引用本文
孙宏华, 石凌波, 康红, 胡远明, 谢进进, 沙瑶. 应用NCCLS EP10-A2文件分别对自建和配套生化检测系统进行初步性能评价. 25(5): 345-348
SUN Honghua, SHI Lingbo, KANG Hong, HU Yuanming, XIE Jinjin, SHA Yao. Preliminary functional evaluation on self-built and matching biochemistry detection system by NCCLS EP10-A2. Labratory Medicine, 25(5): 345-348  
Permissions
Copyright©2010, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
应用NCCLS EP10-A2文件分别对自建和配套生化检测系统进行初步性能评价
孙宏华, 石凌波, 康红, 胡远明, 谢进进, 沙瑶
广州中医药大学祈福医院检验科,广东 广州 511495

作者简介：孙宏华,女,1971年生,学士,副主任技师,主要从事临床检验工作。

基金:广州番禺区科技局基金资助项目（2007-Z-74-1）
摘要
目的

分别对自建生化检测系统(简称自建系统)和配套生化检测系统(简称配套系统)进行初步性能评价。

方法

依照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP10-A2文件,使用自建系统(OLYMPUS AU 400生化分析仪、罗氏cfas校准品及国产试剂)和配套系统(OLYMPUS AU 400生化分析仪、OLYMPUS校准品及OLYMPUS原装试剂)测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(Glu)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)4个项目,计算其偏差、总不精密度及其截距、斜率、非线性、互染率、漂移性,并与各项目对应设定值作比较。

结果

自建系统:ALT 的低值偏差和Glu的中、高值偏差超出允许范围,ALT的低值总不精密度超出允许范围,其余项目的偏差和总不精密度均在允许范围之内。GGT、ALT的非线性、截距和斜率以及Glu的斜率差异有统计学意义,其余项目的截距、斜率、非线性、互染率、漂移性差异均无统计学意义。配套系统:ALT的低值总不精密度超出允许范围,其余项目的偏差和总不精密度均在允许范围之内。GGT的截距和斜率差异有统计学意义,其余项目的截距、斜率、非线性、互染率、漂移性差异均无统计学意义。

结论

无论是使用自建系统测定AST、GGT、ALT,还是使用配套系统检测AST、Glu、GGT、ALT,偏差都在允许范围内,总不精密度小于美国临床实验室改进法案修正案(CLIA'88) 能力验证计划中分析质量要求规定的总允许误差的1/3,互染率较低,稳定性较好。自建系统检测Glu的准确度有待加强改善。

关键词: 天门冬氨酸氨基转移酶; 丙氨酸氨基转移酶; γ-谷氨酰转移酶; 葡萄糖; 检测系统; 评价
中图分类号:Q555 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)05-0345-04
Preliminary functional evaluation on self-built and matching biochemistry detection system by NCCLS EP10-A2
SUN Honghua, SHI Lingbo, KANG Hong, HU Yuanming, XIE Jinjin, SHA Yao
Department of Clinical Laboratory,Clifford Hospital,Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangdong Guangzhou 511495, China
Abstract
Objective

To evaluate the preliminary function on self-built and matching biochemistry detection systems respectively.

Methods

The self-built detection system (OLYMPUS AU 400 biochemistry analyzer, Roche cfas calibrator and homemade reagents) and the matching detection system (OLYMPUS AU 400 biochemistry analyzer, OLYMPUS calibrator and OLYMPUS reagents) were applied into the determination of aspartate aminotransferase (AST), glucose (Glu), gamma-glutamyltransferase (GGT) and alanine aminotransferase (ALT) according to the Protocol EP10-A2 provided by National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). The deviations, total imprecision, intercepts, slope rates, nonlinearities, carryovers and drifts were calculated and compared with the range of set value.

Results

For the data of self-built system, the low value of ALT, middle and high values of Glu in deviations and low value of ALT in total imprecision exceeded permissive ranges,and the other deviations and total imprecision were all in the permissive ranges, among which the nonlinearities, intercepts and slope rates of GGT and ALT showed significant difference, as well as the slope rate of Glu. No significant difference was showed in other intercepts, slope rates, nonlinearities, carryovers and drifts. For the data of matching system, the low value of ALT in total imprecision was out of the permissive range with the other deviations and total imprecision were all in the permissive ranges. The intercept and slope rate of GGT had significant difference with the other intercepts, slope rates, nonlinearities, carryovers and drifts showing no significant difference.

Conclusions

The self-built system, which is applied to detect AST, GGT and ALT, and matching biochemistry system, which is applied to detect AST, Glu, GGT and ALT, have shown the deviations in permissive ranges. The total imprecisions are all less than 1/3 the Clinical Laboratory Imptovement Amendments 88 (CLIA'88) with low carryovers and good stabilities. Furthermore, the accuracy of self-built system used to detect Glu should be improved further.

Keyword: Aspartate aminotransferase; Alanine aminotransferase; Gamma-glutamyltransferase; Glucose; Detection system; Evaluation

完成一个项目检测涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序等的组合为检测系统[1]。临床生化检测的准确性有赖于检测系统的好坏。严格来讲, 检测系统应该具有可溯源性, 但国内多数实验室目前仍是以自建生化检测系统(简称自建系统)为主。为了了解自建系统和配套生化检测系统(简称配套系统)的性能和差距, 我们应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP10-A2文件[2], 以天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(Glu)、γ -谷氨酰基转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)4个项目为例对其进行了初步评价。

材料和方法
一、 材料

1.自建系统 仪器为日本OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪。AST 、ALT试剂为上海复旦张江生物医药股份有限公司生产(批号:080701、080801), Glu试剂为中生北控生物科技股份有限公司生产(批号:080191.200807), GGT 试剂为广州华鑫科技有限公司生产(批号:080710)。校准品为罗氏cfas 校准品(批号:10759350 190)。

2.配套系统 仪器为日本OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪。AST试剂(批号:6545)、Glu试剂(批号:6643)、GGT试剂(批号:6230)、 ALT试剂(批号:6461)均为奥林巴斯诊断股份有限公司生产。校准品为OLYMPUS校准品(批号:66300)。

3.质控物 采用英国朗道公司生产的质控血清。中值批号:460UN/4 ( HN1530 ); 高值批号:292UE/1(HE1532)。

二、 测定样本

低值样本:选择患者血清, 结果尽量接近参考值的低限; 高值样本:选择患者血清, 结果尽量接近线性范围的高限; 中值样本:将上述高值样本与低值样本按1∶ 1准确量取、混合而得。将各浓度样本以每管0.2 mL进行分装, 除ALT样本保存于2~4 ℃冰箱外, 其余样本于-20 ℃冰冻保存。高、低浓度每天取3管, 中值每天取4管, 测定前室温放置30 min, 用前充分混匀。

三、方法

校准仪器、测定质控, 质控结果在控后按常规操作。参数的设置和操作程序参照试剂说明书。测定方法:每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的顺序测定各浓度样本, 共测定5 d。其中第1个中值作为测定起始用, 不作统计, 后9个数据中的任何一个不合格, 都须弃掉该批全部数据, 重新测定[3]。

四、结果的判断标准

1. 设定值 高值和低值样本由广州金域医学检验中心[通过美国病理家学会(CAP)认证]进行赋值, 中值为高值与低值之和的1/2。

2. 允许偏差 参照《全国临床检验操作规程》(第3版)[4]。

3. 允许不精密度 小于美国临床实验室改进法案修正案(CLIA'88) 能力验证计划中分析质量要求规定的总允许误差的1/3。

4.截距、斜率、非线性、互染率、漂移性 严格按照NCCLS EP10-A2文件计算。

五、统计学方法

用Excel软件进行数据处理, 并进行t检验。

结 果
一、偏差分析

以各浓度5 d的测定结果均值与其对应设定值计算偏差, 判断检测系统的偏差可接受性见表1~4。

二、总不精密度分析

按照文件提供的方法, 计算总不精密度, 判断检测系统的精密度可接受性见表1~4。

三、截距、斜率、非线性、互染率、漂移性分析

见表1~4。

表1 AST偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、互染率、漂移性分析
表2 Glu偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、互染率、漂移性分析
表3 GGT偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、互染率、漂移性分析
表4 ALT偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、互染率、漂移性分析
讨 论

《定量临床检验方法的初步评价:批准指南》(EP10-A2)文件是NCCLS为临床分析方法或仪器性能初步评价制定的标准(包括实验设计和数据分析)。该文件具有操作简单、时间短、效率高、可操作性强等优点。本研究应用EP10-A2文件对自建和配套系统的准确度(偏差、截距、斜率)、总不精密度、非线性、互染率、漂移性等多方面性能进行了初步评价。

试验过程中必须注意一些细节:比如中值样本的配制应严格按照文件要求, 准确量取等体积的高值和低值样本, 否则影响结果的线性。样本的储存温度应该根据各种酶的特性[4]来选择, 否则影响结果的精密度和准确度。ALT不耐融化, 冷藏的酶活性比冷冻的更稳定, 因此ALT样本需置于2~4 ℃冰箱保存。低值样本范围的选择以接近参考值的低限为宜。如低值范围过低, 造成敏感性过低, 将不能真实地反映检测系统的精密度。

虽然自建系统的ALT低值偏差和AST、ALT的低值总不精密度以及配套系统的ALT低值总不精密度均超出允许范围, 但因为AST、ALT的低值没有临床意义, 因此可以认为除了Glu的中值和高值偏差超出允许范围外, 自建系统测定AST、GGT、ALT的偏差都在允许偏倚范围之内, 配套系统检测AST、Glu、GGT、ALT的偏差也都在允许偏倚范围之内。自建系统和配套系统测定AST、Glu、GGT、ALT的总不精密度均小于CLIA'88允许误差的1/3。

自建系统检测GGT、ALT的非线性有明显差异, 所以截距和斜率虽然有差异却已失去其实际意义, 而偏差又在允许偏倚范围内, 因此我们认为其准确度还是可以接受的。Glu的测定结果呈线性, 斜率有明显差异, 且中、高值偏差又超出允许范围, 表明其准确度存在比例误差。配套系统检测GGT的结果呈线性, 虽然截距和斜率有明显差异, 但偏差也在允许偏倚范围内, 而且恒定误差仅为0.846 U/L, 比例误差为6.5%, 误差较小, 因此认为其准确度也是可以接受的。自建系统和配套系统测定AST 的截距、斜率、互染率、非线性、漂移性均无差异, 表明自建系统互染率低、结果呈线性、精密度较好。

使用自建系统(OLYMPIUS AU 400全自动生化分析仪、罗氏cfas校准品及国产试剂)检测AST、GGT、ALT和使用配套系统(OLYMPUS AU 400生化分析仪、OLYMPUS校准品及OLYMPUS原装试剂)测定AST、Glu、GGT、ALT的偏差、总不精密度、互染率、非线性、漂移性等均符合初步要求, 可以应用于临床。自建系统检测Glu的准确度(偏差、斜率)有待于后续进一步调整。我们将参照NCCLS EP9、EP5、EP6等文件, 对检测系统进行更细致、更全面的评价。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 冯仁丰. 临床检验质量管理技术基础[M]. 上海: 上海科学技术文献出版社, 2007: 37. [本文引用:1]
[2] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods; approved guideline[S]. EP10-A2, NCCLS, 2002. [本文引用:1]
[3] 高月亭, 陈涛, 刘汉欣, 等. 应用EP10-A初步评价XI-921型电解质分析仪[J]. 现代临床医学生物工程学杂志, 2006, 12(6): 507-509. [本文引用:1]
[4] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 79-81, 115-116. [本文引用:2]