引用本文
汪俊军, 韩爱忠, 刘小传, 张春妮. 儿童肾病综合征患者血浆氧化低密度脂蛋白及其免疫复合物水平. 25(5): 352-355
WANG Junjun, HAN Aizhong, LIU Xiaochuan, ZHANG Chunni. The level of plasma oxidized low-density lipoprotein and its immune complex in children with nephrotic syndrome. Labratory Medicine, 25(5): 352-355  
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儿童肾病综合征患者血浆氧化低密度脂蛋白及其免疫复合物水平
汪俊军, 韩爱忠, 刘小传, 张春妮
南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所,江苏 南京 210002

作者简介：汪俊军,男,1966年生,硕士,主任技师,主要从事脂蛋白与动脉粥样硬化发病机制的关系研究。

基金:国家自然科学基金资助项目（30872411、30471649）
摘要
目的

分析儿童肾病综合征(NS)患儿血浆氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其免疫复合物(LDL-IC)水平的变化。

方法

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定106例活动期儿童NS患儿、42例恢复期儿童NS患儿和155名健康对照者ox-LDL和LDL-IC水平,同时对受检者血脂水平进行检测。

结果

恢复期及活动期NS患儿的ox-LDL水平均高于对照组(P<0.05、P<0.01),且活动期高于恢复期(P<0.01);活动期NS患儿LDL-IC水平高于恢复期NS患儿和对照组(P<0.01)。NS患儿ox-LDL、LDL-IC分别与总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和尿素(Urea)呈正相关,与白蛋白(Alb)呈负相关。活动期NS患儿经类固醇治疗后,Alb水平升高,ox-LDL、LDL-IC、TC、TG和LDL-C水平下降。

结论

NS患儿ox-LDL及LDL-IC水平明显升高,可能参与动脉粥样硬化的发生、发展过程。

关键词: 低密度脂蛋白; 氧化修饰; 肾病综合征; 动脉粥样硬化
中图分类号:Q513 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)05-0352-04
The level of plasma oxidized low-density lipoprotein and its immune complex in children with nephrotic syndrome
WANG Junjun, HAN Aizhong, LIU Xiaochuan, ZHANG Chunni
Institute of Laboratory Medicine Science of People's Liberation Army, Nanjing General Army Hospital,Jiangsu Nanjing 210002, China
Abstract
Objective

To investigate the level of plasma oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) and its immune complex (LDL-IC) in children with nephrotic syndrome (NS).

Methods

Plasma ox-LDL and LDL-IC levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 106 children with NS in active phase, 42 children with NS in convalescent period and 155 healthy controls, and their lipid levels were also determined.

Results

Compared to the controls, ox-LDL levels both significantly increased in children with NS in convalescent period and active phase (P<0.05,P<0.01). Furthermore,the ox-LDL level in children with NS in active phase was higher than that in children with NS in convalescent period (P<0.01). The LDL-IC level in children with NS in active phase was significantly higher than that in the controls and children with NS in convalescent period (P<0.01). The ox-LDL and LDL-IC levels were positively related with total cholesterol(TC), triglyceride(TG), low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) and urea,while they were negatively related with albumin(Alb) in children with NS. After steroid therapy, the Alb level increased,and the ox-LDL, LDL-IC, TC,TG and LDL-C levels all significantly decreased in children with NS in active phase.

Conclusions

Ox-LDL and LDL-IC levels increase in children with NS,and may play an important role in atherosclerosis.

Keyword: Low-density lipoprotein; Oxidative modification; Nephrotic syndrome; Atherosclerosis

氧化修饰脂蛋白在动脉粥样硬化(AS)发生、发展中起着重要作用。血浆氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其自身抗体水平是预测AS性心血管疾病发生的有力指标。ox-LDL除经清道夫受体途径被巨噬细胞吞噬外, 还可与自身抗体结合, 形成低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC), 具多重、高效致AS作用, 且LDL-IC水平高低亦是AS的预测指标[1]。儿童肾病综合征(NS)对类固醇治疗敏感, 主要病理表现为微小病变性肾小球肾炎。NS患者具有明显的脂代谢异常, 肾小球毛细血管壁通透性损伤导致体内氧自由基增加, 氧化、抗氧化活性失衡等, 进而导致脂蛋白被高度氧化, 促进AS的发生、发展[2]。我们分析了不同阶段儿童NS患儿ox-LDL及LDL-IC水平。

材料和方法
一、样本来源

选择2008年1月至12月在南京军区南京总医院小儿科住院确诊的原发性NS患儿148例, 均对类固醇治疗敏感。活动期NS患儿106例, 男75例, 女31例, 年龄1~14岁; 恢复期NS患儿42例, 男29例, 女13例, 年龄1~13岁; 对其中13名活动期NS患儿类固醇治疗效果进行分析(平均治疗28 d)。健康对照组155名, 其中男104名、女51名, 年龄1~14岁, 经常规体检、心电图检查等排除血脂异常、高血压、肾脏病、糖尿病或有任何AS临床事件者。各组之间性别、年龄匹配, 均具有可比性。禁食12 h后采集血液样本, 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝, -70 ℃保存待测。

二、方法

1. 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定ox-LDL及LDL-IC ox-LDL采用以自制兔抗人ox-LDL为包被抗体, 酶标抗载脂蛋白B (apo B)采用检测抗体的ELISA测定。使用的ox-LDL抗体与天然LDL之间均无交叉免疫性; 抗apo B与天然LDL、ox-LDL均具有免疫反应性。采用ox-LDL为参考标准, Lowry法测定蛋白质含量[3]。LDL-IC采用以抗人IgG为包被抗体, 酶标抗apo B采用检测抗体的ELISA测定, 参考血清浓度定为1个相对单位(AU)[4]。

2. 血脂及脂蛋白测定 总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)测定用Randox公司试剂盒, 罗氏公司cfas校准品校准; 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定采用日本第一化学试剂及脂蛋白校准品。测定仪器为HITACHI 7600生化分析仪。

3. 肾功能测定 白蛋白(Alb)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)测定用Randox公司试剂盒, 测定仪器为HITACHI 7600生化分析仪。尿蛋白测定采用干化学分析法。

三、统计学方法

数据处理采用SPSS 13.0软件。正态分布数据以 x-± s表示, 偏态分布数据采用中位数(范围)表示。多组间比较采用单因素方差分析, 方差齐时两两组间比较采用LSD检验, 方差不齐时采用Tamhane's T2检验; 单独两组间的比较用Student T检验。偏态分布数据经对数转换后分析。变量间相关性采用非参数Spearman秩相关分析。P< 0.05表示差异有统计学意义。

结 果
一、儿童NS患儿ox-LDL、血脂和肾功能水平

活动期、恢复期NS患儿ox-LDL、TC、TG、LDL-C和HDL-C水平均明显高于健康对照组, 除HDL-C外, 活动期NS患儿各项指标水平均高于恢复期。活动期NS患儿LDL-IC水平高于恢复期NS患儿和健康对照组, 而后2组间无差异。NS患儿肾功能水平变化见表1。

二、ox-LDL与各血脂、肾功能指标间的相关性

ox-LDL、LDL-IC分别与TC、TG、LDL-C及Urea呈高度正相关, 与Alb呈负相关。LDL-IC与尿蛋白呈正相关。ox-LDL与LDL-IC呈高度正相关。见表2。

三、儿童NS患儿治疗前后ox-LDL、血脂和肾功能水平

活动期NS患儿经类固醇治疗后, ox-LDL、血脂和肾功能水平的变化见表3。Alb、ox-LDL、LDL-IC、TC、TG和LDL-C均发生明显改变, 其中Alb变化最为显著。

表1 儿童NS患儿ox-LDL、LDL-IC、血脂和肾功能水平
表2 儿童NS患儿Ox-LDL与各血脂、肾功能指标间的相关性
表3 儿童NS患儿治疗前后ox-LDL、血脂和肾功能水平( x-± s)
讨 论

近年研究显示, AS病变早在儿童期就开始发生, 新生儿和儿童血循环中均存在氧化脂蛋白及其循环免疫复合物, 且脂代谢异常、氧化修饰与NS患者AS的发生、发展相关联[5]; 对儿童和青少年NS患儿脂代谢障碍及并发症进行及早防治可显著提高预期寿命。

类固醇敏感性儿童NS患儿脂质表型为TC、LDL-C、TG、apo A-I和apo B水平升高, 而HDL-C变化报道不一[6]。本研究结果亦表明, 活动期、恢复期NS患儿TC、TG、LDL-C和HDL-C水平均高于对照组, 且活动期高于恢复期。蛋白尿导致NS患者低Alb血症及血浆胶体渗透压升高, 刺激肝脏多种蛋白合成。目前尚不清楚NS患者脂代谢异常是蛋白尿引起的直接后果或继发于蛋白尿的其他效应。高TC水平与因肾脏病变引起的甲羟戊酸(胆固醇前体)代谢损伤有关。甲羟戊酸堆积、羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)活性增强以及卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性下降等共同导致肝脏胆固醇合成增加。NS患者高LDL-C水平至少由2种独立的途径引起, 一是因肝内胆固醇蓄积引起LDL受体减少, 导致LDL分解代谢降低。另外NS患者高胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平介导的HDL中胆固醇酯与极低密度脂蛋白(VLDL)和LDL中TG的交换增加, 也加速LDL的合成。NS患者高TG水平主要是由于VLDL分解代谢减少, 而不是因其分泌增加引起。NS患者HDL-C代谢机制尚不清楚, 其水平表现为增加、正常或下降均见报道[6]。

NS患者肾小球毛细血管壁通透性损伤使体内氧自由基增加, 氧化、抗氧化活性失衡等, 进而导致脂蛋白被高度氧化。本研究结果显示, 儿童NS患儿ox-LDL、LDL-IC水平同其他脂质变化相似, 活动期、恢复期组均高于健康对照组, 且活动期高于恢复期。El-Melegy等[2]发现NS患者血清ox-LDL水平升高; 而Alb、谷胱甘肽过氧化物酶及维生素C、A、E等抗氧化剂水平下降。Alb是一种高效的抗氧化剂, 尽管不能阻断链式氧化反应, 但对脂蛋白的氧化具有保护作用。本研究结果也证实ox-LDL、LDL-IC与Alb呈高度负相关。NS患者脂质异常与肾脏病变程度密切相关, 而高水平的LDL意味着更多的LDL有机会被氧化, 同时高TG、CETP水平又进一步促进ox-LDL形成。以上可能是本研究中ox-LDL、LDL-IC水平与TC、TG、LDL-C等相关的原因。

肾脏病变导致脂代谢障碍, 而脂代谢异常又加速了NS患者原有的肾功能损伤[6]。脂质和脂蛋白的过氧化反应过程中释放大量活性氧, 再次损伤上皮细胞结构的完整性和肾小球的通透性, 进一步促进蛋白尿形成。对NS患者宜采用激素、抗氧化和降脂结合治疗。本研究中活动期NS患儿经类固醇治疗后, 随着病情改善, ox-LDL、LDL-IC及脂质水平发生明显改变。可见ox-LDL水平不仅是AS的危险因素, 可同时反映NS患者脂代谢异常和体内氧化、抗氧化状态, 且与病情改善相关。因此, 监测NS患者ox-LDL水平变化尤为必要。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 汪俊军. 血浆氧化LDL水平与动脉粥样硬化的关系[J]. 临床检验杂志, 2003, 21(1): 48-50. [本文引用:1]
[2] El-Melegy NT, Mohamed NA, Sayed MM. Oxidative modification of low-density lipoprotein in relation to dyslipidemia and oxidant status in children with steroid sensitive nephrotic syndrome[J]. Pediatr Res, 2008, 63(4): 404-409. [本文引用:2] [JCR: 2.673]
[3] 周助权, 汪俊军, 付丽, 等. 氧化、丙二醛修饰低密度脂蛋白的ELISA检测法及临床应用[J]. 临床检验杂志, 2007, 25(6): 404-406. [本文引用:1]
[4] Wang J, Qiang H, Zhang C, et al. Detection of IgG-bound lipoprotein(a) immune complexes in patients with coronary heart disease[J]. Clin Chim Acta, 2003, 327(1-2): 115-122. [本文引用:1] [JCR: 2.85]
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