引用本文
唐健辰. 抗凝剂EDTA-K2致血小板假性减少探讨 . 25(4): 286-287
TANG Jianchen. Study on pseudothrombocytopenia caused by anticoagulant EDTA-K2 . Labratory Medicine, 25(4): 286-287  
Permissions
Copyright©2010, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
抗凝剂EDTA-K2致血小板假性减少探讨
唐健辰
上海市金山区金山卫镇社区卫生服务中心,上海 201512

作者简介：唐健辰,男,1965年生,学士,主管技师,主要从事临床检验及医院管理工作。

摘要
目的

探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝剂对假性血小板减少(PTCP)的影响及解决方法。

方法

对10例PTCP患者及30名健康体检者在EDTA-K2抗凝静脉血放置1 h后,用全自动血液分析仪进行分析,同时用手工计数血小板(PLT)作为参考值,并以不加抗凝剂的指血直接稀释后在全自动血液分析仪上测定。

结果

EDTA-K2抗凝血PLT计数结果与手工法相比,差异有统计学意义( P<0.001); EDTA-K2抗凝PLT计数结果与不使用抗凝剂指血相比,差异有统计学意义( P<0.01);而手工法PLT计数结果与不使用抗凝剂指血结果相比,差异无统计学意义( P>0.05),患者加EDTA-K2抗凝血作涂片瑞-姬染色,发现血片中有大量PLT聚集,聚集的PLT大小不一、数量不等,而不加抗凝剂的患者指血,则无PLT聚集现象。

结论

EDTA-K2对PLT可产生聚集作用,引起PTCP。

关键词: 血小板假性减少; 血小板计数; 乙二胺四乙酸
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)04-0286-02
Study on pseudothrombocytopenia caused by anticoagulant EDTA-K2
TANG Jianchen
Shanghai Jinshan Weizhen Community Health Service Center,Shanghai 201512,China
Abstract
Objective

To study the influence and solution of pseudothrombocytopenia (PTCP) caused by anticoagulant ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)-K2.

Methods

The EDTA-K2 anticoagulating venous blood specimens were collected from 10 EDTA-dependent PTCP patients and 30 healthy subjects. Platelet (PLT) counts were determined by automated hematology analyzer and by manual counting, which provided the reference values. Capillary blood specimens without anticoagulant were directly diluted and detected by the automated hematology analyzer.

Results

There was significant statistical difference in the results of PLT counts between specimens with anticoagulant EDTA-K2 and manual method ( P<0.001), and between specimens with anticoagulant EDTA-K2 and specimens without any anticoagulant ( P<0.01), but no statistical difference between the manual method and capillary blood method without anticoagulant ( P>0.05). Lots of aggregated PLT were appeared in the EDTA-K2 anticoagulating specimens stained by Wright-Giemsa, while there was no aggregated PLT observed in capillary blood specimens.

Conclusions

EDTA-K2 can accelerate the PLT aggregation and thus causes the PTCP.

Keyword: Pseudothrombocytopenia; Platelet count; Ethylenediamine tetraacetic acid

近年来, 随着全自动血液分析仪的普及, 全血细胞计数的精密度和准确度明显提高。而应用全自动血液分析仪时, 最为广泛采用的抗凝剂是被国际血液学标准化委员会(ICSH)认定的乙二胺四乙酸(EDTA)盐[1]。由于EDTA盐有时能引起血小板(PLT)聚集, 导致用EDTA-K2作为抗凝剂时出现PLT假性偏低现象, 即EDTA依赖性血小板假性减少症(PTCP)。这种假性的PLT计数会导致一些不必要的辅助检查, 甚至引起误诊、误治[2]。我们通过对10例PTCP进行了分析讨论, 以期选择科学、可行的检测方法, 排除干扰因素, 准确报告PLT计数结果。

材料和方法
一、资料

上海市金山区金山卫镇社区卫生服务中心门诊病例10例, 其中男7例、女3例, 年龄2~73岁。其中上呼吸道感染患者6例, 高血压病患者1例, 类风湿关节炎患者1例, 前列腺炎患者1例, 剖宫产术后患者1例。该10例患者均无皮肤瘀点、瘀斑、鼻出血和胃肠道及泌尿系统出血等, 但血常规检查均有PLT减少明显。对照者30名, 男20名, 女10名, 系健康体检者。

二、材料

Sysmex-2100血液分析仪及配套试剂; Olympus公司双目显微镜; 抗凝剂为EDTA-K2; 瑞-姬染色液。

三、方法

1. 仪器法 采集患者及对照者静脉血2.0 mL, 加入EDTA-K2抗凝管中, 室温放置1 h后, 在Sysmex-2100血液分析仪上按操作规程操作[3]。

2. 手工法 采集新鲜指血20 μ L, 加入加有0.38 mL许汝和稀释液的试管中, 充分混匀, 置显微镜下目视计数PLT。将此结果作为PLT计数参考值。

3. 不加抗凝剂法 指血不使用任何抗凝剂直接稀释后在Sysmex-2100血液分析仪上用预稀释程度作测定。

4. 染色法 指血与加EDTA-K2抗凝血作血涂片, 自然晾干后, 进行瑞-姬染色, 于显微镜下观察PLT聚集情况。

四、统计学方法

数据以 ± s表示, 组间差异采用t检验。

结果

一、PTCP患者EDTA-K2抗凝血PLT的计数结果明显低于手工法和不加抗凝剂的指血结果(P< 0.001); 而手工法PLT计数结果与不加抗凝剂的指血PLT计数结果相比, 差异无统计学意义(P> 0.05), 见表1。

表1 PTCP患者3种方法的PLT、白细胞计数值(± s)

二、30名对照者结果见表2。

表2 对照者3种方法的PLT、白细胞计数值(± s)

三、对10例患者的EDTA-K2抗凝血作血涂片, 瑞-姬染色后发现血片中有大量的PLT聚集, 聚集的PLT大小不一, 数量不等; 而患者未加抗凝剂的指血直接涂片作瑞-姬染色, 发现PLT分布散开, 无PLT聚集现象。

讨论

血液分析仪在各级医疗机构中已广泛应用, 与手工法相比具有操作迅速、准确等优点, 但检测时若用EDTA盐作血液抗凝剂时, 会引起PLT聚集, 出现PLT假性减少, 其发生率为0.07%~1.0%[4]。究其原因, 系个别患者PLT可在EDTA螯合剂中于10 s内聚集, 而血液分析仪会误将凝集的PLT当作红细胞或白细胞计数。

据文献报道[5], PLT聚集的机制是由于EDTA作为抗凝剂的前提下, 出现了免疫介导的血液中冷抗PLT自身抗体, 导致PLT互相凝集。这种EDTA依赖的冷抗PLT自身抗体直接作用于PLT膜糖蛋白IIb/IIa上, 同时这种PLT结合的自身抗体Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合, 出现“ 卫星” 现象。此现象也依赖于血液凝固时间及室内温度, 即抗凝时间越长, 室内温度越低, 此现象越严重。本研究中有1例为类风湿关节炎患者, 可能存在某种自身免疫抗体, 导致PLT假性减少; 个别上呼吸道感染者、前列腺炎患者, 引起体内免疫反应, 也推测导致PLT假性减少, 尤其是自身免疫性疾病、肿瘤、肺心病、孕妇、晚期肝病患者。因此, 若实验室血液分析仪检测PLT显著减少, 应酌情考虑使用枸橼酸钠抗凝或通过仪器预稀释功能检测患者指血, 或用手工法计数。同时与临床取得联系, 观察患者有无瘀点、瘀斑及其他出血现象, 并加做凝血酶原时间(PT)、活化部份凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)等项目, 以排除出血倾向。从而给临床提供可靠的诊断依据, 以免误诊, 或做一些不必要的针对PLT减少的检查与治疗, 增加患者负担。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 徐志明, 祁慧, 李丰平. 乙二胺四乙酸三钾导致血小板假性减少分析[J]. 检验医学与临床, 2008, 5(9): 539-540. [本文引用:1]
[2] 陈虹. EDTA-K2抗凝可引起血小板假性减少2例分析[J]. 中国医药指南(学术版), 2008, 6(12): 160. [本文引用:1]
[3] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 11. [本文引用:1]
[4] 孙杨, 丘江. 抗凝剂乙二胺四乙酸致血小板假性减少[J]. 检验医学与临床, 2008, 5(8): 504. [本文引用:1]
[5] 林志远, 黄建玲. EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少的探讨[J]. 黑龙江医学, 2008, 32(4): 255-256. [本文引用:1]