在上世纪80年代,三代头孢菌素应用于临床治疗后不久,欧洲就分离到产ESBLs的肠杆菌科细菌,随后这类耐药菌在美国也开始出现,现在这个耐药问题已成为一个世界性的难题。为了有效控制产ESBLs细菌的流行播散,多种表型筛选方法被建立,如CLSI推荐的纸片筛选试验和确证试验等^{[ 6, 7]}。但这些方法需要首先获得纯培养的菌株,然后才能进行ESBLs的表型检测。为了快速筛选产ESBLs的菌株,人们尝试建立从标本中直接筛选产ESBLs的菌株,如添加头孢噻肟的Drigalski琼脂、添加头孢他啶的麦康凯琼脂及添加了头孢他啶、万古霉素和两性霉素B的营养琼脂等,但这些筛选一般均为实验室自制的培养基,需要新鲜配置,不能很好满足临床的实际需要^{[ 8]}。最近人们开始在显色平板的基础上建立一些特殊耐药细菌的筛选平板,如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌显色筛选平板^{[ 9]}及本研究所评估的ESBLs筛选平板等。

ChromID ESBL含有多种营养成分和多种抑制革兰阳性菌和真菌的抗菌药物,其中头孢泊肟是用来筛选产ESBLs的菌株,有资料显示对已发现的所有类型的ESBLs,头孢泊肟是最好的一种底物^{[ 10, 11]}。另外该平板还含有2种产色底物和1种天然底物,以直接鉴定产ESBLs的肠杆菌科细菌。由于大部分的菌株产β-葡萄糖醛酸苷酶,因此大肠埃希菌在该平板上显粉红色或酒红色,而不产β-葡萄糖醛酸苷酶的菌株为白色菌落。而克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属和枸橼酸菌属细菌由于产β-葡萄糖苷酶,在平板上显绿色、蓝色或棕绿色菌落。变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌产脱氨基酶,这些菌株在ChromID ESBL平板上显浅灰色或深灰色。因此将标本直接接种于ChromID ESBL平板上可达到筛选产ESBLs菌株和辅助鉴定的双重作用。本研究中使用该平板对上海地区分离的肠杆菌科细菌进行了产ESBLs菌株的筛选,结果与CLSI推荐的纸片确证试验非常符合,取得了满意的效果。在研究中我们发现,23株产ESBLs大肠埃希菌菌株为不产β-葡萄糖醛酸苷酶的菌株,在ChromID ESBL平板上为白色菌落(其中瑞金医院为12株,仁济医院为11株),对这部分菌株应加做吲哚试验等鉴别试验,以正确鉴定大肠埃希菌。

近几年来,针对我国分离的革兰阴性杆菌所产ESBLs的基因型别、流行现状及检测方法均进行了较多的研究工作,研究表明CTX-M型各组及PER、VEB等型别为我国各地区分离的肠杆菌科细菌产生的主要ESBLs型别。在本研究中我们选取了其中的28株肠杆菌科细菌,通过纸片双抑制剂平行抑制试验及聚合酶链反应(PCR)等分子生物学方法已基本确认这些菌株的产酶表型和基因型,这些菌株为单纯产ESBLs或同时产AmpC酶菌株,其携带的主要ESBLs基因包括各种CTX-M型、PER和VEB等^{[ 3~ 5]}。这些菌株可一定程度代表本地区常见的ESBLs基因。试验结果表明ChromID ESBL可有效地将这些菌株筛选出来。但应该注意的是本研究的目的在于评估该显色平板对上海地区产ESBLs流行克隆的筛选效果,因此采用的标本为纯培养的菌株,不是临床标本,但这也造成了本研究的局限性,ChromID ESBL的开发目的是为了从临床标本中直接筛选产ESBLs菌株,而不是对纯菌株进行分析。ChromID ESBL在临床的实际应用中,我们发现将粪便标本接种到显色平板上,肠道标本中的一些细菌,如肠球菌,也可在该平板上生长,并形成产色的菌落,识别这些菌落需要一定的经验和辅助试验。

通过以上研究表明,ChromID ESBL可应用于临床标本中产ESBLs肠杆菌科细菌的筛选。该平板的应用可缩短产ESBLs菌株的筛选时间,为临床抗感染治疗和医院感染控制提供帮助。