 100730

通讯作者：郭健,联系电话：010-58115059。

作者简介：胡翠华,女,1963年生,硕士,副研究员,主要从事临床检验工作。

摘要
目的

探讨不同抗凝剂对肝移植受者他克莫司(FK506)血药浓度测定的影响及临床意义。

方法

采集肝移植受者静脉全血34份,使用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、枸橼酸钠和肝素锂抗凝剂分别抗凝同一份血样本,在IMx型免疫分析仪上用微粒子酶免疫分析法(MEIA) 测定FK506血药浓度。

结果

肝素锂组与 EDTA组差异无统计学意义( P=0.660),呈正相关( r=0.982 8)。枸橼酸钠组与EDTA组差异有统计学意义( P=0.000),呈正相关( r=0.961 3)。枸橼酸钠组与肝素锂组差异有统计学意义( P=0.000),呈正相关( r=0.939 8)。

结论

肝素锂组与 EDTA组几乎无偏差,但是枸橼酸钠组分别与 EDTA组和肝素锂组存在一定程度的负偏差。枸橼酸钠对MEIA测定FK506血药浓度有一定的影响,应优先考虑EDTA或肝素锂抗凝剂采集全血样本。

关键词: 抗凝剂; 他克莫司; 肝移植受者; 微粒子酶免疫分析法
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)05-0368-04
The effect of different anticoagulants on determination of FK506 blood concentration in liver transplant recipients and clinical significance
HU Cuihua1, QIAO Jiangchun2, MA Rong1, LIU Guiqin3, XIE Jiehong1, ZHANG Chuanbao1, GUO Jian1
1. National Center for Clinical Laboratory, Beijing Hospital Ministry of Health, Beijing 100730, China
2. Department of Surgery, Beijing Hospital Ministry of Health, Beijing 100730, China
3. Department of Case History, Beijing Hospital Ministry of Health, Beijing 100730, China
Abstract
Objective

To investigate the effect of different anticoagulants on determination of tacrolimus (FK506) blood concentration in liver transplant recipients and clinical significance.

Methods

34 venous whole blood specimens from liver transplant recipients were collected simultaneously via various anticoagulants of ethylenediamine tetraacetic acid dipotassium (EDTA-K2), sodium citrate and lithium heparin. FK506 whole blood concentrations were measured by microparticle enzyme immunoassay (MEIA) on IMx immunoassay analyzer.

Results

There were no statistical differences between EDTA group and lithium heparin group ( P=0.660) and positive correlation with r=0.982 8.There were significant differences between sodium citrate group and EDTA group ( P=0.000) and positive correlation with r=0.961 3. There were significant differences between sodium citrate group and lithium heparin group ( P=0.000)and positive correlation with r=0.939 8.

Conclusions

There are no differences between EDTA group and lithium heparin group, however, the sodium citrate group has minus bias in some degree with EDTA group and lithium heparin group. The sodium citrate can affect the determinations of FK506 whole blood concentrations in some degree, so the anticoagulant of EDTA or lithium heparin should be first considered for the collection of whole blood specimens.

Keyword: Anticoagulant; Tacrolimus; Liver transplant recipient; Microparticle enzyme immunoassay

FK506是他克莫司(tacrolimus)的代号, 为一种强有力的免疫抑制剂, 能预防和治疗排斥反应, 在器官移植临床中的应用日趋广泛。但是FK506的治疗窗范围较窄且个体差异大, 血药浓度与用药剂量相比, 与抗排斥反应和毒副作用有更密切的相关性。为提高移植器官的存活率, 减少不良反应, 临床使用FK506时必须进行治疗药物监测(therapeutic drug monitoring, TDM), 根据其全血谷浓度变化来调整用药剂量[1]。IMx 型免疫分析仪上用微粒子酶免疫分析法(MEIA)对FK506测定的样本类型中只提到乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血, 按照标准操作程序(SOP)文件要求, 在试验中就不可使用其他抗凝剂的全血样本来测定FK506血药浓度, 这样FK506血药浓度监测要求使用EDTA抗凝管。但是我们在长期的临床样本测定中观察到一个现象, 有些外单位送检到本室的全血样本中, 经常使用肝素锂或枸橼酸钠抗凝。为了给临床医师提供准确的血药浓度监测信息, 我们采用EDTA-K2、枸橼酸钠和肝素锂抗凝剂分别抗凝同一份静脉全血样本, 探讨不同抗凝剂对MEIA测定FK506血药浓度的影响和临床意义。

材料和方法
一、样本来源

2005年7月 至2006年8月在卫生部北京医院进行肝移植手术后采用FK506抗排斥方案治疗的患者全血样本34份, 患者年龄36 68岁。

二、真空采血管

奥地利格雷那公司(Greiner bio-one )产品, 采血量为2 mL , 钴60灭菌。紫色帽盖抗凝剂为EDTA-K2, 绿色帽盖抗凝剂为肝素锂, 蓝色帽盖抗凝剂为枸橼酸钠。

三、仪器与试剂

IMx自动免疫分析仪和LR3531 型高速离心机(Abbott Company, 美国); Qiliqseier 型漩涡混匀器(其林贝尔公司, 中国); FK506检测试剂盒, 包括鼠抗FK506抗体、FK506碱性磷酸酶结合物、4-甲基酮磷酸盐反应底物、显色剂和洗涤液; 蛋白沉淀剂、定标液、MODE1校准液、质控品均为美国Abbott公司产品。

四、FK506血药浓度测定

采用MEIA测定FK506全血谷浓度, 用 IMx 免疫分析仪进行测定, 每次做室内质控[2]。

五、统计学方法

数据用SPSS 11.5 软件处理, 采用配对资料t检验和相关性直线回归分析。

结 果
一、不同抗凝剂组FK506血药浓度测定值的比较

EDTA组与肝素锂组进行比较, 经配对资料检验, 两者差异无统计学意义(t=-0.443, P=0.660), 经相关性分析, 两者呈正相关, 相关性良好(r=0.982 8), 见图1。EDTA组与枸橼酸钠组进行比较, 经配对资料检验, 两者差异有统计学意义(t=5.175, P=0.000), 经相关性分析, 两者呈正相关, 相关性良好(r=0.961 3), 见图2。枸橼酸钠组与肝素锂组进行比较, 经配对资料检验, 两者差异有统计学意义(t=-4.537, P=0.000), 经相关性分析, 两者呈正相关, 相关性良好(r=0.939 8), 见图3。从图1、图2和图3可以看出, 肝素锂组与EDTA组的线性回归方程与相应直线Y=X方程几乎无偏差。枸橼酸钠组与相应直线Y=X方程存在不同程度的负偏差。

二、1例肝移植受者术后半年多的FK506血药浓度监测结果

见图4。该图提示, 枸橼酸钠抗凝剂所测FK506血药浓度值低于EDTA和肝素锂抗凝剂。

图1 肝素锂组与EDTA组的血药浓度测定值的相关性

图2 枸橼酸钠组与EDTA组的血药浓度测定值的相关性

图3 枸橼酸钠组与肝素锂组的血药浓度测定值的相关性

图4 3种抗凝剂采血监测1例肝移植受者FK506血药浓度变化

讨 论

FK506具有较强的免疫抑制作用, 目前国内大多数肝移植单位将其作为一线免疫用药。但FK506的治疗窗窄, 受者个体间和个体自身药代动力学的差异大, 给药剂量和全血谷浓度之间的相关性差, 需常规监测FK506血药浓度, 以获得理想免疫抑制效果, 减少不良反应。

在FK506血药浓度监测中使用的是全血静脉样本, 所以要使用抗凝剂, 目前国内各实验测定FK506血药浓度时使用抗凝剂并不一致, 合理使用抗凝剂对FK506的血药浓度监测结果及保证检验质量有重要意义。不同抗凝剂与血液作用原理并不相同[3]。肝素是一种含有硫酸基团的黏多糖, 是分散相物质, 带有较多负电荷, 是直接抗凝剂, 主要与抗凝血酶-Ⅲ (AT-Ⅲ )结合, 使AT-Ⅲ 的精氨酸反应中心与各种丝氨酸蛋白酶起作用, 使凝血酶的活性丧失, 其也不影响红细胞体积, 不引起溶血。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少, 故不适于白细胞分类和血小板计数, 更不能用于凝血的检查。EDTA盐可与血中钙离子形成鳌合物, 从而阻止血液凝固。EDTA 盐对红、白细胞形态影响很小。枸橼酸钠也与血液中的钙离子形成可溶性鳌合物, 从而阻止血液凝固。枸橼酸钠对凝血Ⅴ 因子有较好的保护作用, 使其活性减低、减缓, 常用于凝血检查, 也用于血液保养液。本研究发现, 虽然肝素锂、EDTA及枸橼酸钠这3种抗凝剂之间测定结果相关性良好, 但不同的抗凝剂对FK506测定还是有不同的影响, 枸橼酸钠有一定程度的负偏差。因此同一患者在进行FK506血药浓度监测期间, 应采用同一种抗凝剂采集静脉全血样本, 这样测定结果才有可比性。

本研究显示, 在肝移植后期, FK506低血药浓度时, 不同抗凝剂组间偏差稍有增大的趋势。对于枸橼酸钠组与EDTA组和肝素锂组存在负偏差的这种现象, 在我们将建立的高效液相色谱法-串联质谱法(HPLC-MS-MS)进行更深入的比对研究后, 也许能提供合理的解释。目前测定血中FK506药物浓度的方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)、MEIA、HPLC-MS-MS, 这3种监测方法结果差异无统计学意义[4, 5], ELISA测定时间长, > 24 h, 前处理也复杂。MEIA与FK506代谢产物之间存在交叉免疫反应, 测定值要比真实值稍大些, HPLC-MS-MS 只测定FK506母体药物, 具有特异性, 最能反应FK506的真实值。MEIA操作简便、速度快捷、稳定性好, 已逐渐成为器官移植的常规临床检测方法[6]。HPLC-MS-MS是目前最准确、敏感性及特异性最高的FK506浓度分析方法, 但成本较高, 主要用于科研。

本研究发现, EDTA、肝素锂和枸橼酸钠这3种抗凝剂采集全血样本在临床上用MEIA监测FK506血药浓度时, 枸橼酸钠对测定结果有一定程度的影响。建议临床上优先考虑EDTA或肝素抗凝。如能根据器官移植术后不同阶段, 进行临床检验的组合试验来选择抗凝剂也许能更方便患者, 减少抽血的次数。例如, 采用同一管EDTA抗凝全血样本可同步测定FK506血药浓度和血常规, 可避免重复留取血样, 减轻患者痛苦。

临床检验质量控制的目的之一是为临床诊断和治疗提供可靠、有效的数据和依据, 以提高和保证临床检验结果的准确性和可比性, 但分析原理、仪器和试剂等多因素都会影响检验结果。分析干扰广义上是指某一物质对某一分析物的浓度测定中任何一步骤的影响作用。充分重视和认识各种因素对临床测定结果的影响, 才能为临床提供更周到、及时的服务。所以, 临床检测实验室应该考虑分析前因素之一的不同抗凝剂对测定结果的影响, 如能在FK506血药浓度测定结果报告单中用备注的方式提示所用抗凝剂的种类, 这样就可能更加方便患者和临床全血样本的采集, 也有利临床医师判断FK506血药浓度测定结果的临床意义。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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