1.研究对象 患者,男,50岁,到浙江医院门诊做体检,包括生化检测、血常规、淋巴细胞分群、特种蛋白检测等。该患者血常规结果显示,白细胞(WBC)5.4×10⁹/L,中性粒细胞40%,淋巴细胞55%,红细胞(RBC) 5.34×10¹²/L,血红蛋白(Hb)166 g/L,血小板(PLT)352×10⁹/L,外周血涂片染色未发现异常形态白细胞。

2.方法 (1)双色检测:采用美国BD公司Simultest双色试剂盒,共计6管(分别是A、B、C、D、E、F管,A管CD45-异硫氰酸荧光素(FITC)/CD14-藻红蛋白(PE),B管为同型对照(IgG1-FITC/IgG2a-PE),C管CD3-FIFC/CD19-PE,D管CD3-FITC/CD4-PE,E 管CD3-FITC/CD8-PE, F管CD3-FITC/CD16+56-PE),每管加入10 μL抗体,50 μL全血,漩涡混匀后放置室温避光15 min,加入1 mL溶血素,混匀,室温避光放置5 min后,1 000 r/min(离心半径为15 cm)离心5 min, 2 mL磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤1次,1 000 r/min(离心半径为15 cm)离心5 min,弃去上清,加入0.5 mL PBS悬浮,立即上机。仪器为BD公司的FACScan流式细胞仪,使用BD公司自动软件(Simultest IMK-Lymphocyte software)获取分析至少2 000个淋巴细胞,用A管前向角散射(FSC)/侧向角散射(SSC)设门,CD14/CD45确定FSC/SSC中淋巴细胞门位置;(2)三色检测:次日,由联科公司提供3色试剂(Cytognos公司,西班牙)检测该标本,2管检测,第1管为CD4-FITC/CD8-PE/CD3-藻红蛋白-花青组合染料(PECY5),第2管为CD3-FITC/CD16+56-PE/CD19-PECY5,每管加入10 μL抗体,50 μL全血,后续步骤同双色试剂。使用CELLQUEST软件,用FSC/SSC设门,获取分析10 000个细胞,

1.双色检测 CD3⁺细胞(T淋巴细胞)42%,CD3^-/CD19⁺细胞(B淋巴细胞)52%,CD3⁺/CD4⁺细胞25%,CD3⁺/CD8⁺细胞17%,CD3^-/CD16+56⁺细胞[自然杀伤(NK)淋巴细胞]49%, T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK淋巴细胞总和为143%。

2.三色检测 CD3⁺细胞40.32%(平均值),CD3⁺/CD4⁺细胞24.60%,CD3⁺/CD8⁺细胞14.93%,CD3^-/CD19⁺细胞54.13%, CD3^-/CD16+56⁺细胞49.72%,发现有一群CD19与CD16+56双阳性的细胞,该群细胞占淋巴细胞的46.78 %。

淋巴细胞分群检测常用于临床评价细胞免疫功能、获得性免疫缺陷综合征监测等。一般做淋巴细胞分群检测时,T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK淋巴细胞总和介于95%~105%的结果可以接受,但该病例却高达143%,重复检测该标本,得出相似结果,可以排除操作失误的可能性。观察该病例双色检测的FSC和SSC散点图,淋巴细胞分群较为清晰,门内淋巴细胞的纯度高达96%,100%的淋巴细胞被圈入门内,显示设门较为理想。C、D、E、F管的CD3⁺细胞百分比基本一致,出现这种结果,我们怀疑有双阳性细胞存在,该病例B淋巴细胞与NK淋巴细胞相加约100%,因此高度怀疑有CD19和CD16+56双阳性细胞存在。用三色检测证实了我们的猜想,有一群同时表达CD19与CD16和/或CD56的细胞,该群细胞占淋巴细胞的46.78 %。

白血病细胞中的抗原表达特点有:(1)跨系表达;(2)时相混乱;(3)抗原表达量的改变。曾有报道,将同时表达CD19和CD56作为儿童急性白血病微小残留病检测的标记之一^{[ 1]}。在正常的B淋巴细胞中,无论处于哪个阶段都不会表达非本系列的抗原,如CD56、CD13、CD65、CD15等。而白血病细胞常有抗原表达混乱的特点,CD19和CD56同时阳性本身可以作为白血病细胞区别于正常B淋巴细胞的特征。台湾学者曾在急性髓样白血病(AML)中检测到CD19/CD56双阳性细胞^{[ 2]}。成年人出现CD19与CD16+56双阳性的淋巴细胞,尚未见文献报道。因条件限制,未能区分是CD19⁺/CD16⁺或CD19⁺/CD56⁺或CD19/CD16/CD56均为阳性。

鉴于患者为50岁的男性,其他检测指标基本正常,细胞形态学检查未发现原始或幼稚淋巴细胞,但不能排除慢性淋巴细胞性白血病的可能,因为慢性淋巴细胞性白血病患者常可无病生存许多年。出现CD19与CD16+56双阳性的细胞,高度怀疑存在慢性淋巴细胞性白血病的可能性。

致谢:承蒙杭州联科公司潘中明经理提供三色试剂和技术支持,特此表示感谢。