引用本文
张莉. 检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性. 25(1): 30-32
ZHANG Li. The clinical applicability of a new DIGFA kit for detecting plasma D-dimer. Labratory Medicine, 25(1): 30-32  
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检测血浆D-二聚体的新金标斑点渗滤法试剂盒的临床适用性
张莉
上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院检验科,上海 202150

作者简介：张莉,女,1965年生,学士,副主任技师,主要从事临床免疫学研究。

摘要
目的

比较2种金标斑点渗滤法(DIGFA)试剂盒在测定D-二聚体浓度中的临床适用性。

方法

同时采用NycoCard 公司与国产奥普D-二聚体检测试剂盒(D-D DOT)对234份血浆样本进行测试,比较2种方法的一致性。

结果

D-D DOT线性范围内相关系数(r)=0.998;总批内、批间变异系数(CV)分别为10.77%和12.81%;总回收率为101.3%。配对χ2检验、Kappa检验(0.95)及Spearman系数(0.87)均显示D-D DOT与NycoCard检测结果有良好的一致性。

结论

新的DIGFA D-二聚体检测试剂盒与进口NycoCard试剂盒有良好的一致性,能够满足临床需要。

关键词: D-二聚体; 金标斑点渗滤法; 运用; 深静脉血栓; 肺栓塞
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)01-0030-03
The clinical applicability of a new DIGFA kit for detecting plasma D-dimer
ZHANG Li
Department of Clinical Laboratory, Chongming Branch of Xinhua Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 202150,China
Abstract
Objective

To compare the clinical applicability of two dot immunogold filtration assay (DIGFA) kits for detecting D-dimer.

Methods

The kits from NycoCard and Upper (D-D DOT) were used to detect D-dimer in 234 plasma samples. The concordance was compared.

Results

The linear range of D-D DOT was 0.998;its within-run and between-run coefficients of variation (CV) were 10.77% and 12.81%;its recovery were 101.3%. The results of McNemar test,Kappa value(0.95) and Spearman coefficient(0.87) indicated that two kits had excellent concordance.

Conclusions

The D-D DOT DIGFA kit has an excellent concordance to the kit from NycoCard and it can meet the needs of clinical application.

Keyword: D-dimer; Dot immunogold filtration assay; Application; Deep vein thrombosis; Pulmonary embolism

近十多年来,国内外的研究充分证实了D-二聚体检测对一些疾病的疗效观察和预后判断具有广泛的应用价值,如深静脉血栓栓塞(DVT)、肺栓塞(PE)、弥散性血管内凝血(DIC)、心血管疾病、肝脏疾病、恶性肿瘤等。D-二聚体测定的常用方法有定性和半定量的胶乳凝集试验(LATEX)及定量的酶联免疫吸附试验(ELISA)。半定量胶乳试验简便、快速,但需肉眼观察试验结果,不同观察者主观差异对结果影响较大,结果不够准确,且敏感性不高,不能满足临床需要;传统ELISA的D-二聚体定量检测,虽然检测性能尚佳,但操作较复杂,每次需要做标准曲线,繁琐、耗时,不适于紧急情况下单个样本的检测,也不能完全满足临床急诊医疗的需要[ 1]。而近年来,随着金标记技术的发展,利用金标斑点渗滤法(DIGFA)测定血浆中D-二聚体含量的优势已有所展现。该法结合了LATEX及ELISA的优点,既简便、快速(3 min),又能定量,单个或成批标本可随时检测。本研究对国产新研制的D-二聚体检测试剂盒作了基本的性能评价,并将其与挪威进口试剂盒的临床测试结果进行了比较。

材料和方法
一、仪器与试剂

1. D-二聚体检测试剂盒(D-D DOT)及配套Uppergold U2 金标斑点法定量读数仪均由上海奥普生物医药有限公司生产。另有奥普公司提供D-二聚体高值质控品及稀释液,质控品标示为D-二聚体5 mg/L。

2. 挪威NycoCard公司生产的D-二聚体单一试剂盒及配套测读仪NycoCard Reader Ⅱ。

二、标本

进行2种试剂盒比对的标本为临床收集的新鲜枸橼酸抗凝血浆,共234份。

三、方法

1. 线性评价 将高值质控品根据其标示浓度按比例精确稀释作为样本,计算其实际测试值与理论值在此范围内的线性关系。

2. 精密度评价 将浓度为0.3及3.0 mg/L的质控品作为样本,1 d内测定20次,之后每天测定2次,连续测定10 d。分别计算其批内和批间变异系数( CV)。

3. 回收率评价 将定值质控品按1∶1、1∶3、1∶9的比例混合加至新鲜健康人血浆中进行测定,每份测定3次,计算回收率。

4. 临床标本比对 同时使用国产及进口2种试剂盒对所收集的血浆样本进行测定。分别严格按照各自说明书进行操作。

四、统计学方法

利用SPSS 13.0统计软件对比对结果进行配对 χ2检验、 Kappa一致性检验和Spearman等级相关分析。

结果
一、试剂盒性能评价

1. 线性评价 用D-D DOT检测5个浓度系列稀释的样本(0.3、0.5、1.0、2.0及3.0 mg/L),每份测定3次。所获得的实际测定值与理论值的线性回归方程为: Y=0 .979 1 X + 0 .068 4, r=0.998。此结果显示,在D-二聚体浓度为0.3~3.0 mg/L,即说明书所示线性范围内,该试剂盒线性良好。

2. 精密度评价 测定2个浓度样本的20次批内和批间 CV结果见 表1。总批内及批间 CV分别为10.77%和12.81%。

表1 批内、批间 CV结果

3. 回收率评价 对按3种比例混合的样本进行测定。根据回收率=回收浓度/加入浓度×100%的方法计算,3个浓度的回收率分别为106.7%、94.4%、102.7%,总回收率为101.3%。

二、临床标本比对结果

1. 234例样本中,D-D DOT检测D-二聚体阳性率为36.3%,NycoCard试剂盒为38.0%,二者差异无统计学意义( χ2=2.25, P>0.05)。二者阳性符合率为95.5%,阴性符合率为100.0%,总符合率为98.3%。见 表2。

表2 2种试剂盒检测234例样本D-二聚体结果比较

2. 采用SPSS 13.0统计软件对2种试剂盒检测结果进行 Kappa一致性检验,得 Kappa值=0.95,D-D DOT和NycoCard试剂盒结果具有非常好的一致性。

3. 在全部234例样本中,2种试剂盒均在读数范围内(D-二聚体0.1~5.0 mg/L)的样本数共99例。采用SPSS 13.0统计软件进行Spearman分析,得Spearman系数为0.87,按照双尾检测,认为两者显著相关。

讨论

当前,D-二聚体的临床检测主要应用于排除静脉血栓栓塞(VTE),这其中包括了DVT和PE。VTE每年人群中的发病率约为71/10万,这其中约2/3为DVT,另1/3则是PE[ 2]。

静脉造影是最早应用于诊断DVT的方法,现仍是诊断DVT的金标准。但静脉造影是一种侵入性诊断方法,存在风险且价格昂贵。目前应用较多的一些非侵袭性的诊断方法仍较昂贵,且敏感性不高。国外研究资料显示,若D-二聚体检测水平正常,结合临床可有效排除DVT,不需要进一步超声检查[ 3]。若用D-二聚体在人群中大规模筛选和排除DVT,可以极大地节省时间和经费[ 4]。目前快速D-二聚体测定已作为DVT诊断的首选项目。

当前PE的症状和体征与其他多种疾病有重叠,常被误诊为其他疾病,鉴别诊断困难。肺血管造影、肺扫描并不普及。胸片、血气诊断特异性差。因此,在怀疑PE的患者中仅有不到35%的患者被真正确诊为PE。影像学诊断通常只能在大医院进行,其过程复杂[ 5]。有学者建议,临床上低度怀疑PE(如Wells积分<2)的患者加上血浆D-二聚体检测可以可靠地排除PE[ 6] 。

除VTE外,D-二聚体还是早期诊断DIC较敏感的指标。DIC发生前期,纤溶受抑,早期纤溶系统的启动以D-二聚体水平升高为主。血中D-二聚体水平检测对早期发现危重患者DIC,及时阻断其向纤溶亢进期发展有重要意义。

上述疾病理想的筛选试验应该具备快速、准确、简便的特点。而DIGFA检测D-二聚体就具备以下优点:可以单人份使用,可迅速获得测试结果,因此在基层医院也可广泛开展。这对血栓性疾病的诊断,尤其是对于低临床概率的排除性诊断具有重要的意义。

目前D-二聚体检测没有国际标准品和行业标准品,各公司的标准品不统一、不通用,通常只适合于与其配套的检测系统的自身校正。另外,由于各个检测系统所使用的免疫抗体差异较大,抗原决定簇各有不同,从而造成不同的检测方法之间数据差异很大,其阳性率、敏感性、特异性均不同,甚至对于同一个样本(枸橼酸抗凝血浆)的读数亦存在较大差异。

D-二聚体项目目前公认的敏感性在90%以上,而特异性为40%~60%左右[ 7],因此诊断疾病时,其意义主要在于阴性结果,即他是用于排除性的诊断而非确诊性的诊断[ 8]。鉴于此现状,国际上通常将其作为定性试剂盒来进行评价,除考察敏感性、特异性外,还大致包括以下3个统计学分析:配对 χ2检验、 Kappa一致性检验、Spearman等级相关系数。

配对 χ2检验考察2种检验方法的结果或2类计数资料是否有本质差异。本研究显示,2种试剂盒的测定结果差异无统计学意义。其阴性符合率达到100.0%,阴阳不符的4例病例均为NycoCard试剂盒阳性而D-D DOT阴性,对于注重阴性排除试验的D-二聚体检测项目,这样的结果显示出D-D DOT更具临床适用性。

Kappa值即内部一致性系数,是评价判断一致性程度的重要指标,取值在0~1之间[ 9, 10]。有学者将其评价阶段分为: Kappa值≥0.75两者一致性较好;0.75> Kappa值≥0.4两者一致性一般; Kappa值<0.4两者一致性较差。本研究中2种试剂盒检验结果的 Kappa值达到0.95,说明他们具有非常好的一致性。

有研究显示,针对已上市的23种D-二聚体检测试剂盒之间的比对评估,他们的Spearman等级相关系数在0.794~0.993之间[ 11]。本研究所采用的对照试剂盒NycoCard D-二聚体单一试剂盒也在其中。而D-D DOT与NycoCard试剂盒的Spearman系数为0.87,说明其与进口试剂盒间的差距并不大。

以上3项临床比对数据的统计指标和对试剂盒基本性能的评价结果均显示,D-D DOT完全能够满足临床的需要。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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