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郭永铁. 尿pH值对尿β2-微球蛋白检测的影响及其对策 . 25(3): 231-232
  
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尿pH值对尿β2-微球蛋白检测的影响及其对策
郭永铁
天津中医药大学第一附属医院检验科,天津 300193

作者简介：郭永铁,男,1971年生,学士,主管技师,主要从事临床免疫学研究。

摘要
目的

探讨pH值对尿β2-微球蛋白(β2-MG)检测的干扰及应对措施。

方法

收集32例肾病患者的尿样本,记录pH值,将同一份尿样本分作5份:未处理的新鲜尿、以磷酸盐缓冲液(PBS,pH值7.0)1∶1稀释的新鲜尿(上述2份样本立即冰冻保存)、以PBS 1∶1稀释室温再放置2 h的尿液、室温放置2 h再用PBS 1∶1稀释的尿液、室温放置2 h未作处理的尿液。全部尿样本冰冻保存1周后采用放射免疫法测定β2-MG的含量。

结果

室温放置2 h后用PBS稀释和未处理的 pH值<6的尿样本β2-MG含量均显著低于新鲜尿,其余组与新鲜尿无差异。

结论

使用PBS能够准确校正尿的pH值,且不影响β2-MG的检测。

关键词: β2-微球蛋白; pH值; 磷酸盐缓冲液
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)03-0231-02

我们完全按照实际工作的流程, 观察尿液样本送检过程中pH值变化对尿β 2-微球蛋白(β 2 -microglobulin, β 2-MG)检测的影响, 并与用磷酸盐缓冲液(PBS , pH值7.0)校正pH值后尿β 2-MG的检测结果进行比较。

材料和方法
一、研究对象

本院住院或门诊已确诊的32例肾病患者。将患者晨起留取的新鲜尿分别用5种方法处理:(1)未作处理; (2)用PBS 1∶ 1稀释; (3)用PBS 1∶ 1稀释后室温静置2 h; (4)室温静置2 h后再用PBS 1∶ 1稀释; (5)室温静置2 h后不作处理。5份尿样本处理完后立即冰冻保存。全部尿液在处理前, 使用广范围pH值试纸测定pH值(pH值> 6的2例、pH值< 6的30例), 并对号记录。所有用PBS稀释后的尿液, 经pH值试纸检测, pH值均达到7。以第1份样本留取的时间作为开始, 1周后样本取出复溶检测。

二、方法与仪器

测定采用放射免疫分析法。试剂盒由天津协和医药公司提供, 严格按照说明书操作。仪器采用北京261厂BH-6020型γ 放射免疫计数器。

三、统计学方法

稀释的尿β 2-MG的测定结果乘以2后汇入计量资料, 计量数据采用 x-± s表示。应用SPSS 13.0统计软件, 应用单样本的K-S检验进行数据的正态性检验, 组间样本均数之间的显著性分析采用F检验与Q检验进行统计, P< 0.01表示差异有统计学意义。

结果

经K-S检验全部数据均可认定为近似正态分布。

经不同方法处理的尿β 2-MG检测结果见表1。原始pH值< 6的用PBS 1∶ 1稀释的和用PBS 1∶ 1稀释后室温静置2 h的尿样本β 2-MG 检测结果与未作处理的新鲜尿的检测结果差异均无统计学意义(P> 0.05)。室温静置2 h后再用PBS 1∶ 1稀释的和室温静置2 h后不作处理的尿样本的β 2-MG检测结果均低于未作处理的新鲜尿(P=0.000、P=0.000)检测结果。室温静置2 h的尿样本的β 2-MG比新鲜尿降低56.5%左右, 而室温静置2 h后再用PBS 1∶ 1稀释的尿样本β 2-MG结果与室温静置2 h后不作处理的尿样本的检测结果差异无统计学意义(P> 0.05)。原始pH值> 6的尿样本只有2例, 不宜作统计学分析。

表1 不同处理方法尿β 2-MG的检测结果(mg/L)
讨论

国内学者[1]指出在pH值5.5时尿β 2-MG即开始迅速降解, 因而提出尿β 2-MG可由检测意义相近的尿α 1-微球蛋白(α 1-microglobulin, α 1 -MG)、尿视黄醇结合蛋白(retinol binding protein, RBP)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C, Cys C)取代[2]。但基于β 2-MG主要由淋巴细胞合成的, 几乎存在于所有有核细胞的表面, 可客观地反映细胞增生破坏的状况, 是肿瘤最实用的辅助诊断与疗效观察指标之一[3], 而且尿β 2-MG对血β 2-MG临床价值的补充作用是无可替代的。同时尿β 2-MG还是反映肾小管近曲小管功能的首选指标。因此, 尿β 2-MG仍具有相当的临床应用价值。

如何消除酸性尿中β 2-MG的不稳定性呢, 石泉等[4]采用1 mol/L NaOH校正尿液的pH值至7~9。结果显示, pH值< 6而未校正pH值的尿β 2-MG含量显著低于校正组。王蕾等[2]亦采用1 mol/L NaOH校正pH值后检测尿β 2-MG, 结论与石泉相似, 同时观察了样本保存时间、温度对β 2-MG检测的影响。本研究显示不校正pH值的冰冻保存的新鲜随机尿β 2-MG也不发生降解, 而加PBS的尿样本处于中性环境, β 2-MG能够稳定保存。pH值< 6的尿样本室温放置2 h后的β 2-MG含量明显低于新鲜尿, 此时加缓冲液校正pH值已经于事无补, 提示β 2-MG在酸性环境中的降解是具有时间依赖性的。本研究显示β 2-MG在pH值< 6的环境中室温静置2 h后降低56.5%, 与王蕾等[2]观察到的β 2-MG在pH值< 6的环境中室温48 h后下降49%的结果近似。本研究32例患者中全部是慢性肾病患者, 而肾小管近曲小管功能障碍常常造成HC O3-排泄增加, 导致尿液的pH值降低。因此, 校正pH值对肾病患者的尿β 2-MG测定非常必要。本研究应用pH值为7.0的PBS缓冲液纠正pH值, 避免了强碱加入后可能造成瞬间局部的碱性过强, 使部分蛋白沉淀变性。PBS校正后的尿pH值一致, 保持了实验的均一性, 也不会因为纠正过度造成pH值过高, 抑制抗原抗体反应。其缺点是稀释可能会造成正常或轻度增高的尿β 2-MG结果计算上的误差。

本研究从实际工作的角度设计实验方案:考虑到临床实验室中常备的是广范围pH值试纸, 目测精度较低, 因此将是否需要校正pH值的标准定为6。本研究的尿样本从离体到送达实验室大约需用2 h, 此过程可以认为是在室温的条件下进行的, 所以只将尿pH值、室温、放置2 h作为实验影响因素进行比较。同时因为本实验室的尿β 2-MG检测每周进行1次, 故1周内收集的样本量不足以对pH值> 6的尿β 2-MG进行统计分析。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 王蕾, 庄亦晖, 高锋. 血清视黄醇结合蛋白在肾脏疾病中的应用[J]. 检验医学, 2004, 19(2): 89-92. [本文引用:1]
[2] 王蕾, 刘华, 符玉瑛, 等. 尿液贮存温度、时间及pH值对尿半胱氨酸蛋白酶抑制剂C稳定性的影响[J]. 检验医学, 2005, 20(3): 224-226. [本文引用:3]
[3] 黄然欣, 李晓林, 黄晓春, 等. 非霍奇金淋巴瘤血清乳酸脱氢酶和β2微球蛋白水平及其临床意义[J]. 中国现代医学杂志, 2008, 18(10): 1357-1359. [本文引用:1]
[4] 石泉, 徐兆芳, 宁芬, 等. 尿液pH值对α1-微球蛋白、β2-微球蛋白测定的影响[J]. 淮海医药, 2007, 25(5): 434-435. [本文引用:1]