TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价
引用本文
黄惠, 王丽娜, 詹诣. TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价. 25(3): 161-163
HUANG Hui, WANG Lina, ZHAN Yi. Evaluation of the specificity of determination of serum markers of hepatitis B by TECAN automatic enzyme immunoassay analyzer. Labratory Medicine, 25(3): 161-163
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HUANG Hui, WANG Lina, ZHAN Yi. Evaluation of the specificity of determination of serum markers of hepatitis B by TECAN automatic enzyme immunoassay analyzer. Labratory Medicine, 25(3): 161-163
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TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价
作者简介：黄惠,女,1979年生,硕士,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。
摘要
目的
对TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)的特异性进行评价。
方法参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) EP12-A、EP7-A及有关文献,分别通过加样针的携带污染、加样和加酶间隔时间、溶血干扰等试验对仪器的RSP150/8前处理系统和BEPⅢ后处理系统检测HBsAg、抗-HBs的特异性进行评价。
结果标本HBsAg>8 000 S/CO时,加样针仍未出现携带污染,而标本抗-HBs>1 000 mIU/mL时加样针出现携带污染现象。已加样HBsAg、抗-HBs阴性及弱阳性标本的反应板室温放置30 min内加酶以及标本中加入血红蛋白(浓度≤8 g/L),未出现假阳性结果。
结论高浓度的抗-HBs对加样容易产生携带污染。血红蛋白对HBsAg、抗-HBs试验的干扰并不明显。HBsAg、抗-HBs酶标板在室温放置30 min内加酶对检测结果影响不大。
关键词:
TECAN全自动酶免分析系统; 乙型肝炎表面抗原; 乙型肝炎表面抗体; 特异性
中图分类号:R446.61
文献标志码:A
文章编号:1673-8640(2010)03-0161-03
Evaluation of the specificity of determination of serum markers of hepatitis B by TECAN automatic enzyme immunoassay analyzer
Abstract
Objective
To evaluate the specificities of detecting hepatitis B surface antigen (HBsAg) and anti-hepatitis B surface antigen antibody (anti-HBs) by TECAN automatic enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) analyzer.
MethodsThe specificities of detecting HBsAg and anti-HBs by TECAN automatic ELISA analyzer were evaluated through the tests of the carryover of sampling probes, the interval between adding samples and enzyme, and the interference of haemolysis, according to Document EP12-A and EP7-A and other related literature.
ResultsThe carryover of sampling probes did not appear for HBsAg at the concentration >8 000 S/CO. However, for the anti-HBs, it began to appear when the concentration arose to 1 000 mIU/mL. For the negative and weak positive HBsAg and anti-HBs samples, adding the enzyme within 30 min in the room temperature or the haemoglobin(the concentration below 8 g/L)in the samples had no interference on the results.
ConclusionsHigh concentration anti-HBs is easy to generate carryover phenomenon of the sampling probe. The interference of haemoglobin is not obvious in the detection of HBsAg and anti-HBs. The ELISA microplates of HBsAg and anti-HBs putting in the room temperature before adding enzyme within 30 min show no obvious influence.
Keyword:
TECAN automatic enzyme immunoassay analyzer; Hepatitis B surface antigen; Anti-hepatitis B surface antigen antibody; Specificity
TECAN全自动酶免分析系统由瑞士TECAN公司生产的RSP150/8前处理系统和德国Dade Behring公司生产的BEPⅢ 后处理系统组成。其将酶联免疫吸附试验(ELISA)过程中的加样、温育、加液、洗板、读板等操作步骤通过计算机控制仪器自动完成, 实现了ELISA的全程自动化, 可有效提高试验结果的精确度和准确度[1]。但目前该系统仍然可能存在着一些干扰因素, 如永久性加样针的携带污染、加样后等待加酶的时间、标本溶血等。本研究旨在探讨这些因素对TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物的影响, 对其特异性进行评价。
材料和方法
一、仪器与材料
1.TECAN全自动酶免分析系统 由瑞士TECAN公司生产的RSP150/8前处理系统和德国Dade Behring公司生产的BEPⅢ 后处理系统组成。
2.乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)酶免试剂盒 由上海实业科华生物技术有限公司提供(批号为20080417)。
3.室内质控血清 由广东省临床检验中心提供。
4. HBsAg、抗-HBs试验标本 来自广东省中医院门诊和住院的患者标本, 先经 ELISA筛选, 再由强生ECI全自动化学发光免疫分析仪定值。取HBsAg强阳性标本(> 1 000 S/CO)、弱阳性标本(30 S/CO< HBsAg< 60 S/CO), 抗-HBs强阳性标本(> 300 mIU/mL)、弱阳性标本(20 mIU/mL< 抗-HBs< 60 mIU/mL) 。
二、 评价指标及方法
1.加样针的携带污染试验 8支加样针分别在完成对1列、2列、3列强阳性患者标本的加样后, 再吸取阴性或弱阳性的患者血清标本, 统计其携带污染率。
2. 酶标板加样后等待加酶时间长短对结果的影响试验 在日常的操作过程中, 从加样到进入后处理一般都在30 min内完成。本试验将患者血清标本(弱阳性、阴性标本)加样后分别放置室温(26 ℃)30、20、15和10 min, 再进入后处理完成加酶、显色等后续检测, 统计结果的假阳性率。
3.溶血干扰试验 根据EP7-A文件, 选用高值干扰的血红蛋白浓度一般为5 g/L。本试验分别配制最终血红蛋白浓度为8、4、2和1 g/L的混合血清标本进行试验, 用生理盐水代替血红蛋白液作为对照组, 分别统计溶血对HBsAg、抗-HBs强阳性、弱阳性和阴性标本的影响。
结果
一、加样针的携带污染
1.不同浓度HBsAg阳性标本对弱阳性标本的携带污染情况 TECAN前处理系统对HBsAg加样的携带污染情况见表1。根据HBsAg的浓度分为8组, 加样针先吸取不同浓度的HBsAg阳性标本再做常规冲洗, 然后加入弱阳性标本并检测其吸光度(A)值。考察吸取阳性标本1次(A组)、连续2次(B组)、连续3次(C组)后, 弱阳性标本A值变化的均值。以弱阳性标本A值的变化大于批间的2s为发生显著改变。表1数据显示:(1)虽然HBsAg阳性标本浓度逐渐增高, 但A组内弱阳性标本A值未出现显著改变(P> 0.05), 说明单次加入高浓度HBsAg标本对弱阳性标本无携带污染现象; (2)连续加入2次或3次强阳性标本后加入弱阳性标本, 其A值亦未出现显著改变(P均> 0.05), 说明连续加入2~3次强阳性标本后, 加样针并未产生累积携带污染现象。
 | 表1 不同浓度HBsAg阳性标本对弱阳性标本的影响 |
2.不同浓度HBsAg阳性标本对阴性标本的携带污染情况 用表1的HBsAg阳性标本考察对其后的阴性标本的影响, 发现并未产生携带污染现象。
3.不同浓度抗-HBs阳性标本对阴性标本的携带污染情况 TECAN前处理系统处理抗-HBs时的携带污染情况见表2。根据抗-HBs的浓度分为9组, 加样针先吸取不同浓度抗-HBs阳性标本再做常规冲洗, 然后加入阴性标本。同时统计吸取阳性标本1次(A组)、连续2次(B组)、连续3次(C组)后, 再加入的阴性标本的假阳性率。由表2数据可知, 当抗-HBs强阳性标本浓度> 1 000 mIU/mL时, 阴性标本出现了假阳性结果, 且假阳性率随着加入强阳性标本数的增加有所增高, 随着吸取强阳性标本次数的增加, 存在累积携带污染的现象。
| 表2 抗-HBs阳性标本对阴性标本的影响 |
二、酶标板加样后等待加酶时间长短对结果的影响
将加样后的酶标反应板分别放置室温(26 ℃)30、20、15和10 min, 再进行后续检测, 分别统计HBsAg和抗-HBs的检测结果, 随着标本加样后放置时间的改变, 弱阳性及阴性标本组A值的变化, 差异无统计学意义(P> 0.05), 提示室温放置30 min内对HBsAg、抗-HBs弱阳性及阴性结果均无明显影响。
三、溶血的干扰
参照EP7-A加入血红蛋白浓度为2、4和8 g/L对HBsAg及抗-HBs阴性、弱阳性、强阳性标本A值改变不大(P> 0.05), 说明溶血对HBsAg及抗-HBs的检测未产生明显影响。
讨论
TECAN前处理系统加样方式为8根永久性加样针同时加样, 每次加样后用去离子水冲洗。有相关报道指出加样针反复使用, 针内壁可能附着血浆蛋白等污物, 当较强阳性标本吸入后不易被冲干净, 下一个标本吸入后可被污染, 且在越强的阳性标本后面污染越严重[1, 2]。而冲洗加样针所用的去离子水的强度极低, 很难将吸附在针壁上的蛋白质洗净[3]。如果用NaOH冲洗加样针, 必须将NaOH的质量分数控制在一定的范围, 否则对实验结果会产生影响[4], 且未有资料充分论证NaOH溶液对ELISA结果的影响。但如果使用一次性的加样针, 投入的成本高, 在日常的可操作性差。
试验结果表明, 随着加入HBsAg强阳性标本的浓度增加, 以及强阳性标本次数的增加, 其后加入的弱阳性或阴性标本的结果均没有发生明显的变化。说明用去离子水冲洗加样针对HBsAg结果不存在携带污染, 这与一些文献报道结果不一致[5]。就我们收集的300多例HBsAg标本而言, 患者HBsAg> 8 000 S/CO的强阳性标本极为少见, 所以一般情况下, 检测HBsAg极少会产生携带污染。以往的研究有的未能将HBsAg定值分析, 有的购买高值的质控品, 与实际的检测标本存在一定差异, 因此出现与本试验不同的结果。本试验还证实抗-HBs强阳性标本的浓度> 1 000 mIU/mL, 对其后加入的阴性标本可产生携带污染, 并随着吸取高浓度阳性标本的次数增多, 携带污染率可高达90%, 对临床检测产生一定的影响。
后处理系统为1个单通道的系统, 1次只能完成1块板的加液、洗板过程。由于不能同时对5块板进行处理, 导致后面进板的试验需要一定的等待时间, 一般在5~25 min。有报道指出标本浓度越低, 温育时间的影响越明显[6]。本试验证实对于HBsAg、抗-HBs的弱阳性标本, 放置时间越长, A值也会越大, 但差异无统计学意义; 对于HBsAg、抗-HBs的阴性标本, A值变化不大, 也没有出现假阳性的结果。
溶血是临床检验中最常见的干扰和影响因素。本试验参照EP7-A文件, 探讨了溶血对HBsAg、抗-HBs阴性和弱阳性标本的影响, 结果表明阴性溶血标本和弱阳性溶血标本的A值随血红蛋白浓度增加至7 g/L时有所增高, 但其差异无统计学意义, 即没有假阳性结果的出现。可能原因是试剂中酶的强大催化活性, 显色较强, 而微孔中残留的血红蛋白引起的显色较弱, 对A值的影响微乎其微。
本试验与以往的研究不同之处在于直接选用人血清标本, 试验结果不存在基质效应, 且所用标本是通过强生ECI全自动化学发光分析仪定量测定, 试验设计参照EP12-A及EP7-A文件, 按日常常规操作, 确保结果的可信。根据以上3组试验结果可见, TECAN全自动酶免分析系统检测HBsAg的特异性较好, 对于检测抗-HBs要注意携带污染的存在。
The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
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