引用本文
程薇, 钱利强, 华春珍, 张烛仙, 李建平, 俞惠民. 儿童呼吸道标本分离的流感嗜血杆菌耐药模式研究. 25(3): 192-195
CHENG Wei, QIAN Liqiang, HUA Chunzhen, ZHANG Zhuxian, LI Jianping, YU Huimin. Research on antibiotics resistance patterns of Haemophilus Influenzae isolated from children's respiratory tract . Labratory Medicine, 25(3): 192-195  
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儿童呼吸道标本分离的流感嗜血杆菌耐药模式研究
程薇1, 钱利强1, 华春珍1, 张烛仙2, 李建平3, 俞惠民3
1.杭州师范大学临床医学院,浙江 杭州 310018
2.杭州师范大学医学院附属医院,浙江 杭州 310015
3.浙江大学医学院附属儿童医院,浙江 杭州 310003

通讯作者：华春珍,联系电话：0571-88303601。

作者简介：程薇,女,1986年生,主要从事微生物检验研究。

摘要
目的

了解儿童来源的流感嗜血杆菌(Hi)分离株对常用抗菌药物的敏感性和体外耐药模式,为临床合理用药提供参考。

方法

对杭州市2006年12月至2007年6月经V因子、X因子和V+X因子试验鉴定的152株Hi用头孢硝噻酚法检测β-内酰胺酶,用纸片扩散法检测其对12种抗菌药物的敏感性,并用E-test法检测氨苄西林(AMP)的最低抑菌浓度(MIC)。

结果

152株菌株中,对AMP的敏感率为74.3%,耐药率为22.4%,检测AMP对141株菌株的MIC,MIC50为0.250 μg/mL,MIC90为12 μg/mL。34株β-内酰胺酶阳性,产酶率为22.4%,β-内酰胺酶阴性的耐AMP株共2株。菌株对头孢哌酮-舒巴坦(CFS)、亚胺培南(IMP)、阿莫西林-克拉维酸(AMC)、头孢噻肟(CXT)、头孢曲松(CRO)、利福平(RIF)和头孢克洛(CEC)的敏感率为94.1%~100.0%,对复方磺胺甲口恶唑(SXT)的耐药率最高,达65.8%,对克拉霉素(CLR)、氯霉素(CHL)和四环素(TET)的耐药率分别为7.9%、14.5%和20.4%,仅34株菌株(22.4%)对12种抗菌药物均敏感。

结论

杭州地区儿童来源的Hi耐药率呈上升趋势,临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物。

关键词: 流感嗜血杆菌; 耐药性; 儿童
中图分类号:R378.4 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)03-0192-04
Research on antibiotics resistance patterns of Haemophilus Influenzae isolated from children's respiratory tract
CHENG Wei1, QIAN Liqiang1, HUA Chunzhen1, ZHANG Zhuxian2, LI Jianping3, YU Huimin3
1.Clinical Medical School of Hangzhou Normal University,Zhejiang Hangzhou 310018,China
2.The Affiliated Hospital of Medical School, Hangzhou Normal University,Zhejiang Hangzhou 310015,China
3.Children's Hospital,Zhejiang University School of Medicine,Zhejiang Hangzhou 310003,China
Abstract
Objective

To investigate the antibiotics resistance patterns of Haemophilus influenzae (Hi) isolated from children with respiratory tract infection in Hangzhou and offer the reference of clinical rational drug use.

Methods

152 isolates were collected from December 2006 to June 2007 and were identified as Hi with V factor, X factor and V+X factor test. Nitrocefin test was used to detect β-lactamase. The sensitivities of 12 antibiotics against 152 strains were determined in vitro by Kirby-Bauer diffusion methods and the minimal inhibitory concentration(MIC) of ampicillin (AMP) was determined by E-test method.

Results

Of all 152 isolates,the susceptibility to AMP was 74.3% while the resistance rate was 22.4%. The MIC ranges of AMP in 141 isolates were detected. MIC50 was 0.250 μg/mL and MIC90 was 12 μg/mL. 34 isolates (22.4%) were β-lactamase positive strains,and 2 β-lactamase negative strains resistant to AMP were found. The sensitive rates to cefoperazone-sulbactam (CFS), imipenem (IMP), amoxicillin-clavulanic acid (AMC), cefotaxime (CXT), ceftriaxone (CRO), rifampin (RIF) and cefaclor (CEC) were from 94.1% to 100.0%. 100 strains (65.8%) were resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole (SXT), followed by those of clarithromycin (CLR),chloramphenicol (CHL) and tetracycline (TET) were 7.9%,14.5% and 20.4%.Only 34 strains (22.4%) were sensitive to all 12 kinds of antibiotics.

Conclusions

The resistance rate of Hi isolated from children in Hangzhou is in an upward trend,so antibiotics should be used rationally and be based on the drug sensitivity results in clinical therapy.

Keyword: Haemophilus influenzae; Drug resistance; Child

流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae, Hi)是急性呼吸道感染的常见病原菌, 在临床上可引起小儿肺炎、中耳炎、败血症、化脓性脑膜炎等多种感染, 严重威胁儿童健康[1]。治疗Hi感染的首选药物是氨苄西林(AMP), 该药在很长时间内是治疗该菌感染的价廉、有效的药物。近年来, 随着抗菌药物的广泛使用, AMP等临床常用抗菌药物的耐药率逐渐增加, 但不同的国家和地区又存在较大差异。为了解本地区儿童来源的Hi的耐药模式, 并为临床经验治疗提供科学的参考依据, 我们对2006年12月至2007年6月杭州市儿童医院临床分离的152株Hi进行了耐药性研究。

材料和方法
一、材料

1.菌株来源 2006年12月至2007年6月浙江大学医学院附属儿童医院临床标本中分离的152株Hi, 其中2株来自咽拭子培养, 其余均来自痰液培养。

2.试剂 Hi专用巧克力培养基、Cefinase纸片均为法国BioMerié x公司产品; AMP浓度梯度条(0.016~256 μ g/mL)为瑞典AB BioDisk公司产品; 嗜血杆菌药敏基础琼脂、嗜血杆菌药敏用生长因子SR158E(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸及氯化血红素)和标准抗菌药物纸片[AMP(10 μ g)、阿莫西林-克拉维酸2∶ 1(AMC, 30 μ g)、头孢噻肟(CXT, 30 μ g)、头孢曲松(CRO, 30 μ g)、头孢克洛(CEC, 30 μ g)、亚胺培南(IMP, 10 μ g)、克拉霉素(CLR, 15 μ g)、四环素(TET, 30 μ g)、复方磺胺甲口恶唑(SXT, 25 μ g)、氯霉素(CHL, 30 μ g)、利福平(RIF, 5 μ g)以及头孢哌酮-舒巴坦2∶ 1(CFS, 30 μ g)]均为英国Oxoid公司产品。

二、方法

1.菌株的鉴定 根据菌落的形态和革兰染色特点对嗜血杆菌进行初步筛选, 用V因子、X因子和V+X因子试验鉴定Hi。

2.药敏培养基的制备 按照2007年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定的指南, 参照培养介质的说明进行配制[2]。

3.药敏试验 按照2007年CLSI规定的标准, 用纸片扩散法检测Hi对12种抗菌药物的敏感性, 用E-test法检测141株Hi对AMP的最低抑菌浓度(MIC), Hi对AMP的药敏结果判断以MIC结果为准(因AMP浓度梯度试纸条数量原因只完成141株)。Hi标准株ATCC 49247作为质控菌株。

4.联合耐药和多重耐药的概念 (1)联合耐药:细菌同时对2种不同类抗菌药物耐药; (2)多重耐药:细菌同时对2种以上不同类抗菌药物耐药[3]。

三、统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行χ 2检验。

结果
一、一般资料

152株Hi菌株来自男性患儿108例, 女性患儿44例, 男女比例2.45∶ 1, 疾病分布男性多于女性。患儿的年龄分布范围为18 d~13岁, 其中28 d~1岁患儿共106例, 占69.7%, < 28 d及> 7岁患儿分别仅占3.3%和2.0%。菌株分离的季节多分布于2~5月, 占89.5%。

二、药敏结果分析

152株Hi中34株产生β -内酰胺酶, 占22.4%。所有菌株成功完成药敏试验, E-test法测得对AMP的药敏结果以MIC为准, 141株菌株对AMP耐药30株, 耐药率21.3%, 其中β -内酰胺酶阳性占93.3%(28/30); 中介6株, 占4.3%, 其中β -内酰胺酶阳性3株; 敏感105株, 敏感率74.5%。与纸片扩散法测得对AMP的药敏结果很相近:耐药率22.4%, 敏感率74.3%, 所有β -内酰胺酶阳性株中AMP耐药32株, 耐药率94.1%, 中介2株; 发现2株β -内酰胺酶阴性的耐AMP(β -lactamase-negative and ampicillin-resistant, BLNAR)菌株, 占总数1.3%, 1株仅对AMP耐药, 另1株对TET、SXT和CHL多重耐药, 另有2株β -内酰胺酶阴性的中介株。152株Hi对12种抗菌药物的药敏结果见表1。

表1 152株Hi对12种抗菌药物的药敏结果[例(%)]
三、β -内酰胺酶阳性或阴性与Hi联合和多重耐药的关系

本研究中, 152株菌株的联合耐药率为33.6%, 多重耐药率为15.8%, 其中β -内酰胺酶阳性的34株中联合耐药32株, 占94.1%, 阴性118株中联合耐药19株, 占16.1%, 差异有统计学意义(χ 2=72.06, P< 0.05)。β -内酰胺酶阳性和阴性Hi中, 多重耐药株分别为19株和5株, 分别占55.9%和4.2%, 差异亦有统计学意义(χ 2=52.95, P< 0.05)。β -内酰胺酶阳性和阴性株中联合耐药和多重耐药情况见表2。

表2 β -内酰胺酶阳性和阴性株中联合耐药和多重耐药情况
四、E-test法结果分析

检测141株Hi对AMP的MIC, 其范围为0.064~256 μ g/mL, MIC50为0.250 μ g/mL, MIC90为12 μ g/mL。β -内酰胺酶阳性株MIC范围为1.5~256 μ g/mL, MIC50为12 μ g/mL, MIC90为32 μ g/mL; β -内酰胺酶阴性株MIC范围为0.064~12 μ g/mL, MIC50为0.190 μ g/mL, MIC90为0.500 μ g/mL。

讨论

Hi是在1892年发现的一种重要病原菌, 最常见感染呼吸道黏膜, 作为流感时继发感染的常见细菌, 在我国尤其是儿童呼吸系统感染中占重要地位。本研究中男性患儿的Hi感染所占比例明显高于女性, 提示男性儿童可能较易受该菌感染, 同时发现28 d~1岁儿童感染该菌比例最高, 达69.7%, 提示该年龄段儿童易感染该菌, 在临床上应引起重视。

AMP是治疗Hi感染的首选药物, 疗效较好, 但随着抗菌药物的广泛应用, 部分地区Hi的耐药现象已日益严重。例如, 2004年北京14.3%[4]、2004至2006年贵州16.1%[5]、2002至2003年苏州17.8%[6]、2000至2002年上海20.4%[7]、2003至2004年广州40.1%[8]。SENTRY抗菌药物检测项目研究中AMP耐药率为亚太地区16.2%、美国31.5%、加拿大27.0%、拉丁美洲12.5%、欧洲11.8%[9]。本研究E-test法测得为21.3%, 处于中间水平, 但对比本地区近年的14.3%[2], 呈显著增长趋势。Hi对AMP耐药的主要机制是由于细菌产生β -内酰胺酶, 本研究显示Hi对AMP耐药率与产酶率基本一致, 差别由2株BLNAR菌株和2株β -内酰胺酶阳性的中介株造成, 产酶率明显高于文献报道2002至2003年北京、杭州、上海地区的10.9%、7.9%、18.0%[10]及以往报道[2]。BLNAR菌株占总数比为1.32%, 低于西班牙的5.5%[11]和日本的3.3%[12]。BLNAR菌株在1980年首次被报道, 其耐药机制主要是菌株细胞壁上一种或多种青霉素结合蛋白发生改变, 引起青霉素结合蛋白与靶位亲和力的降低, 其次是外膜蛋白改变导致耐药[11]。CLSI2007指南中该种菌株被认为耐AMC、AMP-舒巴坦(SAM)、CEC等药物, 即使某些BLNAR株对上述制剂在体外显示为敏感, 也应在研究中予以重视。CLSI2007指南中AMP的药敏结果可预测阿莫西林(AMX)的敏感性。大部分耐AMP和AMX的Hi都产生TEM型β -内酰胺酶。E-test法能够更精确的反映细菌的耐药程度, 国外较多学者用该法检测细菌耐药性, 日本Sakata[13]报道2003至2005年Hi的MIC值范围为0.12~64 μ g/mL; Jain等[14]报道北印度地区2006年Hi的β -内酰胺酶阳性株MIC50为8 μ g/mL, MIC90为32 μ g/mL, β -内酰胺酶阴性株MIC50为2 μ g/mL, MIC90为4 μ g/mL, 本研究结果与之相符。Hi对CLR、CHL和TET的耐药率对比同地区有逐年上升趋势[2], 而对SXT耐药率已高达65.8%, 已不再适宜将其应用于临床治疗。综合来看, Hi对头孢二、三代抗菌药物、IPM、CFS和RIF仍有极高的敏感性, 因此可作为临床的选择用药。马越等[15]报道Hi对第3代头孢菌素、碳青霉烯类等药物任一种非敏感属罕见耐药谱型, 在世界范围内均属罕见, 因此需引起重视, 必要时送参考实验室进行核实。

纵观比较, 本地区Hi耐药情况相对较轻, 但仍不能轻视, 应继续严密监视, 以便合理调整临床用药, 减缓其耐药性的上升速率, 更好地减轻患者病痛与负担。

The authors have declared that no competing interests exist.

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