微柱凝集和聚凝胺法检测不规则抗体的对比分析与研究
余忠清1, 殷波涛2, 胡丽华1
1.华中科技大学同济医学院附属协和医院输血科,湖北 武汉 430022
2.华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科,湖北 武汉 430030

通讯作者:胡丽华,联系电话:027-85351730。

作者简介:余忠清,男,1957年生,学士,副主任技师,主要从事血液学检验工作。

摘要
目的

比较微柱凝集和聚凝胺法的灵敏度和重复性,为不规则抗体的检测更新方法。

方法

使用微柱凝集和聚凝胺法检测不规则抗体,对比观察2种方法检出的阴、阳性结果和重复检验的准确性,从而选择灵敏度高和重复性好的方法满足临床输血需要。

结果

从18 000例住院患者中用微柱凝集筛选出不规则抗体阳性19例,阳性率为0.105%,其中D抗体7例,E抗体5例,C抗体3例,Ec抗体3例,Ce抗体1例;用聚凝胺法检测不规则抗体,仅有阳性为2例,阳性率为0.011%,2种方法比较差异有统计学意义( P<0.05);重复性检验:微柱凝集(19/19)和聚凝胺(2/2)均为100%,2种方法差异无统计学意义( P>0.05)。

结论

用微柱凝集检测不规则抗体能显著提高抗体的检出率,可避免漏检而降低输血反应的发生率。

关键词: 不规则抗体; 微柱凝胶; 聚凝胺; 敏感性; 重复性
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)03-0179-03
The comparative analysis and research between microcolumn gel test and polybrene test in irregular antibody detection
YU Zhongqing1, YIN Botao2, HU Lihua1
1. Department of Blood Transfusion, Union Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Hubei Wuhan 430022, China
2.Department of Clinical Laboratory, Tongji Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Hubei Wuhan 430030, China
Abstract
Objective

To compare the sensitivity and reproducibility of microcolumn gel test and polybrene test in irregular antibody detection and find a new method.

Methods

Microcolumn gel test and polybrene test were used for detecting irregular antibody, and the positive and negative results were compared and analyzed. The accuracy of repeated detection was also analyzed. The method, which was sensitive and had good reproducibility, would be applied into clinical blood transfusion.

Results

19 irregular antibody positive cases were screened by microcolumn gel test among 18 000 inpatient cases, and the positive rate was 0.105%. 7 cases of them were Rh(D), 5 cases were Rh(E), 3 cases were Rh(C) , 3 cases were Rh(Ec) and 1case was Rh(Ce). However, only 2 irregular antibody positive cases were screened by polybrene test, and the positive rate was 0.011%. There were significant difference between two methods ( P<0.05). Two methods both had complete reproducibility.

Conclusions

Microcolumn gel test can significantly increase the detection rate and decrease the false negative results of testing, which can be helpful to reduce the incidence of transfusion reaction.

Keyword: Irregular antibody; Microcolumn gel; Polybrene; Sensitivity; Reproducibility

输血是一项不可替代的重要治疗, 在临床上许多患者特别是白血病、消化道大出血和外科择期大手术患者, 在生命垂危的关键时刻, 需要反复多次输血才能保持循环系统血压的稳定, 呼吸和心率的正常, 使物质代谢处于平衡, 维持人体正常生命体征。而反复多次输血又可产生多种同种异体抗体, 即不符合ABO血型系统的不规则抗体而影响输血治疗[1]。不规则抗体大多数为IgG, 少数为IgM抗体[2], 因检测方法不同, 其敏感程度因方法不同而异。一旦方法存在较大的检测误差, 将会造成漏检而引起严重的输血性溶血反应。为此, 我们采用微柱凝集[3]和聚凝胺2种方法, 对比观察检测结果, 从而选择灵敏度高, 重复性好的方法, 为临床输血安全提供了保障, 收到了良好的效果。

材料和方法
一、临床资料

从2006至2008年随机选择消化道大出血、再生障碍性贫血、急、慢性白血病、孕产妇和外科手术等患者18 000例, 输血前进行ABO和Rh血型鉴定以及不规则抗体的筛选。其中男8 446例, 女 9 554例, 年岭3 d~93岁, 平均年龄46.5岁。

二、试剂与仪器

微柱凝胶卡; 37℃恒温箱和恒温离心机(由瑞士达亚美公司提供); 抗人球蛋白和Ⅰ ~Ⅲ 号谱细胞(由上海血液生物医药有限公司提供); 聚凝胺(Polybrene)试剂(由中国台湾提供)。

三、方法

1.不规则抗体检测 用Ⅰ ~Ⅲ 号谱细胞筛选不规则抗体, 对18 000例临床输血患者采用微柱凝胶和聚凝胺法作不规则抗体检查。用微量加样器取Ⅰ ~Ⅲ 号谱细胞各50 μ L, 分别加入Ⅰ ~Ⅲ 号微柱凝胶反应室中, 再分别加入25 μ L受检血清后, 置37℃恒温箱中孵育15 min。取出后迅速用37℃恒温离心机1 000 r/min(离心半径10 cm)离心10 min后观察结果。结果判断:阳性为红细胞(RBC)凝集后位于凝胶上层或中间; 阴性为游离或单个RBC通过凝胶微孔而沉于凝胶管的底部。

2.对比检测 用聚凝胺法。取患者待检血清100 μ L, 加2%~5% O型(3人份以上混合)RBC 100 μ L, 加低离子溶液0.6 mL, 再加聚凝胺100 μ L, 3 000 r/min(离心半径18 cm)离心1 min, 去掉上清液, 凝集后再加悬浮液100 μ L振摇, 若1 min内凝集散开, 为不规则抗体阴性, 反之则为阳性。

3.不规则抗体确证试验 采用抗人球蛋白法检验。

四、统计学方法

2种方法的比较用χ 2检验。

结果
一、微柱凝胶

18 000例输血患者, 用微柱凝胶检测不规则抗体19例阳性。其中输血史12例, 妊娠史7例; 用聚凝胺检测不规则抗体仅2例阳性。2种方法重复性检验合格率均达100%, 结果见表1~2。

表1 2种方法检测不规则抗体结果
二、抗体鉴定

结果见表2

表2 19例患者抗体鉴定结果
讨论

人类RBC有29个血型系统[4], 每个系统都有各自不同的血型抗原, 当反复多次输血时这些抗原可刺激机体产生ABO以外的同种异体抗体。此抗体大多为IgG, 少数为IgM。当再次接受含有同一抗原的RBC输注时, 患者血液中产生的IgG或IgM抗体可与输入的RBC产生致敏或引起抗原抗体反应, 在补体的作用下引发输血性溶血反应。随着输血次数的增多, 抗体产生的频率逐渐增大, 其效价也随之增高, 反应也增强。最常见的是Rh-hr、Kidd和MNSs系统。在Rh系统中, IgG抗-D、抗-E/e和抗-C/c不仅可以引起输血性溶血反应, 而且还可引发孕妇自然流产、早产或死胎。早产儿常伴Rh新生儿溶血病(Rh-HDN), 其临床症状较重, 治疗不及时可危及患儿生命或留下严重的后遗症[2, 3, 5]。因此, 不规则抗体的检测对临床输血治疗和孕妇妊娠有重要的临床意义。

不规则抗体的检测和交叉配血筛选有抗人球蛋白法、聚凝胺和微柱凝胶法等。因实验方法不同, 其敏感程度因方法不同而异, 选择哪种方法作为常规的检测, 目前国内没有作过统一的要求。有的方法较为敏感, 有的则敏感度较差, 因而其检测结果常常存在很大的差异。我们通过对18 000例患者进行输血前和产前检查, 用微柱凝胶法进行抗体筛选和抗人球蛋白法确诊, 检出了19例患者为阳性, 阳性率达0.105%, 低于文献报道结果[4]。其中抗-D抗体7例, 抗-E抗体5例, 抗-C抗体3例, Ec复合抗体3例, 抗-Ce 1例。既往有输血史者共12例, 有妊娠史者共7例, 见表2。但用聚凝胺法检测, 仅有2例抗-D为阳性, 见表1, 阳性率为0.011%。2种方法检测差异有统计学意义(P< 0.05), 表明聚凝胺法对不规则抗体的筛选存在漏检, 其灵敏度显著低于微柱凝胶法。虽然聚凝胺法操作简单, 检测速度较快, 但结果判断人为的影响因素较多。诸如离心速率、悬浮液的加量、试管振荡强度和振荡频率的不同, 可产生不同的阴阳性结果, 这是造成漏检或误检的重要原因。其次, 用肉眼判断RBC的凝集状态, 因检验工作者各自视力不同, 对弱凝集现象的判断均可产生不同程度的判断误差, 这是造成漏检或误检的另一原因。故用聚凝胺法筛选不规则抗体对临床输血治疗和孕妇妊娠存在一定的安全隐患, 因而更新检测方法势在必行。用微柱凝胶筛选不规则抗体, 其检测不受人为因素的干扰和条件限制, 实验操作一次性完成, 并可以进行自动化分析。此法为抗人球蛋白实验技术的革新和改良, 同时又具有本法独特的分子筛作用。它将不规则抗体的筛选转入到微柱管中进行, 抗原抗体在反应室中致敏或吸附, 在一定的离心力作用下致敏的RBC可与微柱管中抗人球蛋白分子结合而形成较大的凝集颗粒或块状留在柱子的中间或上层, 未致敏的RBC则自上而下可通过微柱凝胶微孔而沉于管底, 使不同状态的RBC得以分离[6, 7], 从而可以直接判断不规则抗体的阴阳性结果。结果判断直观、准确、可靠而不会出现漏检。

选用微柱凝集法通过对18 000例受血者和孕妇进行检测, 我们共筛选出19例不规则抗体阳性者, 采用抗人球蛋白法确诊。用不同的实验方法进行交叉配血, 患者输血后均未发生输血性溶血反应, 有效降低了输血反应的发生率, 为输血安全提供了质量保障。由此可见, 微柱凝集是一种灵敏度高、重复性好的实验技术, 对抗体的检出率明显优于聚凝胺法(P< 0.05), 且方法设计新颖, 故本法可作为常规检测技术在临床上广泛开展和应用, 从而可避免不规则抗体的漏检和误检, 有利于临床安全输血和孕妇自然妊娠, 有效预防输血反应和新生儿溶血病的发生。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 肖星甫. 输血技术手册[M]. 成都: 四川科学技术出版社, 1992: 95. [本文引用:1]
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