引用本文
谢璟, 张小莲, 崔江龙, 谭为, 王宏碧. 抗环瓜氨酸肽抗体与葡萄糖6磷酸异构酶抗原联合检测在类风湿性关节炎诊断中的应用[J].检验医学, 2015,25(11): 861-863
XIE Jing, ZHANG Xiaolian, CUI Jianglong, TAN Wei, WANG Hongbi. Application of the combined detection of anti-cyclic citrullinated peptide antibody and glucose-6-phosphate isomerase antigen in the diagnosis of rheumatoid arthritis[J]. Labratory Medicine, 2015,25(11): 861-863  
Permissions
Copyright©2010, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
抗环瓜氨酸肽抗体与葡萄糖6磷酸异构酶抗原联合检测在类风湿性关节炎诊断中的应用
谢璟, 张小莲, 崔江龙, 谭为, 王宏碧
宜春市人民医院检验科,江西 宜春 336000

作者简介:谢 璟,女,1977年生,学士,主管技师,主要从事临床免疫学检验及研究工作。

基金:江西省宜春市科技基金资助,宜春市科技计划项目(JXYC2009KSA012)
摘要
目的 探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)抗原联合检测对类风湿性关节炎(RA)的诊断意义。方法 对120例(RA 67例,非RA 53例)患者血清同时进行抗CCP抗体、类风湿因子(RF)和GPI抗原检测,检测方法分别为酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶乳增强免疫透射比浊法。结果 在RA组中,3个指标的阳性率均显著高于非RA组( P<0.001);抗CCP抗体和GPI抗原联合检测与RF存在显著相关性( r=0.48, P<0.05),且联合检测的敏感性(79.1%)显著高于单独检测RF(76.1%),受试者工作特征(ROC)曲线下的面积(AUG)CCP/GPI=0.903,均显著大于AUGCCP、AUGGPI、AUGRF( P<0.05)。结论 联合应用抗CCP抗体与GPI抗原显著提高RA的诊断效率,是诊断RA的理想指标。
关键词: 抗环瓜氨酸肽抗体; 葡萄糖6磷酸异构酶抗原; 类风湿因子; 类风湿性关节炎
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)11-0861-03
Application of the combined detection of anti-cyclic citrullinated peptide antibody and glucose-6-phosphate isomerase antigen in the diagnosis of rheumatoid arthritis
XIE Jing, ZHANG Xiaolian, CUI Jianglong, TAN Wei, WANG Hongbi
Department of Clinical Laboratory, the People's Hospital of Yichun City, Jiangxi Yichun 336000, China
Abstract
Objective To investigate the diagnostic significance of the combined detection of anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibody and glucose-6-phosphate isomerase (GPI) antigen in the diagnosis of rheumatoid arthritis (RA).Methods The serum anti-CCP antibody, rheumatoid factor (RF) and GPI antigen were determined in 120 patients (67 RA and 53 non-RA) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and latex immunoenhancement nephelometry.Results In RA group, the positive rates of the three indexes were significantly higher than those in non-RA group ( P<0.001). There was a correlation between RF and the combined detection of anti-CCP antibody and GPI antigen ( r=0.48, P<0.05). The sensitivity of combined detection (79.1%) was significantly higher than that of individual detection of RF (76.1%), and the area under receiver operating characteristic (ROC) curve (AUG)CCP/GPI(0.903) was larger than AUGCCP, AUGGPI and AUGRF ( P<0.05).Conclusions The combined application of anti-CCP antibody and GPI antigen improves the diagnosis efficiency of RA. It is an ideal index to the diagnosis of RA.
Keyword: Anti-cyclic citrullinated peptide antibody; Glucose-6-phosphate isomerase antigen; Rheumatoid factor; Rheumatoid arthritis

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现的自身免疫性疾病。目前RA的诊断实验室指标主要是类风湿因子(RF), 但RF特异性不高。2000年, 荷兰学者Schellekens等[1]将一条由19个氨基酸残基组成的瓜氨酸肽链中的2个丝氨酸替换为半胱氨酸, 形成与β -转角具有相似结构的二硫链合成为环瓜氨酸肽(CCP), 采用CCP为抗原用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA的抗CCP抗体, 在RA诊断中有很高的特异性[2]。葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)是一种多功能蛋白, GPI的细胞因子及生长因子活性可能对RA的血管增生、滑膜增殖和骨破坏起了重要作用, 同时增加了RA的易感性; GPI能改变滑膜细胞或淋巴细胞的基因表达及性能, 活化B淋巴细胞, 激活T淋巴细胞及巨噬细胞, 并最终导致自身免疫。本研究通过联合检测抗CCP抗体与GPI抗原, 评价其在RA诊断中的敏感性和特异性以及在类风湿疾病中的临床应用价值。

材料和方法
一、 材料

1. 研究对象 2008年5月 至2009年3月宜春市人民医院风湿科门诊及住院患者120例。其中RA患者67例, 男19例, 女48例, 年龄18~83岁, 均符合1987年美国风湿病协会修订的RA分类诊断标准[3]; 非RA患者53例, 其中男15例, 女38例, 年龄14~76岁, 包括系统性红斑狼疮(SLE)21例、干燥综合征(SS)18例、骨关节炎(OA)7例、混合性结缔组织病(MCTD)4例、硬皮病(SCL)3例, 所有病例的临床诊断均符合国内或国际相应的判断标准。

2. 仪器与试剂 采用ELISA检测试剂盒检测抗CCP抗体, 试剂购自德国欧蒙医学实验诊断有限公司。GPI抗原ELISA试剂盒购自上海北加生化试剂有限公司。Anthos2010酶标仪与Anthos fhuido自动洗板机为安图公司产品。RF试剂盒购自宁波美康生物科技有限公司, 采用胶乳增强免疫透射比浊法, 由日本OLYMPUS AU2700全自动生化仪检测。

二、方法

1. 标本收集 取患者空腹外周静脉血3 mL, 2 500 r/min(离心半径为22.5 cm)离心5 min后分离血清, 置-20 ℃冰箱冰冻保存。

2. 抗CCP抗体检测 将血清1∶ 100稀释, 加入包被了CCP抗原的微孔板中, 室温温育60 min, 洗板3次, 加入酶标记的单克隆IgG抗体, 室温温育30 min, 洗板后加入底物反应30 min, 再加入0.5 mol/L硫酸终止反应。在450和630 nm双波长下读取吸光度(A), 以Cut-off值5 U/mL作为正常范围上限, 每板测定同时设空白对照、阳性对照、阴性对照。

3. GPI抗原检测 将100 μ L标准品和待测血清同时加入包被了GPI抗体的微孔板中, 37 ℃温育60 min, 洗板5次后加入酶标记抗体100 μ L, 37 ℃温育60 min, 洗板后加底物显色液100 μ L, 室温反应15 min, 再加终止液50 μ L终止反应。在492和630 nm双波长下读取A值, 0.20 mg/L以下为正常。

4. RF定量检测 采用日本OLYMPUS AU2700全自动生化仪, 方法为胶乳增强免疫透射比浊法, RF值> 25 IU/mL判为阳性。

三、统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理。RA与非RA患者抗CCP抗体、RF、GPI抗原阳性率比较用χ 2检验; 抗CCP抗体和GPI抗原联合检测与RF阳性率比较用配对资料的χ 2检验和Spearman相关分析。P< 0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、抗CCP抗体、RF和GPI抗原的检测

对120份(RA 67份, 非RA 53份)血清同时进行了抗CCP抗体、RF和GPI抗原检测, RA组均显著高于非RA组(P< 0.001), 见表1。抗CCP抗体/ GPI抗原联合检测, 其敏感性比单独用抗CCP抗体或用GPI抗原检测高, 但其特异性稍有降低, 见表2。计算受试者工作特征(ROC)曲线下的面积(AUG)分别为:AUG CCP=0.801, AUGGPI=0.775, AUG RF=0.823, AUGCCP/GPI=0.903, AUG CCP/GPI显著大于AUG CCP、AUG GPI、AUG RF(P< 0.05), 见图1。

表1 RA组及非RA组患者抗CCP抗体、RF、GPI抗原的阳性率比较 [例(%)]
表2 抗CCP抗体、RF、GPI抗原、CCP抗体/GPI抗原的敏感性和特异性比较

图1 抗CCP抗体、GPI抗原、RF、抗CCP抗体/ GPI抗原的ROC曲线图

二、RA组抗CCP抗体和GPI抗原联合检测与RF阳性率比较及相关性分析

对67份RA血清进行了抗CCP抗体和GPI抗原联合检测, 与RF比较, 差异有统计学意义(χ 2=13.06, P< 0.001), 见表3; 相关性分析表明, 抗CCP抗体、GPI抗原联合检测与RF阳性率之间存在相关性(r=0.48, P< 0.05)。

表3 RA组抗CCP抗体和GPI抗原联合检测与RF阳性率比较
讨 论

RA是一种抗原驱动及T细胞介导的全身性自身免疫病。近年来, RA的实验室诊断, 特别是早期诊断, 一直是国内外学者研究的热点。在1987年美国风湿病协会制定的RA分类标准中, RF是惟一的血清学指标。RF是一种以变性IgG为靶抗原的抗体, 主要在RA患者中出现, 但在其他自身免疫性疾病(SLE、SS、SCL等)及健康老年人中也可检测出RF。抗CCP抗体是RA早期诊断较好的指标[4], 抗CCP抗体对RA的预后判断有一定的价值。Schaller等[5]认为GPI抗原是RA的一种自身抗原, 存在于大部分RA患者中。Yu等[6]研究发现, GPI在肿瘤细胞内存在, 可调节基质金属蛋白酶-3(MMP-3), 而MMP-3在RA患者的滑膜细胞和血管内皮细胞中有高表达, 有较为显著的促进骨破坏作用[4]。GPI抗原及GPI抗体在RA患者中高表达, RA关节软骨表面有GPI的线性沉积及GPI-抗GPI免疫复合物沉积, 关节沉淀的GPI免疫复合物可激活补体替代途径, GPI还可介导炎细胞向关节局部迁移, 提示关节外抗原是启动特异性关节病变的机制之一[5]。在血清或关节液中持续产生的GPI与RA的病理过程相关。

我们对67例RA患者和53例非RA患者血清进行了抗CCP抗体、RF和GPI抗原检测。结果显示, 在RA组中抗CCP抗体、RF、GPI抗原的阳性率明显高于非RA组(P< 0.001), 其中RF敏感性最高(76.1%), 抗CCP抗体次之(62.7%), GPI抗原最低(56.7%), 而在特异性方面抗CCP抗体为92.5%, 高于RF(71.7%)和GPI抗原(88.7%)。

为了弥补单一应用抗CCP抗体、RF、GPI抗原诊断RA的不足, 提高RA的检出率及检测特异性, 本研究将特异性较好的抗CCP抗体和GPI抗原作为联合检测组合项目, 与RF检测结果比较, 结果显示联合检测与RF存在显著相关性(P< 0.05), 且联合检测的敏感性(79.1%)显著高于RF(76.1%)单独检测, 特异性也较强。计算AUG, AUGCCP/GPI均显著大于AUGCCP、AUGGPI、AUGRF(P< 0.05), 表明联合检测抗CCP抗体和GPI抗原可显著提高RA的诊断效率, 是RA早期诊断及判断预后较理想的指标。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Schellekens GA, Visser H, De Jong BA, et al. The diag-nostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide[J]. Arthritis Rheum, 2000, 43(1): 155-163. [本文引用:1]
[2] 曾小峰, 艾脉兴, 甘晓丹, 等. 抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎中的意义[J]. 中华风湿病学杂志, 2001, 5(5): 281-284. [本文引用:1]
[3] Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis[J]. Arthritis Rheum, 1988, 31(3): 315-324. [本文引用:1]
[4] Brownlie RJ, Myers LK, Wooley PH, et al. Treatment of murine collagen-induced arthritis by the stress protein BiP via interleukin-4-producing regulatory T cells: a novel function for an ancient protein[J]. Arthritis Rheum, 2006, 54(3): 854-863. [本文引用:2]
[5] Schaller M, Burton DR, Ditzel HJ. Autoantibodies to GPI in rheumatoid arthritis: linkage between an animal model and human disease[J]. Nat Immunol, 2001, 2(8): 746-753. [本文引用:2]
[6] Yu FL, Liao MH, Lee JW, et al. Induction of hepatoma cells migration by phosphoglucose isomerase/autocrine motility factor through the upregulation of matrix metalloproteinase-3[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2004, 314(1): 76-82. [本文引用:1]